Para empezar, coloque los disolventes diluidos al 60% para la extracción asistida por microondas en la plataforma de trabajo. Pesar 0,67 gramos de la piel de plata del café y mezclar con 20 mililitros de solvente de extracción en una proporción de uno a 30 en un recipiente de reacción. Agregue una barra de agitación magnética al recipiente para garantizar una distribución uniforme del calor y el solvente dentro de la muestra.
Cierre el recipiente firmemente con una herramienta especial y colóquelo en la cámara de extracción asistida por microondas. Para configurar el método, haga clic en el icono de la caja de herramientas en la barra superior del monitor y seleccione el rotor SK eT en la sección de accesorios. Luego haga clic en revolver y escriba 20% para establecer la tasa de agitación.
Haga clic en el sector de la cerradura de la puerta y configúrelo para que se active a temperaturas superiores a 80 grados centígrados. A continuación, haga clic en el icono de la tabla en la barra superior y ajuste el gradiente de temperatura T1 a una duración de extracción de 10 minutos. Potencia de microondas a 1800 vatios y temperatura a 120 grados centígrados.
Para activar el agitador, haga clic en el botón de agitación y espere hasta que aparezca la luz verde. Ajuste la velocidad del ventilador al nivel tres. Para mantener el tiempo de extracción, seleccione la temperatura de extracción deseada T2 configurando la duración de la extracción en 15 minutos, la potencia de microondas en 1800 vatios y la temperatura en 120 grados Celsius.
Ahora, haga clic en el botón de enfriamiento en la esquina inferior izquierda de la pantalla y seleccione el tiempo de enfriamiento de 10 minutos. Haga clic en el icono Guardar en la esquina superior derecha de la pantalla. Inicie el proceso de extracción eligiendo el número de recipientes utilizados.
Después de la extracción, la centrífuga extrae a 9072 g durante 15 minutos a cuatro grados centígrados. Recoja el sobrenadante con una pipeta de vidrio de 10 mililitros y guárdelo a menos 20 grados centígrados. Diluya los extractos de piel de plata de café diez veces con agua destilada en un plato de 96 pocillos.
Mezclar 10 microlitros de la muestra diluida con 20 microlitros de reactivo folin-ciocalteu sin diluir y dejar que reaccionen durante tres minutos. A continuación, agregue 100 microlitros de solución de carbonato de sodio al 7,5% a la mezcla en cada pocillo de una placa de 96 pocillos. Prepare diferentes concentraciones para el rango de concentración estándar de ácido gálico diluyendo con agua destilada.
Mézclalos con 20 microlitros de reactivo folin-ciocalteu y déjalos reaccionar durante tres minutos. A continuación, agregue 100 microlitros de solución de carbonato de sodio al 7,5% a la mezcla en cada pocillo de una placa de 96 pocillos. Incubar la reacción durante 30 minutos en la oscuridad a temperatura ambiente.
En un lector de microplacas, mida la absorbancia de la mezcla de reacción a 765 nanómetros. Traza la curva de calibración del patrón utilizando las concentraciones del patrón y la absorbancia a 765 nanómetros. Exprese los resultados en miligramos de equivalente de ácido gálico por gramo de la muestra.
La extracción acuosa de 1,2 hexanodiol produjo el mayor contenido fenólico total y la extracción con agua el más bajo. La extracción acuosa de 1, 2 hexanodiol produjo el mayor contenido total de flavonoides y la extracción acuosa de isopentildiol produjo el más bajo. La extracción acuosa de hexilenglicol exhibió el valor de ensayo DPPH más alto y la extracción acuosa con etanol exhibió el más bajo.
La extracción acuosa de pentilenglicol dio como resultado el valor de ensayo ABTS más alto y la extracción de agua resultó en el más bajo. La extracción acuosa de hexilenglicol mostró el valor más alto de FRAP y la extracción de agua mostró el más bajo.
