Análisis de imágenes de campo claro e imágenes de fluorescencia de las secciones cerebrales de ratón para microscopía electrónica y de luz correlativa posterior a la inclusión de Epon

Para empezar, capture las imágenes de campo claro y fluorescentes del tejido cerebral del ratón que expresa mScarlet. Localice los datos sin procesar para crear un mapa de navegación de varias imágenes de campo claro de diferentes campos de visión en ImageJ. A continuación, abra ImageJ, navegue por los complementos, haga clic en la costura y seleccione la costura de cuadrícula o de colección.

Haga clic en Escriba serpiente de cuadrícula por columna, seleccione Orden hacia arriba y hacia la izquierda y haga clic en Establecer tamaño de sector. Navegue hasta seleccionar la ruta de datos y haga clic en establecer nombre de archivo, seguido de comprobar la fusión de pantalla. Para importar imágenes secuenciales de campo claro de una celda específica, haga clic en archivo y seleccione importar, seguido de secuencia de imágenes.

Para la proyección de intensidad de suma de estas imágenes, vaya a imagen, seleccione pilas, haga clic en Proyección Z y, a continuación, haga clic en sectores de suma. A continuación, seleccione editar y haga clic en invertir para invertir la imagen de proyección de suma de intensidad y mejorar la visibilidad de las nanopartículas de oro. A continuación, importe imágenes secuenciales de fluorescencia.

Para crear una imagen de proyección de suma intensidad, haga clic en imagen y seleccione pilas. A continuación, vaya a la proyección Z, haga clic en la suma de los sectores y guarde las imágenes en formato TIF. Abra las imágenes de proyección de suma de intensidad de las imágenes de campo claro y de fluorescencia.

Vaya a la imagen, seleccione el color y haga clic en fusionar canales para fusionar la proyección de suma de intensidad de la imagen de campo claro con la imagen de fluorescencia. A continuación, seleccione la imagen y haga clic en el tipo, seguido del color RGB para convertir el formato de la imagen compuesta a RGB. Las nanopartículas de oro aparecerán verdes y la proteína fluorescente aparecerá roja.

A continuación, guarde la imagen como un archivo TIF.