Imágenes de dos fotones de un injerto de pulmón de ratón para estudiar la dinámica celular y las interacciones en tiempo real

Para comenzar, coloque un ratón intubado con una toracotomía abierta en una placa base de la cámara de imágenes con el tórax izquierdo abierto hacia arriba. Con cinta de seda, asegure el ratón sobre su cara, patas delanteras y cola. Aplique pegamento en la parte inferior del cubreobjetos unido a la placa superior.

A continuación, baje la placa superior hasta que el cubreobjetos entre en contacto con el pulmón, permitiendo que el pegamento toque la superficie del pulmón. Sostenga el cubreobjetos contra el pulmón. Infle el pulmón durante uno o dos segundos, de modo que el área de pegamento se adhiera al tejido circundante.

Coloque una tuerca de mariposa sobre cada perno y asegure la placa superior. Para obtener imágenes de dos fotones, coloque toda la cámara de imágenes con el mouse en una platina de microscopio. Utilice filtros dicroicos para separar las señales del reportero GFP, los puntos Q y el colágeno genera la señal SHG.

A continuación, ajuste un láser de pulso de femtosegundos de zafiro de titanio a una longitud de onda de excitación de 890 nanómetros a la potencia más baja posible. Aplique un mililitro de agua sobre el cubreobjetos de la placa superior. Ahora baje el objetivo de inmersión en agua en el agua y concéntrese en la superficie del pulmón.

Encienda el calentador de la placa base, manteniendo la temperatura entre 35 y 37 grados centígrados. Adquiera pilas de imágenes con el software de adquisición de su elección. A las 24 horas después del trasplante, había más neutrófilos en el pulmón en relación con dos horas después del trasplante.