Cuantificación de la conectividad de la unidad motora de diafragma de rata mediante electrofisiología

Para comenzar, prepare y coloque la rata anestesiada para electrofisiología. Aplique pulsos de onda cuadrada catártica monofásicos para estimular el nervio frénico para registrar las respuestas CMAP. Aumentar la intensidad del estímulo progresivamente hasta que la amplitud de la respuesta deje de aumentar.

Luego, aumente la intensidad del estímulo a aproximadamente el 120% del nivel requerido para una respuesta máxima para garantizar una estimulación súper máxima y registrar una respuesta adicional. Mida y documente las amplitudes de pico a pico del CMAP en milivoltios. Administrar estimulación submáxima con una duración de 0,1 milisegundos a una frecuencia de 1 hercio.

Aumente gradualmente la intensidad en incrementos de 0,03 miliamperios para provocar respuestas incrementales hasta que se logre una respuesta mínima de todo o nada. Luego, adquiere la respuesta inicial con una intensidad de estímulo que oscila entre 2 y 10 miliamperios. Después de guardar la primera respuesta incremental, adquiera incrementos adicionales con intensidades de estímulo progresivamente más altas en incrementos de 0,03 miliamperios.

Asegúrese de que el pico negativo inicial de las respuestas incrementales se alinee temporalmente con el pico negativo de la respuesta CMAP máxima. Dada la participación del diafragma en la respiración, verifique la estabilidad y la ausencia de fraccionamiento en cada respuesta incremental para confirmar la consistencia en tres respuestas duplicadas. Observe las respuestas incrementales en tiempo real y superpóngalas en grabaciones anteriores para distinguirlas visualmente.

A continuación, confirme que la amplitud del incremento es de al menos 25 microvoltios. Después de registrar 10 respuestas incrementales, verifique que la amplitud de cada incremento no exceda 1/3 de la amplitud total de la respuesta final. Para estimar la amplitud media del SMUP, promedie los valores de 10 incrementos.

A continuación, divida la amplitud máxima de CMAP por la amplitud media de SMUP para determinar el MUNE. Siete días después de la inyección intrapleural de CTB-SAP, MUNE disminuyó a 60 unidades motoras funcionales en ratas adultas en comparación con 74 en ratas de control. La amplitud del CMAP se mantuvo relativamente estable, lo que sugiere un brote colateral como un posible mecanismo compensatorio.

El diafragma CMAP, SMUP y MUNE se midieron durante 28 días después de la inyección. El CMAP no mostró cambios notables. El aumento promedio en el SMUP para las ratas CTB-SAP fue de aproximadamente 50 a 60%Los cambios fueron significativos a lo largo del tiempo y se atribuyeron a CTB-SAP.

MUNE se redujo en aproximadamente un 40% en ratas CTB-SAP, lo que indica efectos significativos del tiempo en el tratamiento con CTB-SAP.