Culture of bEnd.3 Cells and Cell Viability After CoCl2 Treatment

Para comenzar, prepare un medio de cultivo celular DMEM que contenga FBS, penicilina y estreptomicina. Además, prepare una solución madre de cloruro de cobalto de 100 milimolares agregando 1,30 miligramos de cloruro de cobalto a 100 microlitros de DMSO. A continuación, siembre un mililitro de células BEND3 en una placa de cultivo de 100 mililitros que contenga medio DMEM y cultive a 37 grados centígrados en una atmósfera humidificada de dióxido de carbono al 5%.

Cambie el medio cada dos o tres días y subcultive las células dos veces por semana. Después de que las células BEND3 crezcan hasta el 80% de confluencia, digiera las células con tripsina al 0,25% durante 30 segundos. Cuente las celdas usando un contador de celdas y haga una suspensión de densidad siete veces 10 a la cuarta celda por mililitro.

Luego, siembre 100 microlitros de esta suspensión celular en una placa de 96 pocillos para la adhesión celular. A continuación, lavar las células con PBS y añadir 100 microlitros de medio de cultivo que contenga cloruro de cobalto. Cultive las células durante 24 horas.

Después de la incubación, retire el medio y lave con PBS. A continuación, agregue 100 microlitros de solución CCK-8. Incubar las placas a 37 grados centígrados durante una hora, luego medir la absorbancia a 450 nanómetros con un lector de microplacas.

Calcule la viabilidad celular inducida por el cloruro de cobalto de acuerdo con esta fórmula. Seleccione la concentración con una diferencia significativa en la reducción de la viabilidad celular en comparación con el grupo control. Se analizó la viabilidad de células BEND3 tratadas con diferentes concentraciones de cloruro de cobalto mediante CoCl2.

Los resultados indicaron que 300 micromolares de cloruro de cobalto mostraron una citotoxicidad in vitro significativa.