Embriones de pollo son un gran modelo para el estudio temprano del desarrollo de vertebrados, en parte porque son fáciles y baratos de mantener. A diferencia de la mayoría de los organismos modelo, que se cría en el laboratorio, huevos de gallina fertilizados se compran de un proveedor externo. Además, manteniendo y trabajando con los huevos requieren equipo poco especializado. Este video proporcionará antecedentes generales sobre la adquisición y mantenimiento de pollos huevos, técnicas esenciales para trabajar con el desarrollo de embriones y algunas aplicaciones prácticas de estos métodos.

Antes de que discutimos trabajo con polluelos en el laboratorio, permite revisar cómo las gallinas cuidaron sus huevos en casa. Aunque los huevos son fertilizados ya cuando se pusieron, desarrollo de chick se detiene cuando los huevos están expuestos a temperaturas exteriores más frías. Después de poner unos 12 huevos la gallina se sienta en el nido para reanudar el desarrollo del embrión. Durante su incubación, la gallina gira los huevos para calentarlos uniformemente y evitar que el embrión se pegue a la cáscara. Si todo va bien, 21 días más tarde, mamá tiene ella misma una nidada de polluelos.

¿Cómo recoger los científicos suficientes huevos para sus experimentos? Umm... que podría tomar un tiempo. Porque los pollos son ampliamente domesticados, huevos fecundados pueden obtenerse fácilmente de una granja de criadero o cría. Huevos pueden solicitarse incluso en etapas de desarrollo específicas.

Una vez que los huevos han llegado en el laboratorio, puede ser almacenados a 13-16 ° C durante 5 días. Cuando estés listo para que puedan desarrollar, permitir que los huevos a temperatura ambiente, luego transferirlos a una incubadora oscilante a 37 ° C con 60% de humedad hasta que han llegado a la etapa deseada.

Mayoría de los experimentos realizada en pollitos requiere unos pasos preparatorios, como comprobar si los huevos que recibió fueron fertilizados en primer lugar. Un enfoque sencillo es utilizar una caja de fuente o candler luz brillante para iluminar el huevo. Usando esta técnica, conocida como mira al trasluz, se pueden visualizar estructuras internas tales como los vasos sanguíneos para confirmar la presencia de un embrión.

Dejando el huevo intacto mejora la supervivencia de la chica, pero la cáscara impide el acceso al embrión. Para romper este problema, los investigadores utilizan una técnica llamada ventanas.

Comenzar colocando los huevos de su lado y marcando la parte superior para identificar el lado en que el embrión se elevará. Para evitar dañar la yema mientras se reduce a una ventana, una pequeña cantidad de albúmina o clara de huevo, se retira para bajar el embrión de la cáscara. Para ello, primero esterilizar la cáscara por limpiar con etanol al 70%. Cuando se haya secado la cáscara, Lisa un pedazo de cinta adhesiva sobre el extremo romo del huevo. A continuación, utilice una aguja estéril para perforar la cinta y la cáscara. Insertar la aguja hacia abajo para no dañar la yema y retirar 5 ml de albúmina. Por último, para evitar la fuga de albúmina, sellar el agujero con otro trozo de cinta.

Para cortar la cáscara, coloque un trozo de cinta sobre el área que se va a la ventana. Usando un par de tijeras, hacer un pequeño agujero en la cáscara y comienza a cortar una abertura circular. Durante este proceso, la cinta evitará que fragmentos de la cáscara caiga sobre el embrión.

Incluso después de ventanas, embriones de etapa temprana pueden ser difíciles de visualizar debido a su pequeño tamaño y transparencia. Para mejorar el contraste entre el embrión y la yema de huevo diluida, puede utilizarse tinta de la India no tóxico. La tinta es había inyectada en la yema de huevo con el embrión y permite difundir. El embrión puede verse ahora en mayor contraste contra el fondo oscuro. Manipulaciones experimentales, la ventana debe cerrarse perfectamente con la cinta y el huevo colocado en la incubadora.

Ahora que usted está familiarizado con técnicas básicas para trabajar con los huevos, vamos a ver cómo se utilizan estos métodos para llevar a cabo experimentos en embriones de pollo.

Para empezar, mira al trasluz se puede utilizar para identificar la ubicación de estructuras embrionarias en huevos intactos. Por ejemplo, las membranas extraembrionarias del embrión de pollo se usan para la propagación de virus. Para infectar la membrana que mira al trasluz se realiza para localizar la interfaz entre la cavidad alantoidea y el saco de aire, con el fin de inyectar virus en la cavidad alantoidea sin dañar el embrión. Después de unos días de incubación, se pueden cosechar grandes cantidades de partículas virales del líquido alantoideo.

Ventanas de huevo es una práctica muy útil ya que permite el acceso a los embriones para la experimentación. Muchos experimentos de comienzan con la entrega de ADN en tejidos específicos mediante microinyección. Los electrodos se colocan alrededor del tejido de interés y un campo eléctrico se aplica temporalmente permeabilizar la membrana celular y conducir los ácidos nucleicos en la célula.

Cuando se realizan experimentos en embriones tempranos, inyección de tinta de la India es especialmente útil para la visualización de los tejidos transparentes. Aquí, el contraste mejorado permite a los investigadores microinject una solución de ADN en dominios de tejido refinado. En definitiva, esta técnica puede producir las células individualmente etiquetadas, que pueden ser monitoreadas en el tiempo para seguir las divisiones de célula.

Sólo ha visto video de Zeus sobre el mantenimiento de chick. Esta presentación ha cubierto básica manejo y mantenimiento de huevos de gallina, técnicas comunes para trabajar con pollos y algunos ejemplos de cómo se aplican estos métodos en la investigación biológica. ¡Gracias por ver!