Para preparar la solución de tinta biológica, mezcle una cantidad adecuada de suspensión celular C3A con la solución gelMA esterilizada. Prestain los esferoides de células C3A con una solución seguidora de dos células micromolares a 37 grados durante 20 minutos. Para lavar las células, primero, elimine la supernatina centrifugando y luego agregue medio de cultivo celular fresco.
Agregue al menos dos mililitros de tinta biológica en la cámara del dispositivo acústico esterilizado. Encienda el generador de funciones y el amplificador de potencia para iniciar el accionamiento de cada transductor PZT para generar una matriz 3D de agregados de celdas. Reticulación de la tinta biológica con luz azul durante 30 segundos para crear andamios de hidrogel 3D, encapsulando acústicamente los agregados celulares ensamblados.
A continuación, transfiera con cuidado el andamio de hidrogel 3D de la cámara a una placa de Petri. Córtelo en trozos pequeños con una navaja limpia y luego agregue el medio de cultivo celular en la placa de Petri. Incubar los esferoides de las células C3A en diferentes puntos de tiempo de cultivo en un mililitro de PBS que contenga un microlitro de calcio am y dos microlitros de yoduro de propidio durante 15 minutos a 37 grados centígrados.
Enjuague la muestra incrustada en andamios de hidrogel dos veces con PBS. Para los esferoides recuperados, realice la centrifugación a 200 G durante cinco minutos y lave dos veces con PBS. Usando un microscopio de fluorescencia, observe los esferoides y capture las imágenes.
Los agregados celulares se dispusieron en el patrón regular de matriz de puntos 3D con una señal fluorescente verde. Los agregados de gelMA C3A ensamblados se integraron gradualmente y formaron esferoides apretados al tercer día, acompañados de un aumento en el diámetro del esferoide. La viabilidad de los esferoides celulares se mantuvo buena antes del tercer día, pero disminuyó ligeramente después de una semana de cultivo.
Los esferoides liberados mantuvieron una buena morfología esférica con una distribución de tamaño estrecha junto con una viabilidad y expresión deseables de albúmina.
