Diferenciación de células madre derivadas del tejido adiposo de ratón para la investigación terapéutica

Para realizar la caracterización funcional de las células madre derivadas del tejido adiposo de ratón por diferenciación osteogénica, primero se deben separar las células utilizando tripsina EDTA. Recoja las células tripsinizadas en un tubo cónico. A continuación, coloque las células en los pocillos de una placa de seis paredes con medio basal.

Incubar las placas a 37 grados centígrados bajo un 5% de suplementación de dióxido de carbono. Después de 24 horas, reemplace el medio con medio osteogénico. A continuación, tiñe las células con tinción de Von Kossa para evaluar los nódulos mineralizados.

Lave las células dos veces con PBS después de aspirar el medio. Fije las celdas en dos mililitros de etanol al 70% durante la noche a temperatura ambiente. A continuación, agregue dos mililitros de solución de nitrato de plata al 5% en los pocillos.

Después de lavar las células con agua destilada, incubar las células en dos mililitros de tiosulfato de sodio al 5% durante cinco minutos. Contratiñir las células lavadas con dos mililitros de eosina durante 40 segundos. Después de lavar la mancha, coloque la placa bajo un microscopio óptico para ver las células de la mancha.

Las células madre derivadas del tejido adiposo mostraron multipotencia para diferenciarse en osteoblastos, adipoblastos y condroblastos. La tinción de Von Kossa mostró la presencia de nódulos mineralizados característicos de los osteoblastos. Las células adipogénicas mostraron la presencia de vacuolas lipídicas en el citoplasma de las células madre, mientras que la tinción con azul alcián reveló la presencia de glicosaminoglicanos en la matriz extracelular.