Retire el PBST y sumerja los cadáveres de larvas de drosophila fijados con paraformaldehído en un agente bloqueador durante 40 minutos a temperatura ambiente. Reemplace el agente bloqueador con 200 microlitros del anticuerpo primario diluido con 0.2% PBST. Deje que las larvas incuben a cuatro grados centígrados durante la noche.
Al día siguiente, lavar las larvas con 0,2% PBST durante 10 minutos. A continuación, retire el PBST del tubo y agregue 200 microlitros de anticuerpo secundario diluido. Incubarlo a temperatura ambiente durante 1,5 horas en la oscuridad.
Introducir un colorante nuclear como el yoduro TO-PRO R 3 en el tubo de incubación durante 30 minutos mientras tiñe los microtúbulos en la oscuridad. Por último, enjuague el anticuerpo secundario y el colorante nuclear con 0,2% PBST durante 10 minutos.
