Para extraer los datos del ensayo Bradford de las imágenes de la microplaca grabadas con la cámara del smartphone, descargue la imagen del software J y el complemento ReadPlate disponible como archivo de texto. Después de abrir la imagen J, haga clic en Plugins seguido de Install y seleccione el archivo de texto del plugin ReadPlate descargado. Establezca los parámetros de medición haciendo clic en Analizar, y luego Establecer medidas y marcando las opciones: Área, Desviación estándar, Valor de gris mínimo y máximo, Valor medio de gris, Valor de gris modal.
En la parte inferior de la ventana, establezca Redirigir en Ninguno y Decimal en cero a 9 como 3. Vaya a Archivo. Haga clic en Abrir y seleccione la imagen de la microplaca tomada con el teléfono inteligente.
Vaya a Plugins seguido de ReadPlate. Lea las instrucciones y, a continuación, haga clic en Aceptar. Seleccione el Número de pozos como 96. Usando la herramienta de selección rectangular cargada automáticamente por el complemento, haga un rectángulo que comience en el centro del pozo A1 y termine en el centro del pozo H12, luego haga clic en Aceptar. Seleccione el canal azul y haga clic en Aceptar. A continuación, confirme los parámetros predeterminados haciendo clic en Aceptar. Compruebe si el software delineó un área dentro de cada pozo y si las áreas seleccionadas no cubren áreas con sombras o reflejos anormales.
Una vez marcado, haga clic en Aceptar. Guarde los resultados antes de repetir lo mismo para el canal verde. Calcule la relación entre azul y verde utilizando el modo de cada color. Los datos de color RGB obtenidos automáticamente a partir de la imagen de una microplaca mostraron el aumento típico en los valores de azul y una disminución en los valores de rojo y verde para el estándar BSA.
Además, los datos de color extraídos de la imagen reflejaron con precisión las lecturas de absorbancia registradas a 450 y 590 nanómetros. Se encontró que la curva estándar obtenida con los datos de color extraídos que representan la señal frente a la concentración de BSA era lineal como se esperaba. Se obtuvo una relación lineal entre la dilución de la muestra y la señal tanto para las lecturas de absorbancia como para los datos de color extraídos en dos muestras de proteínas diferentes.
Para ambas muestras de proteínas, algunas de las diluciones no estaban dentro del rango lineal de la curva estándar. Sin embargo, después de ignorar esos puntos, los niveles de proteína calculados utilizando datos RGB para ambas muestras coincidieron con los calculados utilizando las lecturas de absorbancia.
