Después de preparar al ratón para la cirugía, identifique el área objetivo, siete milímetros a la izquierda del esternón y unos siete milímetros por encima del margen subcostal. Levante la piel sobre el área identificada con fórceps y haga una incisión circular de 10 milímetros con unas tijeras de microdisección afiladas para cortar solo la piel. A continuación, retire el tejido blando sobre la caja torácica y cauterice los vasos sanguíneos principales en ambos extremos con una pluma de cauterización.
Eleve la sexta o séptima costilla con fórceps y use una sola hoja de las tijeras de microdisección romas para perforar el músculo intercostal. Ahora gire suavemente las tijeras y haga una incisión de aproximadamente 10 milímetros en el espacio intercostal evitando el contacto con el tejido pulmonar y las costillas. Libere aire comprimido en la muñeca o la mano con delicadeza para determinar la fuerza de flujo adecuada y limpiar la boquilla de residuos.
A continuación, aplique breves ráfagas de aire en la incisión para evitar causar lesiones pulmonares. Con las pinzas, levante la sexta o séptima costilla e inserte el retractor en la incisión intercostal con cuchillas paralelas a la pared torácica. Luego suelte el mango con cuidado para dejar que el retractor se abra y revele el pulmón gradualmente.
Ahora aplique dos o tres gotas de PBS estéril calentado a 37 grados sobre el tejido pulmonar expuesto para evitar que se seque. Coloque un trozo de papel de aluminio con un pequeño recorte sobre el ratón, colocándolo directamente sobre el tejido pulmonar expuesto. Asegúrese de que el recorte solo muestre el tórax abierto y el tejido cercano para la fotoconversión pulmonar específica.
A continuación, coloque una caja con un recorte sobre el mouse y papel de aluminio, asegurándose de que el recorte se alinee con el pulmón expuesto. Y coloque la lámpara de conversión de fotos directamente sobre el recorte de la caja. A continuación, active la lámpara de fotoconversión para iluminar el tejido pulmonar expuesto durante un lapso continuo de seis minutos.
Después de la conversión de fotos, apague la lámpara y limpie la caja de la lámpara y la máscara de papel de aluminio lejos del mouse. Separe el pulmón de la pared torácica descargando aire en la muñeca y luego descargue aire en la incisión torácica. Sujete firmemente el mango del retractor y apriételo para cerrar las cuchillas.
Maniobre con cuidado el retractor cerrado fuera del espacio intercostal, asegurándose de no entrar en contacto con el tejido pulmonar. A continuación, utilice la sutura de seda 5-0 para cerrar la incisión intercostal con un patrón de sutura continuo simple, asegurándose de que la costilla de ambos lados de la incisión esté incorporada. Tire de la sutura con firmeza para asegurarse de que los bordes de la herida se alineen, restableciendo la integridad de la pared torácica.
Asegure la sutura anudando el extremo cuatro veces. Recorta las colas de sutura lo más cerca posible del nudo y cierra la piel con grapas quirúrgicas. Para eliminar el exceso de aire de la cavidad torácica, inserte una jeringa de un mililitro con una aguja de calibre 28 debajo de la apófisis xifoides.
Vuelva a extraer la jeringa a aproximadamente un mililitro. Retire la jeringa del ratón y descargue el aire. Se muestran imágenes de Dendra2 expuesto que expresa metástasis pulmonares antes de la exposición a la luz azul.
La exposición de Dendra2 que expresa metástasis pulmonares a la luz azul mostró que la exposición de seis minutos produjo la señal más brillante en el canal fotoconvertido tanto en muestras ex vivo como in vivo. Se identificaron células fotoconvertidas y no fotoconvertidas en los tres tipos de tejido de ratones que se sometieron a cirugía con exposición a la luz azul. Solo se encontraron células tumorales no fotoconvertidas en los tejidos de ratones que se sometieron a cirugía sin exposición a la luz azul.
