Para empezar, coloque el ratón anestesiado en decúbito supino en el sistema de imágenes con el hocico en un cono nasal. Coloque el mouse de manera que la parte inferior de las piernas esté extendida y las rodillas apunten ligeramente en el aire. Abra el software compatible en la computadora del sistema de imágenes.
Desde el panel de control de adquisición, haga clic en inicializar para calentar el sistema y espere hasta que la luz de temperatura se vuelva verde. A continuación, haga clic en Asistente de imágenes. Después de hacer clic en el par de filtros, asegúrese de que la configuración esté configurada para la epiiluminación.
A continuación, pulse siguiente. En la lista desplegable, busque la sonda de interés para seleccionar la configuración correcta de excitación y emisión, y haga clic en siguiente. Elija el mouse para el sujeto de la imagen.
En los parámetros de exposición, asegúrese de que los ajustes automáticos estén marcados y de que las opciones de fluorescencia y fotografía estén seleccionadas. En la lista de verificación del campo de visión, seleccione D a 22,6 centímetros y presione siguiente. Después de confirmar que todos los ajustes son correctos, pulse el botón Adquirir secuencia y confirme que la imagen ha recibido una exposición adecuada.
Para analizar la imagen, coloque un círculo de región de interés de tamaño uniforme sobre cada articulación de la rodilla en la imagen en blanco y negro. Calcule la eficiencia radiante total y la eficiencia radiante promedio para cada articulación de la rodilla. Si la eficiencia radiante también se calcula en las piernas contralaterales, normalice los datos dividiendo la medición de la eficiencia radiante de la pierna lesionada por la de la pierna contralateral.
Las imágenes de reflectancia de fluorescencia mostraron una actividad de proteasa significativamente mayor en las articulaciones lesionadas de los ratones en comparación con los ratones no lesionados. Las articulaciones lesionadas mostraron un 43% más de eficiencia radiante promedio en comparación con las articulaciones contralaterales y las articulaciones de ratones no lesionados. Se observó una eficiencia radiante entre un 30 y un 80% mayor en las articulaciones lesionadas, en comparación con las articulaciones contralaterales a las dos semanas después de la lesión.
Por el contrario, las articulaciones operadas quirúrgicamente exhibieron un 300% más de eficiencia radiante en la cuarta semana en comparación con las articulaciones contralaterales, lo que sugiere un notable efecto de confusión de la cirugía.
