1 Para empezar, obtenga el tejido tumoral2 de los pacientes y procéselo con un picador. 3 Incline la placa de Petri que contiene el tumor 4 picado hacia arriba a 45 grados, y retire con cuidado 2,5 mililitros 5 del medio H-GPSA. 6 Para lavar los trozos tumorales, agregue dos mililitros 7 de tampón de lisis de glóbulos rojos e incube en un agitador orbital 8 a baja velocidad.
9 Luego, deseche el tampón de lisis por completo. 10 A continuación, agregue cuatro mililitros de medio organoide derivado del paciente 11 a las piezas de tejido, 12 y transfiera los trozos de tejido a una placa de seis pocillos de fijación ultra baja 13. 14 Incuba la placa en un agitador orbital 15 durante dos a cuatro semanas.
16 Cada dos días, cambie la mitad del medio gastado 17 por un medio organoide fresco precalentado derivado del paciente. 18 Para prevenir la hipoxia tisular, 19 transfiera los organoides derivados del paciente 20 a una placa de Petri de vidrio estéril 21 y observe la morfología del tejido bajo un microscopio. 22 Luego, con un bisturí, corta el pañuelo adhesivo.
23 Organoides derivados de pacientes obtenidos mediante el método de picado, 24 alcanzaron la forma redondeada deseada en una semana 25 en comparación con los cortados manualmente. 26 Y el número de organoides formados 27 fue significativamente mayor utilizando este método.
