Generación de esferoides multicelulares de alto rendimiento a partir de una línea celular de cáncer humano para imágenes 3D en vivo

Para fundir placas de Petri 3D, enjuague los micromoldes en agua destilada y colóquelos en un recipiente esterilizable en autoclave para esterilizarlo en autoclave. Agregue solución salina estéril al 0,9% al polvo de agarosa del autoclave en una botella de vidrio de 200 mililitros. Enrosque la tapa sin apretar para evitar la acumulación de presión y agite la botella para mezclar el polvo de agarosa.

Hervir el polvo de agarosa en un horno microondas con agitación intermitente. Una vez que la solución de agarosa se enfríe, pipetee la agarosa fundida en el micromolde y espere hasta que se solidifique. Después, flexiona con cuidado el micromolde para retirar la placa de Petri 3D y transferirla a una placa de cultivo de tejidos de 12 pocillos.

Para equilibrar la placa de Petri 3D, agregue 2,5 mililitros de medio 5A de McCoy por pocillo e incube durante 15 minutos a 37 grados Celsius y 5% de dióxido de carbono. Después del equilibrio final, retire por completo todo el medio de cultivo que rodea la placa de Petri 3D y el interior de la placa. Gota a gota, siembre 190 microlitros de suspensión celular que contenga 40, 500 células en la cámara de siembra y deje que las células se asienten durante 10 minutos.

Agregue dos mililitros del medio 5A de McCoy al exterior de la placa de Petri 3D e incube a 37 grados centígrados y 5% de dióxido de carbono. Después de cuatro días, los esferoides son lo suficientemente compactos para la microscopía. Agregue 200 microlitros de la solución de recubrimiento a cada pocillo de una placa de cultivo con fondo en U de 96 pocillos e incube durante un minuto.

Retire el exceso de solución de recubrimiento y deje que la placa se seque durante una hora. Vea 200 microlitros de suspensión celular que contiene 500 células en cada pocillo e incube a 37 grados centígrados y 5% de dióxido de carbono durante al menos cuatro días.