Inmunotinción y recuento automatizado de células ganglionares de la retina de ratón mediante un programa basado en IA

Después de aislar toda la retina de la montura del ratón, lave la retina en PBS con una suave agitación durante cinco minutos. Sumerge la retina lavada en un tampón de bloqueo durante 30 minutos. Después de la incubación, reemplace el tampón de bloqueo con el anticuerpo primario BRN3A.

Incubar la retina durante la noche a cuatro grados centígrados para permitir la unión de antígenos específicos y anticuerpos. Al día siguiente, lave la retina tres veces con PBS durante cinco minutos cada una antes de incubar con el anticuerpo secundario conjugado anti-conejo Alexa 594 o Alexa 488 durante dos horas para visualizar los antígenos objetivo. Después de lavar la retina inmunoteñida con PBS, transfiérala suavemente a un portaobjetos de microscopio de vidrio.

Aplana la retina para minimizar el plegamiento o la distorsión. Coloque un cubreobjetos sobre la retina montada asegurándose de que no se formen burbujas de aire. Descargue el código desde el enlace de GitHub.

A continuación, descargue los archivos necesarios del disco en la nube y descomprímalos. Localice la configuración. ini y modifique su contenido para que apunte a la ruta de acceso yolov5_cpu.

A continuación, haga clic en Interfaz de usuario. exe para abrir la interfaz gráfica. Compruebe si el pmse_plus.

El archivo del modelo pt está en el directorio raíz de la unidad C.Si no es así, cópielo de la carpeta weights de la carpeta yolov5. Abra el software de conteo de celdas. Haga clic en Abrir imagen para importar la imagen, luego haga clic en Ejecutar para permitir que el software cuente automáticamente las celdas.

El software de recuento celular automatizado identificó con precisión 15.231 células ganglionares de la retina en el modelo de ratón de glaucoma inducido por N-metil-D-aspartato, mostrando una pérdida celular significativa en comparación con aproximadamente 45.000 a 50.000 RGC en una retina normal.