Después de cultivar un Aspergillus flavus NRRL 3357 aflatoxigénico en una barrena de dextrosa para patatas durante seis días a 30 grados centígrados, eluir las esporas de hongos del tubo de ensayo con 10 mililitros de agua que contenga Tween 20. Agite el tubo de ensayo durante 20 segundos. Filtre la suspensión de esporas de hongos a través de lana de vidrio colocada en un embudo y use el filtrado en vórtice para la dilución.
Diluir una alícuota de 100 microlitros de la suspensión filtrada con 9,9 mililitros de agua. Después del vórtice, cuente las esporas con un hemocitómetro. Usando la fórmula en pantalla, calcule el volumen de agua necesario para diluir un volumen de la suspensión original desde la inclinación hasta 1000 esporas por microlitro.
Agregue un volumen de la suspensión original a la cantidad de agua calculada. A continuación, rompa suavemente las vainas de maní y retire la cáscara. Coloque las semillas en un vaso de precipitados estéril.
Agregue una solución de peróxido de hidrógeno al 0,05% hasta que el vaso esté lleno al 70%, permitiendo que las semillas absorban agua durante tres horas. Decantar la solución de peróxido de hidrógeno de las semillas y agregar aproximadamente tres veces la cantidad de mezcla de agua con etanol al 80% para cubrir las semillas. Incubar durante un minuto.
Luego enjuague las semillas dos veces con volúmenes iguales de agua destilada estéril. Añada el volumen quíntuple de la solución de peróxido de hidrógeno al 3% al vaso de precipitados y déjelo reposar durante cinco minutos. Después de decantar la solución de peróxido de hidrógeno, enjuague las semillas dos veces con volúmenes iguales de agua estéril.
Coloque un papel de filtro de 90 milímetros de diámetro en la tapa y humedezca el papel con un mililitro de agua estéril. Coloque la tapa en el plato. Coloca las semillas sobre una toalla de papel estéril.
Con unas pinzas, retira la piel de la semilla. Coloque las semillas sin piel rápidamente en la placa de Petri para evitar la deshidratación. Corta aproximadamente un tercio de la semilla que contiene el eje embrionario.
Divida la semilla en cotiledones y, con una broca afilada, perfore aproximadamente de 1,5 a dos milímetros de profundidad en el centro del lado exterior de cada cotiledón. Coloque de cuatro a seis piezas perforadas de las semillas en un plato de barrena al 1,5%. Con una pipeta de 10 microlitros, añada dos microlitros de la suspensión de esporas en la cavidad perforada de cada medio trozo de cotiledón.
Después de cubrir el plato con una tapa, incubar a 30 grados centígrados sin luz durante 72 horas.
