Comience preparando una solución madre de bicelle al 10% que contenga los lípidos y el detergente. Para hacerlo, tome el lípido preseco, que es una mezcla de cinco moles por ciento de colesterol y 95 moles por ciento de DMPC, y agréguele la solución de detergente CHAPSO en agua desionizada. Con un sonicater de baño de agua, vuelva a suspender la mezcla de detergente lipídico sonicándola en agua helada a potencia continua hasta que la solución esté clara.
A continuación, con la ayuda de un filtro centrífugo de 0,2 micras, retire los componentes no disueltos. A continuación, trabajando sobre el hielo, combine la solución madre de bicelle resultante con la muestra de proteína preparada previamente en una proporción volumétrica de uno a cuatro. Incuba la mezcla de bicelle proteica en hielo durante 30 minutos.
Para la cristalización, en una placa de 48 pocillos mezcle 0,5 o un microlitro de la mezcla de bicelle proteica con un volumen igual de solución de depósito de cristalización. A continuación, configure la cristalización en un modo de difusión de vapor de gota colgante utilizando la placa de 48 pocillos e incube la configuración de cristalización a 20 grados centígrados. Al día siguiente, revise las bandejas de cristalización para asegurarse de que el cubreobjetos esté sellado correctamente.
Verifique el crecimiento de los cristales al menos una vez al día con un microscopio estereoscópico de mesa equipado con un polarizador. Por último, remoje los cristales de proteína en malato de sodio 0,2 molar y congélelos rápidamente en bucles criogénicos de 50 o 100 micrómetros utilizando nitrógeno líquido. Los cristales maduros que eran adecuados para la recolección de datos generalmente aparecían dentro de una o dos semanas y generalmente tenían las dimensiones de 50 micras por 100 micras por dos micras.
