Preparación de células electrocompetentes para lograr la expresión génica de una sola copia en una cepa bacteriana deficiente en eflujo

Para comenzar, coloque todos los tubos de microfuga estériles de 1,5 mililitros y las cubetas de electroporación estériles en hielo. Luego coloque la botella de agua estéril, que se almacenó a cuatro grados centígrados, sobre hielo. Transfiera 1,5 mililitros del cultivo bacteriano durante la noche a uno de los tubos de microfuga de 1,5 mililitros y centrifugue a 13.000 g durante dos minutos para granular las células.

Con una pipeta de un mililitro, elimine todo el sobrenadante sin alterar el gránulo celular. Añadir otros 1,5 mililitros de cultivo bacteriano en el mismo tubo de microfuga, centrifugar a 13.000 g durante dos minutos y retirar el sobrenadante. Agregue un mililitro de agua helada y estéril al gránulo de la celda y vuelva a suspenderlo con un pipeteo suave hasta que el gránulo ya no se asiente en el fondo del tubo de microfuga.

Centrifugar las células resuspendidas a 13.000 g durante dos minutos y retirar con cuidado el sobrenadante con una pipeta de un mililitro. Vuelva a suspender suavemente el gránulo de celda final en 200 microlitros de agua estéril helada y transfiera 100 microlitros de la suspensión celular final al segundo tubo de microfuga helado de 1,5 mililitros.