Para comenzar, coloque un arpa de platino en un bote de pesaje cerca de la plataforma MEA. A continuación, cubra el arpa con unos tres mililitros de aCSF para reducir sus tendencias hidrofóbicas. Use unas tijeras para recortar aproximadamente 1.5 pulgadas de la punta estrecha de una pipeta de transferencia.
A continuación, utilice la pipeta modificada para recoger un trozo de cerebro de la cámara de retención de rodajas. Dispense suavemente la rodaja de cerebro y cualquier solución de la pipeta en el pozo del chip. Para colocar el corte correctamente, use un pincel suave para crear una corriente en la solución que empuje el corte de cerebro a los electrodos de grabación.
Con pinzas, coloque suavemente el arpa sobre el corte de cerebro con los hilos hacia abajo para presionar el corte en los electrodos de registro. Oriente el arpa de modo que el lado sin marco mire hacia la aguja de entrada y el marco del arpa no entre en contacto con ninguno de los electrodos de registro. Ahora tome una pipeta de desecho y retire el exceso de aCSF.
A continuación, toma una toallita antiestática, tuerce una esquina para crear una punta y utilízala para absorber el líquido cefalorraquídeo restante que rodea los electrodos de grabación sin tocar los electrodos de grabación, el corte de cerebro o el arpa. Con una pipeta de aCSF designada, agregue rápidamente unos dos mililitros de aCSF carbogenado para cubrir el corte de cerebro. Llene el pozo con aproximadamente tres mililitros de aCSF carbogenado hasta que esté aproximadamente tres cuartas partes lleno.
Luego, use un microscopio o una cámara para tomar una imagen de alta resolución del corte de cerebro en el chip MEA. Coloque los tubos de entrada y salida en el vaso de precipitados lleno de aCSF. Coloque la aguja de entrada cerca de la parte inferior del pocillo del chip, justo fuera de los electrodos de registro.
A continuación, coloque la aguja de salida cerca de la parte superior del pocillo de la viruta, hacia el borde, de modo que el líquido suba casi hasta el borde del pocillo de la viruta, unos cuatro mililitros. Ahora ajuste el flujo de entrada de perfusión a cinco mililitros por minuto y el flujo de salida de perfusión a siete mililitros por minuto. Encienda el flujo de entrada y salida.
Retire la aguja de entrada del pozo de la viruta hasta que comience a emitir solución en lugar de aire. Después de eso, vuelva a colocar la aguja dentro del pozo del chip. Luego use un calentador de solución para mantener la solución a o cerca de la temperatura fisiológica, alrededor de 34 a 37 grados Celsius.
Deje que el aCSF se filtre sobre la rebanada de cerebro durante 10 minutos. Una vez transcurridos 10 minutos, mueva el tubo de salida al vaso de precipitados de desecho. A continuación, mueva el tubo de entrada al vaso de precipitados que contiene la solución proconvulsiva.
Deje que el aCSF no convulsivo se elimine del sistema de perfusión y se coloque en el vaso de precipitados de desecho durante 10 minutos. Finalmente, transfiera el tubo de salida al vaso de precipitados que contiene la solución proconvulsiva y déjelo circular hasta que finalice el experimento. Con frecuencia se observó una potente actividad electrográfica similar a una convulsión en las regiones neocorticales bajo los paradigmas de cero magnesio y 4-aminopiridina.
Las regiones del hipocampo mostraron más variabilidad entre los cortes de cerebro, con algunos demostrando una actividad similar a las convulsiones y otros mostrando descargas transitorias. La actividad neocortical bajo el paradigma de cero magnesio mostró mayor potencia en múltiples bandas de frecuencia en comparación con el paradigma de 4-aminopiridina. La actividad del hipocampo en el paradigma de cero magnesio demostró una mayor potencia en las bandas de alta frecuencia gamma en comparación con el neocórtex y ambas regiones cerebrales en el paradigma de 4-aminopiridina.
