Para comenzar, tome un asa de inoculación para elegir una colonia monoclonal de candida albicans de una placa de YPD. Transfiera la colonia a cinco mililitros de medio líquido YPD, suplementado con 50 microgramos por mililitro de carbenicilina. Agite las células a una velocidad constante de 220 RPM a 30 grados centígrados durante la noche.
A continuación, centrifugar la suspensión celular a 400 g durante cinco minutos a temperatura ambiente. Después de desechar el sobrenadante, vuelva a suspender las células en una solución salina normal y ajuste la concentración celular haciendo coincidir la turbidez de la suspensión celular con un estándar de McFarland de 0,5. Para crear una solución salina normal al 0,9%, pesa 0,9 gramos de cloruro de sodio y disuélvela en 100 mililitros de agua desionizada.
A continuación, autoclave los instrumentos quirúrgicos en alambre de aleación de titanio y níquel a 121 grados centígrados durante 30 minutos antes de su uso. A continuación, dividió aleatoriamente 30 ratones machos C57BL/6 en un grupo de control, un implante en blanco y un grupo de PJI. Después de anestesiar a los ratones, retire el vello de la extremidad trasera izquierda y use yodo para desinfectar el área afeitada.
Verifique la profundidad de la anestesia observando la pérdida del reflejo de enderezamiento. En el caso de los ratones del grupo de control, no administrar ningún tratamiento. Para los ratones en el grupo de implante en blanco y PJI, use una cuchilla número 10 para crear una incisión longitudinal de cinco milímetros en la rodilla de la extremidad trasera izquierda para exponer las articulaciones para procedimientos adicionales.
Ahora, inserte una aguja de jeringa estéril para crear un orificio de cinco milímetros de largo en el canal intramedular femoral. Inserte con cuidado un alambre de aleación de níquel titanio en el orificio antes de cortarlo con unas tijeras. A continuación, administre dos microlitros de medio YPD gota a gota a lo largo del alambre de aleación de níquel y titanio para los ratones del grupo de implantes en blanco.
Con una sutura de nylon, cierre la herida capa por capa. A continuación, inocule dos microlitros de células de Candida albicans en el espacio articular de ratones a lo largo del alambre de aleación de níquel y titanio en el grupo PJI. Con una sutura de nylon, cierre la herida capa por capa.
Aloja a los ratones con libre acceso a agua y comida durante 14 días.
