Después de fabricar las nanopartículas compuestas de puntos de carbono dorados, coloque un chip de zafiro estéril en las placas de 24 pocillos y las células de siembra con un mililitro del medio en un solo pocillo. Incubar las placas en un ambiente húmedo para lograr una confluencia del 70 al 80%. Agregue las nanopartículas compuestas de puntos de carbono dorado al pocillo individual e incube durante cuatro a seis horas.
Al final de la incubación, retire el medio de las virutas de zafiro. Enjuague suavemente las virutas con PBS y sumerja las virutas de zafiro en PBS para la detección de SERS. Para realizar el experimento SERS, encienda la computadora, el espectrómetro Raman y el láser de 785 nanómetros.
A continuación, inicie el software adjunto y realice la calibración con obleas de silicio. Haga clic en nueva medición seguida de adquisición espectral y ajuste el rango de espectro. A continuación, vaya a la pestaña de adquisición, ajuste el tiempo de exposición y la potencia del láser, y haga clic en Aceptar para iniciar una nueva adquisición espectral.
Utilice una lente de objetivo de 20X para obtener una imagen celular clara. A continuación, cambie a un objetivo de 50X. Después de seleccionar un punto en las celdas para la medición, haga clic en ejecutar para iniciar el proceso y, a continuación, guarde los espectros.
Para obtener imágenes SERS de células A549, haga clic en nueva adquisición de imágenes optimizadas, seleccione el rango que desea fotografiar y haga clic en Aceptar. Establezca la línea de corriente del borde en el centro de 785 nanómetros en 1, 200 centímetros inversos, la duración de la exposición en cinco segundos y la potencia del láser en 50%El parámetro se puede modificar según sea necesario. Haga clic en nuevo de imágenes en vivo, elija la señal a la línea de base y establezca el primer límite en 725 y el segundo límite en 1, 700. A continuación, vaya a la configuración del área, establezca los pasos adecuados y haga clic en Aceptar. Por último, haga clic en ejecutar para empezar a realizar la creación de imágenes SERS.
SERS Spectra reveló que incluso cuando la concentración de azul de metileno es tan baja como 10 a menos nueve molares, las nanopartículas compuestas de puntos de carbono de oro exhiben un excelente rendimiento de SERS en comparación con las nanopartículas de oro. Los espectros SERS adquiridos en 20 puntos mostraron una alta similitud. Un mes después de la colocación de nanopartículas compuestas de puntos de carbono de oro a cuatro grados Celsius, la actividad promedio de SERS a 950, 1, 185 y 1, 620 centímetros inversos mostró un grado de desintegración de aproximadamente 5.43%, 11.44% y 13.94% respectivamente.
Las nanopartículas compuestas de puntos de carbono dorado apenas mostraron citotoxicidad para las células A549. Se presenta el espectro medio de las células A549. Los agregados de nanopartículas compuestas de puntos de carbono de oro exhiben señales SERS obvias sin ruido de fondo en el mapeo SERS de las celdas A549.
Los espectros de diferentes puntos celulares demostraron la heterogeneidad de los componentes en varias regiones citoplasmáticas.
