Para comenzar a incubar los cultivos ancestrales revividos y evolucionados a temperatura de Sulfolobus acidocaldarius a las temperaturas finales. Una vez completada la incubación, mida sus densidades ópticas a 600 nanómetros. A continuación, agregue 1,5 mililitros de BBM plus en seis juegos de siete tubos para cada cultivo.
Luego agregue 15 microlitros de cada cultivo en los seis juegos de tubos. Ajuste tres termobatidoras a 75 grados centígrados y tres termobatidoras a 65 grados centígrados. Coloque los tubos en el termomezclador correspondiente a la temperatura y replique ID. Después de una incubación de 48 horas, transfiera 200 microlitros de cada cultivo en una placa de 96 pocillos.
Mida la densidad óptica con un espectrofotómetro. Por último, trace y analice los datos con software estadístico. Los linajes de la condición constante de 75 grados Celsius aumentaron en OD600 desde un rango inicial al final del experimento.
En contraste, los linajes del tratamiento constante de 65 grados Celsius mostraron una caída. Las poblaciones en el tratamiento de descenso de temperatura aumentaron desde la densidad óptica inicial hasta transferir seis, luego mostraron una disminución constante.