Para empezar, fije el soporte en voladizo de un AFM en el soporte de cambio en voladizo. Utilice pinzas de relojero para montar el voladizo seleccionado en el soporte. Apriete el tornillo del soporte para asegurar el voladizo.
Coloque y bloquee el soporte en voladizo en el cabezal AFM que descansa sobre el soporte. Utilice la función de motor paso a paso en el software AFM para retirar el cabezal AFM al punto más alto. y establezca esa posición en 0.0.
Levante con cuidado el cabezal AFM de su soporte, luego móntelo en la platina de muestra colocando las patas en sus respectivas ranuras. Para calibrar el voladizo, utilice la función de motor paso a paso para acercarlo a la superficie de la muestra. A continuación, haga clic en Aproximación en la ventana Modo de contacto para espectroscopia.
Baje el voladizo en pequeños incrementos de 15 micrómetros. Pulse Adquirir para capturar una curva de fuerza. A continuación, seleccione la curva de fuerza, ábrala en la ventana del Administrador de calibración y seleccione Modo basado en contacto en la sección Método.
Ahora utilice la función seleccionar rango de ajuste y seleccione la curva de retracción en voladizo para un ajuste de curva lineal. A continuación, marque la casilla de verificación Sensibilidad para convertir la unidad de fuerza de voltios a Newton. Levante el voladizo de 100 a 200 micrómetros en el líquido y seleccione la función de ruido térmico Nuevamente, haga clic en Seleccionar rango de ajuste y ajuste la curva de campana de ruido térmico con una curva de Lawrence.
Después del ajuste de la curva, elija la caja K constante de resorte. Confirme que la constante de resorte está cerca del valor del fabricante y anótelo para referencia futura. A continuación, coloque la muestra montada en portaobjetos de los vasos retinianos del ojo de roedores o la matriz subendotelial en la etapa AFM y visualice los vasos retinianos.
Seleccione Modo de contacto para espectroscopia en la sección Experimento del software. A continuación, establezca la fuerza del punto de ajuste en 0,5 nano-Newtons y haga clic en Aproximación. Utilice los tornillos de la platina AFM para colocar con cuidado la sonda en voladizo en la ubicación deseada de la muestra.
Haga clic en Aproximación para colocar el voladizo más cerca de la muestra y, a continuación, haga clic en Adquirir para capturar las curvas de fuerza. Por último, guarde todas las curvas de fuerza para el análisis. Las curvas de aproximación y retracción obtenidas de un capilar retiniano aislado de un ratón diabético fueron más pronunciadas que las obtenidas de un ratón no diabético.
