Para comenzar, abra la aplicación de software haciendo doble clic en el icono de un archivo ejecutable. Introduzca las secuencias de cadena gruesa y cadena ligera en los cuadros de texto debajo de la columna 1 sin espacios. En el caso de los anticuerpos biespecíficos, agregue cadenas pesadas o ligeras adicionales en el segundo conjunto de cuadros de texto debajo de la columna 2.
Deje estas casillas en blanco para los anticuerpos monoclonales con cadenas pesadas y cadenas ligeras idénticas. Marque las casillas de verificación de ciclación de terminales finales y recorte de terminales C si estas variantes de terminales de cadena pesada son aplicables. Agregue modificaciones químicas, incluido el enlazador y la carga útil para conjugados de anticuerpos-fármacos, a las cajas de modificación química de cadena pesada y ligera utilizando composiciones elementales como el cloruro de calcio.
Estas modificaciones se añadirán a la respectiva subunidad o cadena proteica. Especifique el número de enlaces disulfuro en las moléculas de proteína en el cuadro de texto marcado como número total de disulfuros. Introduzca el número de enlaces disulfuro de cadena pesada no reducidos en el cuadro de texto disulfuros de cadena pesada no reducidos y el número de enlaces disulfuro de cadena ligera no reducidos en el cuadro de texto disulfuros de cadena ligera no reducidos, en función del grado de reducción.
Si la glicosilación está presente en la cadena ligera de anticuerpos monoclonales, marque la casilla de verificación de la cadena ligera está glicosilada. Haga clic en el botón Examinar para seleccionar una carpeta de salida para el cuadro de texto de la carpeta de salida e ingrese el nombre del archivo de salida sin una extensión de archivo en el cuadro de texto sin extensión del archivo de Excel. A continuación, haga clic en el botón Enviar.
Aparecerá un mensaje de creación de informe de cálculo masivo en la pantalla y el archivo de salida se puede encontrar en la carpeta designada por el usuario. La aplicación se cerrará automáticamente. En esta tabla se resumen las composiciones químicas, las masas calculadas, las masas medidas y los errores de masa de varios anticuerpos monoclonales.
Se seleccionó un estándar de anticuerpos monoclonales disponible comercialmente para representar un anticuerpo monoclonal convencional con cadenas pesadas idénticas, cadenas ligeras idénticas y un sitio de glicosilación ligado a N en la región FC. También se eligió un anticuerpo monoclonal con una glicosilación N-ligada a una cadena ligera adicional, un anticuerpo monoclonal biespecífico y un anticuerpo monoclonal conjugado anticuerpo-fármaco para ampliar el uso de la aplicación. Los pequeños errores de masa entre las masas calculadas y las masas medidas estaban dentro de los criterios normales de aceptación de errores de masa, lo que sugiere que las masas calculadas eran precisas.
