Para empezar, recubra la membrana de la plataforma de cultivo celular reconfigurable ensamblada con cinco microgramos por centímetro cuadrado de fibronectina durante una hora a temperatura ambiente para mejorar la adhesión celular. A continuación, con una pipeta p200, aspire la solución de recubrimiento. Coloque la plantilla de patrones en el pozo del módulo central.
Agregue medios celulares al pocillo y al canal inferior del dispositivo. Siembre células endoteliales de la vena umbilical humana en el pocillo. Coloque el dispositivo en una placa de Petri.
Agregue una tapa de tubo cónico de 15 mililitros que contenga agua desionizada a la placa de Petri para mantener la humedad local. Transfiera la configuración de la placa de Petri a la incubadora. Para cultivar las células bajo flujo, se procede a reconfigurar la plataforma de pozo abierto al modo microfluídico.
Para ello, llene los reservorios y tubos con medios de crecimiento de células endoteliales. Coloque la carcasa inferior en la platina de muestra. Inserte el módulo de núcleo de pozo abierto en la carcasa inferior, luego retire la plantilla, aspire el medio celular del pocillo del módulo y coloque el módulo de flujo en el pozo.
A continuación, coloque la carcasa superior para sellar el módulo de flujo en el pozo del módulo central. Conecte las puntas dispensadoras de entrada y salida a los puertos del módulo de flujo. Ponga en marcha la bomba peristáltica para introducir el flujo de fluido en el sistema.
Detenga la bomba cuando se alcance el tiempo deseado para la exposición al flujo. Retire las puntas dispensadoras de entrada y salida, luego retire la carcasa superior. Retire suavemente el módulo de flujo del pozo con unas pinzas.
Finalmente, agregue 100 microlitros de medio celular al pocillo antes de realizar el ensayo deseado. Las células cultivadas bajo flujo, alineadas a lo largo de la dirección del flujo, mientras que las células cultivadas sin flujo permanecieron orientadas aleatoriamente. La exposición de las células a un estrés puro dio lugar a la regulación positiva del factor 2 similar a Kruppel y la óxido nítrico sintasa endotelial, que desempeñan funciones críticas en los vasos sanguíneos sanos.
