Preparation of CNS Tissue for Isolating Cells in EAE Mice

Comience colocando al ratón en posición supina y fijando las extremidades con agujas. Aplicar etanol al 75% en la parte delantera del cuerpo del animal. Haz una sección longitudinal a través de la piel y la fascia en el abdomen y el tórax.

Corta las costillas paraesternales y dobla el tórax para tener libre acceso al corazón. Fija el tórax doblado hacia arriba con agujas. Abra la aurícula derecha con unas tijeras.

Con una cánula, aplique 20 mililitros de PBS de una sola vez en el ventrículo izquierdo para eliminar la sangre a través de la aurícula derecha incisa. Haz una sección longitudinal cortando la piel en la parte superior de la cabeza del ratón para exponer el cráneo y desplaza la piel alrededor de la cabeza con unas pinzas. Incidir el cráneo con la ayuda de una tijera a lo largo de la sutura sagital.

Inserte la punta de las tijeras a lo largo de la línea de incisión para abrir la calota. Retire las partes restantes de la calota con fórceps para que el cerebro quede completamente expuesto. Retire el cerebro con cuidado y colóquelo en una matriz cerebral murina.

Corta el cerebro en rodajas sagitales de un milímetro de grosor con una cuchilla de afeitar. Con la ayuda de unas tijeras, corta la columna vertebral justo por encima de la cresta ilíaca. Inserte una aguja de calibre 20 conectada a una jeringa de 20 mililitros que contenga PBS de un solo uso en el canal espinal.

Enjuague la médula espinal fuera del canal espinal desde la caudal hasta la craneal. Corta la médula espinal en segmentos de 0,5 centímetros de largo con un bisturí. Almacene la suspensión de células del SNC que consiste en el cerebro y la médula espinal correspondiente en una placa de Petri que contenga tres mililitros de DPBS frío.