Procedimiento de inyección de cisterna magna (CM) de ratón para estudiar la dilatación de vasos inducida por elastasa en trastornos del SNC

Para empezar, coloque un ratón anestesiado sobre un paño quirúrgico nuevo. Aplique ungüento oftálmico en el ojo del animal para evitar la sequedad, luego inyecte Metacam, seguido de 0,5 mililitros de solución salina por vía subcutánea en el ratón. Afeita el cuello del ratón en la base del hueso occipital y limpia la superficie con PBS estéril.

Transfiera el ratón al marco estereotáxico en posición prona. Coloque la barra de la nariz del marco estereotáxico en la parte superior del mouse para proporcionar estabilidad y asegúrese de que los dientes superiores estén sujetos. Coloque la cabeza del animal en un ángulo de 120 grados con respecto al cuerpo para elevar y distender la nuca.

A continuación, con una gasa estéril, limpie el sitio quirúrgico tres veces con exfoliante Betadine y etanol al 70%. A continuación, limpie una vez con la solución de Betadine. Con un bisturí, haga una pequeña incisión de un centímetro.

Pasa con cuidado el bisturí a lo largo de la línea media para cortar los músculos. Con pinzas, separe suavemente los músculos hacia la izquierda y la derecha. A continuación, cargue la jeringa Hamilton con 2,5 microlitros de elastasa evitando las burbujas de aire.

Inserte lentamente la jeringa con el bisel hacia arriba en el centro de la cisterna magna. Después de la punción, retire con cuidado el bisel para facilitar la liberación de una pequeña cantidad de líquido cefalorraquídeo o LCR. A continuación, vuelva a insertar el bisel en el sitio de punción e inyecte lentamente elastasa o vehículo en la cisterna magna, dejando la aguja en su lugar durante un minuto para evitar fugas de elastasa.

Después de retirar el bisel, cierre el sitio de la incisión con una sutura quirúrgica no absorbible y apague el anestésico. Retire al animal del marco estereotáxico y colóquelo en una almohadilla térmica de 37 grados centígrados hasta que el mouse se recupere.