Preparación de muestras y mezclas maestras para la medición de la longitud de los telómeros mediante PCR cuantitativa multiplexada monocromática (MMqPCR)

Comience agregando muestras de ADN genómico extraídas de células mononucleares de sangre periférica a las tiras de PCR A, B y C respectivamente. A continuación, vórtice la alícuota de ADN controlada descongelada durante 30 segundos. Después de centrifugar brevemente el tubo, aspire todo el volumen en el primer tubo de la tira de tubo de PCR de curva estándar.

A continuación, agregue 70 microlitros de agua de grado PCR en el segundo a través de los ocho tubos de la tira de PCR de curva estándar. A continuación, vuelva a suspender el ADN de control en el primer tubo y aspire 70 microlitros en el segundo tubo. Espere 30 segundos y vuelva a suspender la solución en el segundo tubo.

Recoja los reactivos de la mezcla maestra y deje que alcancen la temperatura ambiente en la campana de PCR. A continuación, añada un microlitro de la alícuota verde cibernética a la alícuota del búfer. Agita todas las alícuotas durante 10 segundos y centrifugalas durante cinco segundos.

A continuación, añada las cantidades especificadas de todos los reactivos y cebadores de la mezcla maestra en el tubo de betaína de cinco mililitros. Después de sacar la ADN polimerasa a menos 20 grados centígrados, pórtice durante 10 segundos y luego centrifugue durante cinco segundos. Una vez centrifugado, agregue lentamente 128 microlitros a la mezcla maestra.

Agita el tubo de mezcla maestra de cinco mililitros durante 30 segundos y luego déjalo a un lado.