Mounting the Mouse on the Live Imaging Insert for Intravital Imaging

Antes de colocar el ratón anestesiado en el inserto de imágenes en vivo instalado en la platina del microscopio invertido, pase el tubo de isoflurano con el cono de la nariz adjunto a través del soporte del tubo de esquina en el inserto. Después de enchufar la placa calefactora en el controlador que contiene una sonda de termómetro anal adjunta y encenderla, transfiera el mouse anestesiado de la cámara de inducción a la placa calefactora. A continuación, fije el cono de la nariz en el ratón.

Inserte la sonda anal en el animal y ajuste el controlador para mantener una temperatura corporal estable de aproximadamente 36 grados centígrados. Cubra el mouse correctamente colocado con una envoltura adhesiva de plástico para atrapar el calor corporal y elevar la temperatura corporal. Coloque el mouse de manera que su cabeza se alinee con el disco deslizante de la cubierta e inmovilice su oreja en el centro de la cubierta deslizante de vidrio con un clip o cinta adhesiva de metal.

Después de completar la toma de imágenes, seleccione la opción Low Flow en el vaporizador electrónico para detener la administración de isoflurano. Transfiera el mouse a una almohadilla térmica hasta que se vuelva ambulatorio. Después de retirar el disco deslizante de la cubierta, límpielo con papel para lentes y solución para lentes.

Guárdalo adecuadamente para evitar arañazos para su reutilización. A continuación, separe el tubo anestésico del soporte del inserto y desenrosque el inserto de la platina del microscopio. Las pilas Z adquiridas de tejido auditivo de ratón vivo marcado con fluorescencia mostraron una deriva mínima en los ejes x, y y z a lo largo del tiempo, lo que validó las inserciones de imágenes en vivo impresas en 3D personalizadas.

Los puntos de tiempo de una película de lapso de tiempo de tres horas de las células epidérmicas del oído de ratón mCherry positivas de un ratón macho adulto revelaron un solo plano z que permaneció enfocado durante el tiempo extendido. Se hicieron observaciones similares a partir de otra película de lapso de tiempo de tres horas de fibroblastos dérmicos de oreja GFP positivos de un ratón hembra adulto.