Extracción de tejido adiposo del epidídimo de ratón y aislamiento de células madre para la caracterización funcional y por citometría de flujo

Para comenzar, coloque un ratón sacrificado en un tablero de corcho con el lado ventral hacia arriba. Con unas pinzas, levante la piel afeitada en el centro del abdomen y haga una incisión con unas tijeras estériles. Corta la piel para separarla del peritoneo.

A continuación, levanta la capa peritoneal y córtala. Con un nuevo juego de pinzas y tijeras estériles, agarre, levante y corte suavemente todo el tejido adiposo del epidídimo ubicado por encima de los testículos. Coloque la grasa extirpada en un tubo cónico estéril de 50 mililitros que contenga medio basal en hielo.

A continuación, lave el tejido del epidídimo con PBS. Con pinzas estériles, transfiera el tejido adiposo del epidídimo a un tubo que contenga de 15 a 20 mililitros de solución digestiva. Corta el tejido en fragmentos con unas tijeras estériles.

A continuación, incubar los fragmentos de tejido a 37 grados centígrados durante una hora. Diluir la muestra en un volumen igual de medio basal para inactivar la colagenasa. Centrifugar la suspensión a 250 g durante 10 minutos a cuatro grados centígrados.

Después de desechar el sobrenadante, vuelva a suspender el pellet en un mililitro de medio basal. A continuación, vea el pocillo de una placa de seis pocillos que contiene tres mililitros de medio basal con células aisladas. Incubar las células durante la noche a 37 grados centígrados con un 5% de dióxido de carbono.

Al día siguiente, agregue tres mililitros de medio basal a las células lavadas con PBS. Las células extraídas del tejido adiposo mostraron coincidencias con la morfología de las células madre mesenquimales.