Este trabajo fue apoyado por el Centro Interdisciplinario de Investigación Clínica (IZKF) Münster (SEED 03.12, SB).

1. Observaciones generales para experimentos con ratones <ol><li> Todos los experimentos con ratones se deben realizar de acuerdo con las directrices del Comité de Cuidado de Animales institucional y el uso respectivo. </li><li> Mantener los ratones en condiciones libres de patógenos y les permitirá tener acceso a alimentos y agua ad libitum. Nota: Es importante la utilización de ratones sexo, con ajuste por edad y en los grupos experimentales ya la susceptibilidad a la enfermedad puede variar con la edad y el género. </li><li> Dependiendo de las condiciones experimentales elegidas, un grupo de control inmunizados de manera simulada puede ser considerado donde MOG 35-55 péptido se sustituye por PBS sin antígeno o un péptido nonencephalitogenic. </li><li> Por favor considerar aspectos metodológicos antes de los experimentos iniciales (véase también más adelante). Se recomienda involucrar a uno o dos observadores cegados para la puntuación de EAE. </li></ol> 2. Preparación de MOG 35-55 Emulsión <ol><li> 200 l de una relación 1:1 de MOG de solución de péptido 35-55 y CFA deben inyectarse a cada ratón. Hay una cierta pérdida de la emulsión viscosa, mientras que la preparación y la inyección. Por lo tanto, preparar 1,5-2x de la cantidad necesaria. Calcular el volumen total de la emulsión y se divide por 2 para las cantidades necesarias de tanto solución de péptido MOG 35-55 y CFA. </li><li> Diluir MOG liofilizado 35-55 en ddH2O a una concentración final de 2 mg / ml. Utilizamos generalmente 200 mg MOG 35-55 péptido por ratón. Esta cantidad está contenida en 100 l de la solución madre. La solución de péptido debe almacenarse a -20 ° C. </li><li> Coloque el contenido de 1 vial de desecado de Mycobacterium tuberculosis H37RA (100 mg) en un mortero. <ol><li> Planta con mortero hasta obtener un polvo fino. </li><li> Añadir 10 ml de adyuvantes de Freund incompleto para obtener una solución madre de 10 mg / ml de CFA que se puede almacenar a 4 ° C. </li><li> Antes de la inmunización, diluir CFA solución madre del ingenioh IFA a una concentración final de 2 mg / ml. Mezclar bien antes de cada uso para resuspender material particulado y considerar una cierta pérdida de volumen de la solución viscosa durante las preparaciones experimentales. </li><li> Mezclar 1:1 con solución de péptido MOG 35-55 hasta / ml se alcanza la concentración final de 1 mg. PRECAUCIÓN: Heat-muertos Mycobacterium tuberculosis estimula la respuesta inmune innata. Evitar la inhalación, ingestión y contacto con la piel y los ojos. </li></ol></li><li> PreCool soluciones en hielo. <ol><li> Elaborar 1 ml de 2 mg / ml de CFA y 1 ml de 2 mg / ml de MOG 35-55 solución en dos jeringas de 2 ml. Calcular el número de jeringas necesarias de acuerdo con el número de animales inmunizados. ATENCIÓN: Evitar estrictamente la costura durante la preparación del adyuvante, ya que puede provocar granulomas o inducir reacciones autoinmunes. </li><li> Utilice un G cánula 27 para el 35-55 solución MOG y un G cánula 20 de CFA. Evite las burbujas de aire y conectar ambas jeringas con alhree-way-válvula. </li><li> Enviar la emulsión de una jeringa a la otra y mezclar bien durante al menos 10 min como una buena emulsificación es un paso crítico. Cerca-cerrar la válvula de tres vías para apoyar la emulsificación. La solución debe ser blanca, rígida y viscosa sin separación de fases. </li><li> Emulsión se puede almacenar durante varios días antes de la inmunización. Espere al menos 30 minutos después de la preparación de las emulsiones para observar si son estables. Antes de la inmunización, dibujar la solución en una de las dos jeringas y conectar un G cánula 27. </li></ol></li></ol> 3. Preparación de toxina pertussis <ol><li> Diferentes cantidades de toxina de pertussis se pueden encontrar en la literatura que también depende de la vía de administración (por ejemplo, por vía intravenosa o por vía intraperitoneal). Nuestro laboratorio utiliza 400 ng de toxina pertussis en 200 l de PBS por vía intraperitoneal en el día de la inmunización, y dos días más tarde. PRECAUCIÓN: La toxina pertussis tiene muchos efectos biológicos. Evitar la inhalación, ingestión y contacto con la piel y los ojos. </li><li> Reconstituir 50 g de toxina pertussis en 500 l de ddH2O para una solución madre de 100 mg / ml. Almacenar a 4 ° C. </li><li> Diluir 1:50 con PBS. 200 l ahora contienen 400 ng de PBS. Preparar la cantidad necesaria de jeringas y considerar un exceso de volumen adicional de ~ 100 l para cada cubo de la aguja. </li></ol> 4. Animal Inmunización <ol><li> Por favor, consulte el comité cuidado de los animales y el uso institucional de criterios específicos para la eutanasia requiere a corto plazo. Nuestro laboratorio utiliza breve narcosis con isoflurano, mientras que otros protocolos, como la inyección de ketamina / xilazina o halothan también pueden ser posibles. Espere a que la anestesia y usar una pizca dedo del pie frontal para evaluar el nivel de anestesia. </li><li> Asegúrese de que la inmunización se lleva a cabo por una persona con experiencia para minimizar el estrés de los animales y para asegurar la inmunización óptima. </li><li> Inyectar 100 l de luchagen / CFA emulsión subcutáneamente en dos sitios diferentes en cada flanco trasero. Asegúrese de que se forma una masa de bulbo debajo de la piel que debe persistir durante todo el experimento. </li><li> Inyectar 200 l de toxina de pertussis intraperitonelly. </li><li> Asegúrese de que los ratones individuales pueden ser fácilmente identificados por la evaluación diaria, por ejemplo, mediante marcas de color en la base de la cola. </li><li> Administrar una segunda dosis de la toxina pertussis en el segundo día después de la inmunización. </li></ol> 5. Monitoreo de la EAE <ol><li> El peso y la puntuación clínica deben ser evaluados diariamente. El inicio de la EAE generalmente se correlaciona con la pérdida de peso, que se puede utilizar como un indicador de actividad de la enfermedad. Por favor, consulte el cuidado de los animales institucional y el empleo de predefinir criterios cuando los ratones individuales tienen que ser sacado de los experimentos. Esto debe ser considerado cuando la pérdida de peso superior al 20% del peso corporal inicial o cuando los signos clínicos graves (puntuación de EAE 7 o peor) se producen. Por favor refiérase a la relineamientos prospectivos del cuidado de los animales institucional y el empleo Comisión respectiva para las puntuaciones máximas permitidas. </li><li> Cuando los ratones tienen síntomas clínicos de la EAE, es importante asegurarse de que la botella de agua todavía se puede alcanzar y que la comida se coloca en el suelo de la jaula. </li><li> Diferentes síntomas de puntuación se pueden utilizar. En nuestro laboratorio se establece una escala de 0 a 10. </li></ol><table border="1"><tbody><tr><td> Grado </td><td> Signo clínico </td><td> Comentario </td></tr><tr><td> 0 </td><td> Ausencia de signos clínicos </td><td> Marcha normal, la cola se mueve y puede ser levantada, la cola se envuelve alrededor de un objeto redondo si el ratón se mantiene en la base de la cola </td></tr><tr><td> 1 </td><td> Cola parcialmente cojera </td><td> Marcha normal, punta de la cola cae </td></tr><tr><td> 2 </td><td> Cola Paralizado </td><td> Marcha normal, la cola cae </td></tr><tr><td> 3 </td><td> Paresia de las extremidades posteriores, la falta de coordinación </td&gt; <td> Andar descoordinado, cola cojea, extremidades posteriores responden a pellizcos </td></tr><tr><td> 4 </td><td> Una extremidad posterior paralizado </td><td> Andar descoordinado con una extremidad trasera de arrastre, cola cojea, una de las extremidades posteriores no responde a pellizcar </td></tr><tr><td> 5 </td><td> Ambas patas traseras paralizadas </td><td> Andar descoordinado con ambas extremidades traseras arrastrando, cola cojea, ambos miembros posteriores no responden a pellizcar </td></tr><tr><td> 6 </td><td> Las patas traseras paralizadas, debilidad en las extremidades anteriores </td><td> Andar descoordinado con extremidades anteriores luchan para sacar el cuerpo, las extremidades anteriores reflejo después de pellizcar, cola cojea </td></tr><tr><td> 7 </td><td> Las patas traseras paralizadas, una extremidad anterior paralizó </td><td> El ratón no se puede mover, un miembro anterior responde a pizca dedo del pie, cola cojea </td></tr><tr><td> 8 </td><td> Las patas traseras paralizadas, ambos miembros anteriores paralizados </td><td> El ratón no se puede mover, ambos miembros anteriores no responden a la pizca dedo del pie, cola cojea </td></tr><tr><td> 9 </td&gt; <td> Moribundo </td><td> No hay movimiento, la respiración alterada </td></tr><tr><td> 10 </td><td> Muerte </td><td></td></tr></tbody></table> Tabla 1. Sistema de puntuación clínica.

<ol>
	<li>McFarland, H. F., Martin, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+sclerosis:+a+complicated+picture+of+autoimmunity.">Multiple sclerosis: a complicated picture of autoimmunity.</a> Nat. Immunol. 8, 913-919 (2007).</li><li>Wiendl, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuroinflammation:+the+world+is+not+enough.">Neuroinflammation: the world is not enough.</a> Curr. Opin. Neurol. 25, 302-305 (2012).</li><li>vander Star, B. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+and+in+vivo+models+of+multiple+sclerosis.">In vitro and in vivo models of multiple sclerosis.</a> CNS Neurol. Disord. Drug Targets. 11, 570-588 (2012).</li><li>Pachner, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+models+of+multiple+sclerosis.">Experimental models of multiple sclerosis.</a> Curr. Opin. Neurol. 24, 291-299 (2011).</li><li>Bittner, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+TASK1+channel+inhibitor+A293+shows+efficacy+in+a+mouse+model+of+multiple+sclerosis.">The TASK1 channel inhibitor A293 shows efficacy in a mouse model of multiple sclerosis.</a> Exp. Neurol. 238, 149-155 (2012).</li><li>Handel, A. E., Lincoln, M. R., Ramagopalan, S. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Of+mice+and+men:+experimental+autoimmune+encephalitis+and+multiple+sclerosis.">Of mice and men: experimental autoimmune encephalitis and multiple sclerosis.</a> Eur. J. Clin. Invest. 41, 1254-1258 (2011).</li><li>Krishnamoorthy, G., Wekerle, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=EAE:+an+immunologist's+magic+eye.">EAE: an immunologist's magic eye.</a> Eur. J. Immunol. 39, 2031-2035 (2009).</li><li>Stromnes, I. M., Goverman, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Active+induction+of+experimental+allergic+encephalomyelitis.">Active induction of experimental allergic encephalomyelitis.</a> Nat. Protoc. 1, 1810-1819 (2006).</li><li>Fletcher, J. M., Lalor, S. J., Sweeney, C. M., Tubridy, N., Mills, K. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=T+cells+in+multiple+sclerosis+and+experimental+autoimmune+encephalomyelitis.">T cells in multiple sclerosis and experimental autoimmune encephalomyelitis.</a> Clin. Exp. Immunol. 162, 1-11 (2010).</li><li>Mendel, I., Kerlero de Rosbo, N., Ben-Nun, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+myelin+oligodendrocyte+glycoprotein+peptide+induces+typical+chronic+experimental+autoimmune+encephalomyelitis+in+H-2b+mice:+fine+specificity+and+T+cell+receptor+V+beta+expression+of+encephalitogenic+T+cells.">A myelin oligodendrocyte glycoprotein peptide induces typical chronic experimental autoimmune encephalomyelitis in H-2b mice: fine specificity and T cell receptor V beta expression of encephalitogenic T cells.</a> Eur. J. Immunol. 25, 1951-1959 (1995).</li><li>Hofstetter, H. H., Shive, C. L., Forsthuber, T. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pertussis+toxin+modulates+the+immune+response+to+neuroantigens+injected+in+incomplete+Freund's+adjuvant:+induction+of+Th1+cells+and+experimental+autoimmune+encephalomyelitis+in+the+presence+of+high+frequencies+of+Th2+cells.">Pertussis toxin modulates the immune response to neuroantigens injected in incomplete Freund's adjuvant: induction of Th1 cells and experimental autoimmune encephalomyelitis in the presence of high frequencies of Th2 cells.</a> J. Immunol. 169, 117-125 (2002).</li></ol>

Los autores declaran no tener intereses financieros en competencia.

Una multitud de diferentes modelos de EAE con protocolos de inmunización activa se ha descrito en las últimas décadas. Mientras que los modelos de rata han sido ampliamente utilizados hasta hace poco, los ratones son ahora el organismo modelo más popular para la investigación de EAE. Este desarrollo es, entre otros, debido a la amplia y creciente repertorio de ratones transgénicos disponibles. La inmunización de ratones C57BL / 6 con MOG 35-55 péptido es uno de los modelos más ampliamente distribuida de EAE y puede ser considerado como un modelo fiable, reproducible y animal-así de usar. En muchos laboratorios neuroinmunológicas, MOG 35-55 EAE inducida se ha establecido como el modelo de elección mientras se utilizan otros modelos de EAE para las preguntas experimentales más específicos. Un punto crítico a considerar es la planificación de los parámetros experimentales para asegurar que los experimentos de EAE se realizan metodológicamente correcta. Por la validez interna, se recomienda anotar cegada de síntomas de la enfermedad. Expergrupos imental debe ser la edad, el peso y el sexo con ajuste y los ratones deben ser asignados al azar a grupos de tratamiento. Los experimentos siempre se debe realizar en cumplimiento de las normas de bienestar animal. Estudios de EAE son a menudo de poca potencia y no toman en cuenta los errores estadísticos de tipo II. Por lo tanto, antes de los experimentos, se deben realizar los cálculos del tamaño de la muestra. Tamaño de los grupos necesarios dependen de la magnitud del efecto esperado. Consulta a un experto para el análisis estadístico podría considerarse antes de iniciar los experimentos de EAE. Algunas limitaciones del protocolo deben mantenerse en mente. Lo más importante, la interpretación de los datos de EAEa se ve comprometida por el modo de inmunización con el uso de adyuvante y la tos ferina toxina que tiene tanto una influencia adicional en la reacción inmunológica. También se debe considerar que el modelo MOG 35-55 EAE muestra principalmente una célula T CD4 + impulsado respuesta inmunológica. Células T CD8 + y las células B jueganun papel menos prominente y protocolos alternativos deben ser considerados al tratar estos tipos de células. El curso de la enfermedad esperada es aguda, monofásica y autolimitada. Alternativamente, un curso de la enfermedad de recaída-remisión se puede conseguir también en los modelos de EAE alternativos. Una limitación importante adicional del protocolo es un cierto sesgo hacia el componente inmunológico de la fisiopatología de MS. Durante los últimos años, se ha vuelto cada vez más claro que la EM tiene un fuerte componente neurodegenerativo. La muerte de los oligodendrocitos y neuronas resultados en una acumulación progresiva de déficits neurológicos. Hay que tener en cuenta que el modelo de EAE puede no estar totalmente adecuado para abordar las cuestiones relativas a los mecanismos neurodegenerativos experimento de la inflamación autoinmune. Modelos animales alternativos con un enfoque en la patología del SNC pueden ser considerados - por ejemplo, el modelo cuprizone que compromete desmielinización tóxicos sin la participación del sistema inmune periférico. El protocolo descrito puede considerar como un modelo experimental neuroinmunológicas básica y puede ser modificado para otras aplicaciones. El procedimiento experimental descrito anteriormente puede aplicarse fácilmente a otros protocolos de EAE por diferentes cepas de ratones o el tipo y la cantidad de proteína (por ejemplo, usar PLP139b151 péptido y ratones SJL para un curso de la enfermedad EAE recurrente-remitente, que es especialmente adecuado para la evaluación terapéutica efectos sobre las recaídas). El protocolo descrito también puede utilizarse para experimentos de transferencia adoptiva (pasiva EAE). En este modelo, ratones C57BL / 6 se inmunizan ratones con MOG 35-55 péptido y CFA como se describió anteriormente. Por el contrario, no se requiere la toxina pertussis. Después de 7-15 días, los bazos o ganglios linfáticos se aislaron y las células inmunes se volvieron a estimular in vitro con péptido MOG 35-55 y diversas citocinas antes de la transferencia a un nuevo grupo de ratones C57BL/6se. Estos ratones receptores desarrollan EAE unos pocos días antes que en clasinmunización SICAL. condiciones in vitro se pueden variar para las cuestiones inmunológicas específicas (por ejemplo, la polarización en T H 1 o células TH17). A veces, la incidencia de la enfermedad baja o síntomas débiles podrían ser un desafío experimental. Algunas recomendaciones para la resolución de problemas son: - Gravedad de la enfermedad se puede variar con diferentes cantidades de péptido / ratón. - La concentración óptima CFA puede variar de 1-5 mg / ml. Considere la posibilidad de una titulación de CFA al establecer los experimentos. Por favor, consulte las directrices respectivas del cuidado de los animales institucional y el empleo Comisión respectiva para concentraciones CFA permitido tantas regulaciones prohíben las concentraciones exceden CFA 2 mg / ml. - Diferentes métodos se describen para la preparación de la emulsión. Los métodos alternativos tales como vórtex durante 1 hora o ultrasonidos podrían considerarse si el pobre emulsificación se considera como posibfuente de error le. - La edad, el género, la estación del año y de las condiciones ambientales dentro de las instalaciones de animales son factores importantes que influyen en la susceptibilidad EAE. Asimismo, debe asegurarse de que las condiciones son comparables entre experimentos independientes. Como se describió anteriormente, el protocolo mencionado se puede utilizar como punto de partida para los experimentos de EAE adoptivos. Este modelo es especialmente adecuado para la separación de efectos periféricos y del sistema nervioso central de un fenotipo genético (por ejemplo, mediante la transferencia de células knockout encefalitogénicas en ratones receptores de tipo salvaje) y para preguntas inmunológicos específicos como el fenotipo de las células transferidas se puede caracterizar completamente. El último avance en la investigación de EAE en los últimos años son receptores de las células T de ratones transgénicos. Estos ratones desarrollan síntomas de la EAE de forma espontánea y sin influencia externa eludir el problema de la inoculación adyuvante. Sin embargo, este modelo requiere grandes cantidades de animales para breeding para asegurar tamaños de los grupos suficientes. Evaluación de ratones knockout requiere cruzamiento antes de los experimentos de EAE en contraste con EAEa. Como cada ratón desarrolla síntomas de la enfermedad en un día diferente, la evaluación de nuevas sustancias puede ser bastante complicado. Por lo tanto, el valor de EAEa clásica para neuroinmunológicas permanece sin respuesta.

La esclerosis múltiple (EM) es una enfermedad inflamatoria desmielinizante crónica del sistema nervioso central en el que la destrucción de oligodendrocitos y neuronas resultados en los síntomas clínicos heterogéneos y acumulación. MS es considerado como un trastorno autoinmune prototípica del sistema nervioso central (SNC) y se han desarrollado modelos animales para arrojar luz sobre su compleja patogenia. Por otra parte, las terapias actuales sólo son parcialmente eficaces y orientados principalmente a la fase inflamatoria de la enfermedad, mientras que el componente neurodegenerativo es, probablemente, el mayor reto para el futuro terapéutico se acerca 1,2. Mientras que la etiología exacta de la enfermedad todavía no está claro, se supone que una reacción autoinmune contra epítopos en la vaina de mielina de los axones en el SNC para provocar la aparición de la enfermedad. La desregulación del sistema inmune, la vulnerabilidad genética y los factores ambientales (por ejemplo, las infecciones, la vitamina D) se cree queaspectos centrales de influencia de los mecanismos fisiopatológicos de la MS. Tres tipos diferentes de modelos animales se han establecido actualmente para la exploración de los patrones patológicos de MS: modelos virales como el virus de la encefalomielitis murina de Theiler (TMEV), los modelos inducidos por agentes tóxicos como cuprizone y, finalmente, las diferentes variantes de la encefalomielitis autoinmune experimental (EAE) 3, 4. Aunque todos ellos imitan las características de la EM, difieren enormemente en las características patológicas subyacentes como la participación del sistema inmune adaptativo. EAE es el modelo animal más común, ya que es especialmente útil para investigar las vías neuroinflamatorios ya menudo sirve como un modelo de &quot;prueba de principio&quot; para la eficacia de nuevas estrategias de tratamiento 5,6. La EAE puede ser inducida en muchos animales diferentes (por ejemplo, ratones, ratas, miniswine, cobayas, pollos, o primates). Sin embargo, los ratones se han convertido en los más ampliamente utilizar especies que es al menos en parte,a ampliar el repertorio de transgénicos sofisticados o ratones knockout 7. La fisiopatología de la EAE se basa en la reacción del sistema inmune contra antígenos específicos del cerebro. Esta reacción induce la inflamación y la destrucción de las estructuras en libros de antígeno, lo que resulta en características neurológicas y patológicos comparables que los observados en pacientes con EM. Tres enfoques diferentes se pueden distinguir: EAE activamente inducida (EAEa; inmunización activa), de forma pasiva transferidos EAE (peae; transferencia de células encefalitogénicas de un animal inmunizado), y los modelos más recientemente espontáneas EAE ratón (SEAE), que permiten el estudio de enfermedades autoinmunes mecanismos sin manipulación exógena. El modelo más sencillo es inducible EAEa en ratones que producen en resultados rápidos y robustos. Este modelo es considerado como el &quot;estándar de oro&quot; de los modelos animales neuroinmunológicas por muchos investigadores en el campo 8. Para EAEa de inducción, el animalse inmuniza con una inyección subcutánea de una emulsión que consiste en el antígeno elegido y completar adyuvante de Freund (CFA) acompañado de una inyección intraperitoneal de la toxina pertussis en el día de la inmunización y dos días más tarde. En consecuencia, los linfocitos T específicas para la mielina se activan en la periferia y migran en el SNC a través de la barrera hematoencefálica. A la entrada en el SNC, las células T se vuelven a activar por las células locales e infiltrantes presentadoras de antígeno resultantes en la posterior cascadas inflamatorias, la participación de otras células tales como monocitos o macrófagos y, finalmente, en la desmielinización y la muerte celular axonal 9. Dependiendo del protocolo de inmunización y combinación de cepa de ratón (por ejemplo, ratones C57BL / 6, SJL / J, Biozzi) y el antígeno (por ejemplo, glicoproteína de mielina de oligodendrocitos (MOG), proteína básica de mielina (MBP), proteína proteolipídica de mielina (PLP)), la enfermedad Por supuesto se puede tomar un curso progresivo o recurrente aguda, crónica enfermedad en remisión. <p class= &quot;Jove_content&quot;&gt; ratones C57BL / 6 se han convertido en la cepa más comúnmente utilizado para ratones transgénicos construcción y una multitud creciente de knockout o ratones transgénicos está disponible. Se describen un protocolo para la inmunización de ratones C57BL / 6 con MOG 35-55 péptido 10 que resulta en una EAE monofásico con primeros síntomas después de 9-14 días, máximo enfermedad alrededor de 3-5 días después de la aparición de la enfermedad y la recuperación de los síntomas lenta y parcial en los próximos 10-20 días. A medida que el potencial inmunogénico de MOG 35-55 péptido por sí sola no es suficiente para inducir la enfermedad, adyuvantes tales como CFA son necesarios. Se supone, que los componentes de CFA activan los fagocitos mononucleares que inducen la fagocitosis de estas moléculas y la secreción de citoquinas. Esto da como resultado la prolongación de la presencia de antígenos y un transporte más eficiente de estos para el sistema linfático. La inducción de EAE es facilitado por la aplicación de la toxina de pertussis (PT), que ha sido sugerido entre otros para modularla barrera sangre-cerebro y el propio 11 de respuesta inmunológica. Después de la inducción de la enfermedad, la atención especial se debe tomar para la evaluación diaria de los ratones para los síntomas de la enfermedad.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="707">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Female C57BL/6 mice, age 10-12 weeks, ~20 g weight</td>
			<td style="width:205px;">e.g. Jackson Laboratory, Charles River</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">MOG35-55 (MEVGWYRSPFSRVVHLYRNGK)</td>
			<td style="width:205px;">e.g. Pepceuticals Ltd</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Store at -20&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Incomplete Freund&#8217;s adjuvant (IFA)</td>
			<td style="width:205px;">e.g. Sigma-Aldrich Co.</td>
			<td style="width:119px;">F5506</td>
			<td>Store at 4 &#176;C.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Syringes, 1 ml with 26G3/8 needle&#160;</td>
			<td style="width:205px;">e.g. Becton Dickinson &#38; Co.</td>
			<td style="width:119px;">309625</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Syringes, 2 ml</td>
			<td style="width:205px;">e.g. B. Braun</td>
			<td style="width:119px;">7389</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Needles, 25G5/8 and 30G1/2&#160;</td>
			<td style="width:205px;">e.g. Becton Dickinson &#38; Co.,</td>
			<td style="width:119px;">305122, 305106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Three way halve</td>
			<td style="width:205px;">e.g. B. Braun</td>
			<td style="width:119px;">16494 C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Pertussis toxin, lyophilized in buffer</td>
			<td style="width:205px;">Enzo Life Sciences Inc.</td>
			<td style="width:119px;">BML-G100</td>
			<td>Store at 4 &#176;C.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">M. tuberculosis H37 RA</td>
			<td style="width:205px;">BD Difco&#160;</td>
			<td style="width:119px;">231141</td>
			<td>Store at 4 &#176;C.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

myelin oligodendrocyte glycoprotein (mog35-55) induced experimental autoimmune encephalomyelitis (eae) in c57bl/6 mice

La esclerosis múltiple es una enfermedad desmielinizante neuroinflamatoria crónica del sistema nervioso central con un fuerte componente neurodegenerativo. Mientras que la etiología exacta de la enfermedad todavía no está claro, se cree que los linfocitos T autorreactivos a jugar un papel central en su fisiopatología. Tratamiento de la EM es sólo parcialmente eficaz hasta el momento y los esfuerzos de investigación continúe ampliando nuestro conocimiento de la fisiopatología de la enfermedad y el desarrollo de nuevas estrategias de tratamiento. La encefalomielitis autoinmune experimental (EAE) es el modelo animal más común para MS compartir muchas características clínicas y patofisiológicas. Hay una amplia diversidad de modelos de EAE que reflejan diferentes aspectos clínicos, inmunológicos e histológicos de la EM humanos. EAE activamente inducida en ratones es el modelo inducible más fácil con resultados robustos y reproducibles. Es especialmente adecuado para la investigación de los efectos de las drogas o de determinados genes mediante el uso de ratones transgénicos impugnadas por Neurol autoinmunenflammation. Por lo tanto, los ratones son inmunizados con homogeneizado de SNC o péptidos de proteínas de la mielina. Debido a la baja potencial inmunogénico de estos péptidos, se utilizan adyuvantes fuertes. EAE susceptibilidad y fenotipo depende del antígeno elegido y la tensión de los roedores. C57BL / 6 ratones son la cepa utilizada para la construcción de ratón transgénico y responden entre otras a la mielina de oligodendrocitos glicoproteína (MOG). El MOG epítopo inmunogénico 35-55 se suspende en adyuvante completo de Freund (CFA) antes de la inmunización y la toxina pertussis se aplica en el día de la inmunización y dos días más tarde. Los ratones desarrollan un &quot;clásico&quot; EAE monofásico autolimitada con parálisis fláccida ascendente dentro de 9-14 días después de la inmunización. Los ratones son evaluados diariamente utilizando un sistema de puntuación clínica de 25 a 50 días. Se discuten las consideraciones especiales para el cuidado de los animales con EAE, así como las posibles aplicaciones y limitaciones de este modelo.

Después de la inmunización, los ratones tienen que ser evaluados diariamente para cambios en el peso y los síntomas clínicos. Inicio de la enfermedad se correlaciona típicamente con una reducción de peso que podría comenzar 1-2 días antes de los síntomas de EAE son visibles. Los signos clínicos de la EAE suelen comenzar entre los días 9 y 14 después de la inmunización. Como las lesiones se localizan predominantemente en la médula espinal en MOG-EAE en ratones C57BL / 6, por lo general se desarrollan síntomas predominantemente motoras en un caudal a rostral patrón. Una imagen de ejemplo de un ratón inmunizado con síntomas de la EAE (calificación 6) se representa en la figura 1A. Algunos de los síntomas de EAE atípicos también pueden producirse como rodar en forma axial rotativo, aspecto encorvado o hipersensibilidad, no reflejadas en el EAE Clásico Partitura representan en la Tabla 1. Como los síntomas motores son la característica principal de este modelo, este resultado nos da una buena indicación de la gravedad de la enfermedad. Diferentes sistemas de monitoreo (por ejemplo, marcó el 0 -5 o 0-6) y más puntajes compuestos complejos que evalúan diferentes déficits también se han publicado. Tenga en cuenta que los ratones con síntomas severos tienen que ser sacado de la experiencia de acuerdo con el comité de cuidado de los animales institucional y uso respectivo. Los ratones muestran recuperación general parcial de los síntomas en los próximos 10 a 20 días. Un curso de la enfermedad representante se representa en la Figura 1B. Hay diferentes puntos de tiempo durante EAE que son de interés para la evaluación de parámetros de resultado. Algunos ensayos típicos que a menudo se pueden encontrar se describen muy brevemente. En el máximo de la enfermedad, los ratones pueden ser evaluados para la producción de citoquinas o la proliferación después de la reestimulación de las células inmunes aisladas con MOG 35-55 péptido in vitro (ensayo de recordatorio MOG). Las células inmunes también se pueden aislar desde el cerebro y la médula espinal de los ratones con síntomas de la EAE y se procesan adicionalmente, por ejemplo mediante citometría de flujo. El análisis histológico de secciones de médula espinal se puede realizar en la enfermedad mAximum para la carga de la lesión y la desmielinización, mientras que al tiempo después puntos marcadores de neurodegeneración y la muerte de las células neuronales puede ser de interés. <img alt="Figura 1" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51275/51275fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51275/51275fig1.jpg" width="600px" /> Figura 1. Resultados de Representante de EAE. A. imagen representativa de una inmunizados ratón C57BL / 6 con síntomas de la EAE (EAE anotar 6). Curso de la enfermedad B. Representante después de la inmunización de más de 30 días. Los datos se muestran como media y error estándar de la media (n = 5). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51275/51275fig1highres.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver la imagen más grande</a> .

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Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein MOG35-55 Induced Experimental Autoimmune Encephalomyelitis EAE in C57BL/6 Mice

La encefalomielitis autoinmune experimental (EAE) es un modelo animal establecido de la esclerosis múltiple. C57BL / 6 ratones se inmunizan con mielina de oligodendrocitos glicoproteína (MOG) péptido 35-55 (MOG 35-55), dando como resultado una parálisis flácida ascendente causada por las células inmunes autorreactivas en el sistema nervioso central. Se discutirán Protocolos para la inducción de la enfermedad y el seguimiento.

La mielina glicoproteína del oligodendrocito (MOG<sub&gt; 35-55</sub&gt;) Inducida por la encefalomielitis autoinmune experimental (EAE) en ratones C57BL / 6 ratones

Multiple sclerosis is a chronic neuroinflammatory demyelinating disorder of the central nervous system with a strong neurodegenerative component. While ...

myelin-oligodendrocyte-glycoprotein-mog35-55-induced-experimental

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein (MOG35-55) Induced Experimental Autoimmune Encephalomyelitis (EAE) in C57BL/6 Mice

80.9K vistas.  University of Münster.  La encefalomielitis autoinmune experimental (EAE) es un modelo animal establecido de la esclerosis múltiple. C57BL / 6 ratones se inmunizan con mielina de oligodendrocitos glicoproteína (MOG) péptido 35-55 (MOG 35-55), dando como resultado una parálisis flácida ascendente causada por las células inmunes autorreactivas en el sistema nervioso central. Se discutirán Protocolos para la inducción de la enfermedad y el seguimiento. 

Video: Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein MOG35-55 Induced Experimental Autoimmune Encephalomyelitis EAE in C57BL/6 Mice

Induction of Experimental Autoimmune Hypophysitis in SJL Mice

Autoimmune hypophysitis can be reproduced experimentally by the injection of pituitary proteins mixed with an adjuvant into susceptible mice1. Mouse models allow us to study how diseases unfold, often providing a good replica of the same processes occurring in humans. For some autoimmune diseases, like type 1A diabetes, there are models (the NOD mouse) that spontaneously develop a disease similar to the human counterpart. For many other autoimmune diseases, however, the model needs to be induced experimentally. A common approach in this regard is to inject the mouse with a dominant antigen derived from the organ being studied. For example, investigators interested in autoimmune thyroiditis inject mice with thyroglobulin2, and those interested in myasthenia gravis inject them with the acetylcholine receptor3. If the autoantigen for a particular autoimmune disease is not known, investigators inject a crude protein extract from the organ targeted by the autoimmune reaction. For autoimmune hypophysitis, the pathogenic autoantigen(s) remain to be identified4, and thus a crude pituitary protein preparation is used. In this video article we demonstrate how to induce experimental autoimmune hypophysitis in SJL mice.

This video shows how to induce autoimmune hypophysitis in SJL mice and how to assess its severity by histopathology.

La inducción de la hipofisitis autoinmune experimental en ratones SJL

Autoimmune hypophysitis can be reproduced experimentally by the injection of pituitary proteins mixed with an adjuvant into susceptible mice1. Mouse ...

Investigación

Inmunología e Infección

Overcoming Unresponsiveness in Experimental Autoimmune Encephalomyelitis (EAE) Resistant Mouse Strains by Adoptive Transfer and Antigenic Challenge

Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) is an inflammatory disease of the central nervous system (CNS) and has been used as an animal model for study of the human demyelinating disease, multiple sclerosis (MS). EAE is characterized by pathologic infiltration of mononuclear cells into the CNS and by clinical manifestation of paralytic disease. Similar to MS, EAE is also under genetic control in that certain mouse strains are susceptible to disease induction while others are resistant. Typically, C57BL/6 (H-2b) mice immunized with myelin basic protein (MBP) fail to develop paralytic signs. This unresponsiveness is certainly not due to defects in antigen processing or antigen presentation of MBP, as an experimental protocol described here had been used to induce severe EAE in C57BL/6 mice as well as other reputed resistant mouse strains. In addition, encephalitogenic T cell clones from C57BL/6 and Balb/c mice reactive to MBP had been successfully isolated and propagated.
The experimental protocol involves using a cellular adoptive transfer system in which MBP-primed (200 &mu;g/mouse) C57BL/6 donor lymph node cells are isolated and cultured for five days with the antigen to expand the pool of MBP-specific T cells. At the end of the culture period, 50 million viable cells are transferred into naive syngeneic recipients through the tail vein. Recipient mice so treated normally do not develop EAE, thus reaffirming their resistant status, and they can remain normal indefinitely. Ten days post cell transfer, recipient mice are challenged with complete Freund adjuvant (CFA)-emulsified MBP in four sites in the flanks. Severe EAE starts to develop in these mice ten to fourteen days after challenge. Results showed that the induction of disease was antigenic specific as challenge with irrelevant antigens did not induce clinical signs of disease. Significantly, a titration of the antigen dose used to challenge the recipient mice showed that it could be as low as 5 &mu;g/mouse. In addition, a kinetic study of the timing of antigenic challenge showed that challenge to induce disease was effective as early as 5 days post antigenic challenge and as long as over 445 days post antigenic challenge. These data strongly point toward the involvement of a "long-lived" T cell population in maintaining unresponsiveness. The involvement of regulatory T cells (Tregs) in this system is not defined.

Overcoming Unresponsiveness in Experimental Autoimmune Encephalomyelitis EAE Resistant Mouse Strains by Adoptive Transfer and Antigenic Challenge

Certain mouse strains are able to resist induction of experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) with myelin basic protein. Described here is a simple immunization protocol that reverses the unresponsiveness and induces paralytic disease in several typical EAE resistant mouse stains.

Superar la falta de respuesta en encefalomielitis autoinmune experimental (EAE) cepas de ratones resistentes a través de transferencia adoptiva y la estimulación antigénica

Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) is an inflammatory disease of the central nervous system (CNS) and has been used as an animal model for ...

Induction of Experimental Autoimmune Encephalomyelitis in Mice and Evaluation of the Disease-dependent Distribution of Immune Cells in Various Tissues

Multiple sclerosis is presumed to be an inflammatory autoimmune disease, which is characterized by lesion formation in the central nervous system (CNS) resulting in cognitive and motor impairment. Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) is a useful animal model of MS, because it is also characterized by lesion formation in the CNS, motor impairment and is also driven by autoimmune and inflammatory reactions. One of the EAE models is induced with a peptide derived from the myelin oligodendrocyte protein (MOG)35-55 in mice. The EAE mice develop a progressive disease course. This course is divided into three phases: the preclinical phase (day 0 - 9), the disease onset (day 10 - 11) and the acute phase (day 12 - 14). MS and EAE are induced by autoreactive T cells that infiltrate the CNS. These T cells secrete chemokines and cytokines which lead to the recruitment of further immune cells. Therefore, the immune cell distribution in the spinal cord during the three disease phases was investigated. To highlight the time point of the disease at which the activation/proliferation/accumulation of T cells, B cells and monocytes starts, the immune cell distribution in lymph nodes, spleen and blood was also assessed. Furthermore, the levels of several cytokines (IL-1&#946;, IL-6, IL-23, TNF&#945;, IFN&#947;) in the three disease phases were determined, to gain insight into the inflammatory processes of the disease. In conclusion, the data provide an overview of the functional profile of immune cells during EAE pathology.

This manuscript describes the methods for induction and scoring of the experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) model, together with the assessment of immune cell distribution and mRNA cytokine levels in lymph nodes, spleen, blood and spinal cord using flow cytometry and quantitative PCR, respectively, at various disease phases.

La inducción de la encefalomielitis autoinmune experimental en ratones y evaluación de la distribución de la enfermedad dependiente de las células inmunes en diversos tejidos

Multiple sclerosis is presumed to be an inflammatory autoimmune disease, which is characterized by lesion formation in the central nervous system (CNS) ...

Simple and Efficient Production and Purification of Mouse Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein for Experimental Autoimmune Encephalomyelitis Studies

Multiple sclerosis (MS) is a chronic inflammatory disease of the central nervous system (CNS), thought to occur as a result of autoimmune responses targeting myelin. Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) is the most common animal model of CNS autoimmune disease, and is typically induced via immunization with short peptides representing immunodominant CD4+ T cell epitopes of myelin proteins. However, B cells recognize unprocessed protein directly, and immunization with short peptide does not activate B cells that recognize the native protein. As recent clinical trials of B cell-depleting therapies in MS have suggested a role for B cells in driving disease in humans, there is an urgent need for animal models that incorporate B cell-recognition of autoantigen. To this end, we have generated a new fusion protein containing the extracellular domain of the mouse version of myelin oligodendrocyte glycoprotein (MOG) as well as N-terminal fusions of a His-tag for purification purposes and the thioredoxin protein to improve solubility (MOGtag). A tobacco etch virus (TEV) protease cleavage site was incorporated to allow the removal of all tag sequences, leaving only the pure MOG1-125 extracellular domain. Here, we describe a simple protocol using only standard laboratory equipment to produce large quantities of pure MOGtag or MOG1-125. This protocol consistently generates over 200 mg of MOGtag protein. Immunization with either MOGtag or MOG1-125 generates an autoimmune response that includes pathogenic B cells that recognize the native mouse MOG.

We describe a simple protocol using only basic lab equipment to generate and purify large quantities of a fusion protein that contains mouse Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein. This protein can be used to induce experimental autoimmune encephalomyelitis driven by both T and B cells.

Producción simple y eficiente y purificación de ratón mielina de oligodendrocitos de la glucoproteína de la encefalomielitis autoinmune experimental Estudios

Multiple sclerosis (MS) is a chronic inflammatory disease of the central nervous system (CNS), thought to occur as a result of autoimmune responses ...

Visualizing Impairment of the Endothelial and Glial Barriers of the Neurovascular Unit during Experimental Autoimmune Encephalomyelitis In Vivo

The neurovascular unit (NVU) is composed of microvascular endothelial cells forming the blood-brain barrier (BBB), an endothelial basement membrane with embedded pericytes, and the glia limitans composed by the parenchymal basement membrane and astrocytic end-feed embracing the abluminal aspect of central nervous system (CNS) microvessels. In addition to maintaining CNS homeostasis the NVU controls immune cell trafficking into the CNS. During immunosurveillance of the CNS low numbers of activated lymphocytes can cross the endothelial barrier without causing BBB dysfunction or clinical disease. In contrast, during neuroinflammation such as in multiple sclerosis or its animal model experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) a large number of immune cells can cross the BBB and subsequently the glia limitans eventually reaching the CNS parenchyma leading to clinical disease. 
Immune cell migration into the CNS parenchyma is thus a two-step process that involves a sequential migration across the endothelial and glial barrier of the NVU employing distinct molecular mechanisms. If following their passage across the endothelial barrier, T cells encounter their cognate antigen on perivascular antigen-presenting cells their local reactivation will initiate subsequent mechanisms leading to the focal activation of gelatinases, which will enable the T cells to cross the glial barrier and enter the CNS parenchyma. Thus, assessing both, BBB permeability and MMP activity in spatial correlation to immune cell accumulation in the CNS during EAE allows to specify loss of integrity of the endothelial and glial barriers of the NVU. 
We here show how to induce EAE in C57BL/6 mice by active immunization and how to subsequently analyze BBB permeability in vivo using a combination of exogenous fluorescent tracers. We further show, how to visualize and localize gelatinase activity in EAE brains by in situ zymogaphy coupled to immunofluorescent stainings of BBB basement membranes and CD45+ invading immune cells.

Here, we present protocols to investigate impairment of the neurovascular unit during experimental autoimmune encephalomyelitis in vivo. We specifically address how to determine blood-brain barrier permeability and gelatinase activity involved in leukocyte migration across the glia limitans.&#160;

Visualizar el deterioro de las barreras endoteliales y Glial de la unidad Neurovascular durante la encefalomielitis Autoinmune Experimental In Vivo

The neurovascular unit (NVU) is composed of microvascular endothelial cells forming the blood-brain barrier (BBB), an endothelial basement membrane with ...

Adoptive Immunotherapy of iNKT Cells in Glucose-6-Phosphate Isomerase (G6PI)-Induced RA Mice

Rheumatoid arthritis (RA) is a complex chronic inflammatory autoimmune disease. The pathogenesis of the disease is related to invariant natural killer T (iNKT) cells. Patients with active RA present fewer iNKT cells, defective cell function, and excessive polarization of Th1. In this study, an RA animal model was established using a mixture of hGPI325-339 and hGPI469-483 peptides. The iNKT cells were obtained by in vivo induction and in vitro purification, followed by infusion into RA mice for adoptive immunotherapy. The in vivo imaging system (IVIS) tracking revealed that iNKT cells were mainly distributed in the spleen and liver. On day 12 after cell therapy, the disease progression slowed down significantly, the clinical symptoms were alleviated, the abundance of iNKT cells in the thymus increased, the proportion of iNKT1 in the thymus decreased, and the levels of TNF-&#945;, IFN-&#947;, and IL-6 in the serum decreased. Adoptive immunotherapy of iNKT cells restored the balance of immune cells and corrected the excessive inflammation of the body.

Adoptive Immunotherapy of iNKT Cells in Glucose-6-Phosphate Isomerase G6PI-Induced RA Mice

This protocol uses G6PI mixed peptides to construct rheumatoid arthritis models that are closer to that of human rheumatoid arthritis in CD4+ T cells and cytokines. High purity invariant natural killer T cells (mainly iNKT2) with specific phenotypes and functions were obtained by in vivo induction and in vitro purification for adoptive immunotherapy.

Inmunoterapia adoptiva de células iNKT en ratones RA inducidos por glucosa-6-fosfato (G6PI)

Rheumatoid arthritis (RA) is a complex chronic inflammatory autoimmune disease. The pathogenesis of the disease is related to invariant natural killer T ...

Flow Cytometric Analysis of Lymphocyte Infiltration in Central Nervous System during Experimental Autoimmune Encephalomyelitis

Multiple sclerosis (MS) is an autoimmune disease of the central nervous system (CNS) caused by the combination of environmental factors and susceptible genetic background. Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) is a typical disease model of MS widely used for investigating the pathogenesis in which T lymphocytes specific for myelin antigens initiate an inflammatory reaction in CNS. It is very important to assess how lymphocytes in the CNS regulate the development of disease. However, the approach for measuring the quantity and quality of infiltrated lymphocytes in the CNS is very limited due to the difficulties in isolating and detecting infiltrated lymphocytes from the brain. This manuscript presents a protocol for that is useful for the isolation, identification, and characterization of infiltrated lymphocytes from the CNS and will be helpful for our understanding of how lymphocytes are involved in the development of the CNS autoimmune disease.

This manuscript presents a protocol to induce active experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) in mice. A method for the isolation and characterization of the infiltrated lymphocytes in the central nervous system (CNS) is also presented to show how lymphocytes are involved in the development of CNS autoimmune disease.

Análisis citométrico de flujo de infiltración de linfocitos en el sistema nervioso central durante la encefalomielitis autoinmune experimental

Multiple sclerosis (MS) is an autoimmune disease of the central nervous system (CNS) caused by the combination of environmental factors and susceptible ...

Mejora de la inmunogenicidad por Mycobacterium paratuberculosis en la encefalomielitis autoinmune

Adjuvant Activity of Mycobacterium paratuberculosis in Enhancing the Immunogenicity of Autoantigens During Experimental Autoimmune Encephalomyelitis

Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) induced by myelin oligodendrocyte glycoprotein (MOG) requires immunization by a MOG peptide emulsified in complete Freund&#39;s adjuvant (CFA) containing inactivated Mycobacterium tuberculosis. The antigenic components of the mycobacterium activate dendritic cells to stimulate T-cells to produce cytokines that promote the Th1 response via toll-like receptors. Therefore, the amount and species of mycobacteria present during the antigenic challenge are directly related to the development of EAE. This methods paper presents an alternative protocol to induce EAE in C57BL/6 mice using a modified incomplete Freund&#39;s adjuvant containing the heat-killed Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis strain K-10.
M. paratuberculosis, a member of the Mycobacterium avium complex, is the causative agent of Johne&#39;s disease in ruminants and has been identified as a risk factor for several human T-cell-mediated disorders, including multiple sclerosis. Overall, mice immunized with Mycobacterium paratuberculosis showed earlier onset and greater disease severity than mice immunized with CFA containing the strain of M. tuberculosis H37Ra at the same doses of 4 mg/mL. The antigenic determinants of Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis (MAP)&#160;strain K-10 were able to induce a strong Th1 cellular response during the effector phase, characterized by significantly higher numbers of T-lymphocytes (CD4+ CD27+), dendritic cells (CD11c+ I-A/I-E+), and monocytes (CD11b+ CD115+) in the spleen compared to mice immunized with CFA. Furthermore, the proliferative T-cell response to the MOG peptide appeared to be highest in M. paratuberculosis-immunized mice. The use of an encephalitogen (e.g., MOG35-55) emulsified in an adjuvant containing M. paratuberculosis in the formulation may be an alternative and validated method to activate dendritic cells for priming myelin epitope-specific CD4+ T-cells during the induction phase of EAE.

Autor destacado: Actividad adyuvante de Mycobacterium paratuberculosis en la mejora de la inmunogenicidad de los autoantígenos durante la encefalomielitis autoinmune experimental  

Here, we present an alternative protocol to actively induce experimental autoimmune encephalomyelitis in C57BL/6 mice, using the immunogenic epitope myelin oligodendrocyte glycoprotein (MOG)35-55 suspended in incomplete Freund's adjuvant containing the heat-killed Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis.

Actividad adyuvante de Mycobacterium paratuberculosis en la mejora de la inmunogenicidad de los autoantígenos durante la encefalomielitis autoinmune experimental

Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) induced by myelin oligodendrocyte glycoprotein (MOG) requires immunization by a MOG peptide emulsified in ...