Para empezar, libera al ratón inyectado con azul de bromofenol del marco estereotáxico. Después de la anestesia, asegure el ratón en una tabla de espuma con cinta adhesiva. Haga una incisión de uno a dos milímetros en el apéndice auricular derecho.
Inserte una aguja de infusión en el ventrículo izquierdo. Infundido 20 mililitros de solución salina preenfriada, seguida de 20 mililitros de solución helada de paraformaldehído al 4%. Ahora haga una incisión a lo largo de la línea media desde el cuello hasta la nariz para quitar la piel y exponer el cráneo.
Use fórceps o tijeras para eliminar el músculo residual del cráneo. Coloque la punta de una hoja de la tijera fina entre el foramen magnum y el cerebro con un borde afilado hacia el hueso en el extremo rostral de la sutura sagital media. Deslice y corte suavemente el cráneo a lo largo de la sutura sagital media.
Use fórceps para extirpar el cráneo, exponiendo el cerebro. Después de encender el criostato de micrótomo rotatorio, ajuste la temperatura de la cámara a menos 20 grados centígrados. Vierta un poco de temperatura de corte óptico, o compuesto OCT, para cubrir la superficie del disco de muestra de manera uniforme.
Coloque el disco de muestra en la cámara criogénica y deje que la OCT se solidifique. Fije el disco a la cabeza de la muestra. A continuación, acerque la cuchilla al bloque y recorte el bloque OCT para formar un plano paralelo al disco.
Con una cuchilla de afeitar, corte el cerebro en dirección coronal lejos del sitio de inyección, en un molde de corte de cerebro. Coloque el tejido cerebral que contiene el sitio de inyección, con el lado cortado hacia abajo, en el plano OCT. Vierta OCT en el cerebro y coloque el disco en la cámara criogénica, permitiendo que el bloque de muestras se solidifique.
Recorte el bloque de muestras hasta que se acerque la región objetivo y haga varias secciones desde el nivel del sitio de inyección. Use un pincel de escritura pequeño y frío para recoger las rodajas de cerebro coronal en una placa de seis pocillos que contenga PBS a temperatura ambiente. Con un cepillo, recoja las secciones de cerebro de la placa de seis pocillos y colóquelas en un portaobjetos.
Después del secado, visualmente, observe la región inyectada en las secciones del cerebro.
