Fabricación de microagujas utilizando exosomas aislados de células de cáncer epitelial de ovario de ratón

Para empezar, mezcle los componentes A y B de polidimetilsiloxano, o PDMS, en una proporción de 10 a uno. Después de remover bien la mezcla, vierta la mezcla en un molde maestro. Coloque el molde PDMS a una presión de una libra por pulgada cuadrada durante 15 minutos para eliminar las burbujas de aire.

Cura el molde PDMS a 60 grados centígrados durante dos horas. Desmoldar para obtener el molde de producción de la microaguja. Luego, limpie el molde de producción con agua ultrapura antes de usarlo.

Cuantifique el contenido de proteínas de la solución de exosoma preparada utilizando un kit de ensayo de BCA. Agregue una cantidad adecuada de DPBS a la solución de exosomas. Ahora, prepare una solución de 200 miligramos por mililitro de trehalosa utilizando DPBS como disolvente.

Revuelva durante 20 minutos para asegurar una disolución completa. A continuación, prepare una solución de ácido hialurónico y polivinilpirrolidona, o PVP, utilizando DPBS y etanol como disolvente, respectivamente. Revuelva durante la noche para asegurar la disolución completa.

Mezcle la solución de exosoma y la solución de trehalosa en una proporción uniforme. Agregue un volumen igual de solución de ácido hialurónico y mezcle bien para obtener la solución de punta. Con un limpiador de plasma, procese la superficie del molde PDMS durante 30 segundos a un grado bajo para mejorar su hidrofilicidad.

Agregue 40 microlitros de la solución de punta al molde de PDMS. Centrifugar a 3.000 g durante tres minutos a temperatura ambiente para asegurarse de que el líquido llene la capa de agujas del molde. Retire el exceso de líquido del molde y seque a temperatura ambiente en un horno de secado al vacío durante un día.

Luego, agregue 200 microlitros de solución PVP al molde de PDMS. Centrifugar a 3.000 g durante tres minutos a temperatura ambiente para asegurarse de que el líquido llene la capa de soporte del molde. Después de secar el molde durante un día, desmolda para obtener el parche de la microaguja cargado con exosomas.