Para comenzar, agregue dos mililitros de tampón de digestión a un vial de transporte de cinco mililitros que contiene el tejido del corazón del ratón, y cuatro mililitros de tampón de digestión en un tubo de centrífuga de 15 mililitros que contiene el tejido óseo del ratón. Coloque el corazón y el tejido muscular del cuádriceps aislado de un ratón espinoso en la tapa de una placa de Petri. Con un par de tijeras de seda, pícalo en trozos más pequeños de un milímetro cúbico.
Transfiera el tejido picado a los respectivos tubos de digestión. Agita el contenido de los tubos durante dos segundos a baja velocidad. Después de 20 minutos, retire los tubos del rotador.
Deje que los trozos de tejido se asienten. Utilice una pipeta P 1000 para aspirar el sobrenadante. Transfiera el sobrenadante a tubos de centrífuga de 50 mililitros que contengan 20 mililitros de tampón FACS helado.
Rellene los tubos de digestión con los volúmenes respectivos de tampón de digestión. Incubarlos de nuevo en el rotador. Después de someter los músculos a otra ronda de digestión, agregue un tampón FACS helado para saciar la digestión.
Coloque un colador de celdas de 40 micrómetros encima de un tubo de centrífuga de 50 mililitros. Filtre la suspensión de digestión y supine a través del colador. Centrifugar la suspensión celular a 500 G durante ocho minutos a cuatro grados centígrados.
Después de eliminar el sobrenadante, agregue tres mililitros de tampón de lisis ACK al pellet y vuelva a suspender. Incubar la suspensión durante cinco minutos en hielo. Rellene el volumen a 40 mililitros con tampón FACS.
Centrifugar las muestras de nuevo a 500 g durante cinco minutos a cuatro grados centígrados. Después de decantar el sobrenadante, vuelva a suspender el pellet en 0,5 mililitros de tampón FACS. Finalmente, filtre la suspensión a través de una tapa de filtro de celdas de 40 micrómetros, colocada sobre un tubo de fondo redondo de poliestireno de cinco mililitros.
