Reviviendo cultivos de Sulfolobus acidocaldarius para la experimentación de evolución de la temperatura

Para comenzar, use un quemador bunsen para calentar cuidadosamente un alambre de acero romo. Perfora la tapa de un tubo de microcentrífuga de dos mililitros para crear un agujero de un milímetro de ancho. Coloque los tubos perforados en un recipiente esterilizable en autoclave para su esterilización.

Una vez que los tubos se hayan esterilizado y enfriado en autoclave, llénelos con 1,5 mililitros de BBM+Now precalentado. Utilice una punta de pipeta para raspar entre 50 y 60 miligramos del cultivo de Sulfolobus acidocaldarius de una reserva de glicerol. Transfiera el inóculo a los tubos llenos de BBM+. Mantenga un tubo sin inocular con BBM+ como control negativo.

Para evitar que los aerosoles se escapen de la tapa del tubo perforado, coloque una membrana permeable al gas tolerante al calor en la parte superior de la tapa. Coloque los tubos inoculados en un termomezclador para la inoculación. Una vez que los cultivos hayan alcanzado la densidad óptica requerida, centrifugar los tubos a 5.000 G durante dos minutos a temperatura ambiente.

A continuación, pipetea el sobrenadante para desecharlo. Agregue 1,5 mililitros de BBM+ tibio al pellet y vuelva a suspender el pellet celular en el medio. Se encontró que el crecimiento fue similar al comparar la incubación con termomezcladores con la de las incubadoras convencionales.