Este estudio fue apoyado por el NIH R37 DK54824 y R01 DK57284 subvenciones a LB.

Todos los procedimientos descritos aquí son aprobados por el comité de IACUC en la Universidad de Pittsburgh. 1. Soluciones <ol><li> Preparar la solución de Krebs de acuerdo a la receta. Composición en mM: NaCl 118, KCl 4,7, CaCl2 1,9, MgSO4 1,2, NaHCO3 24.9, KH 2 PO 4 1.2, dextrosa 11.7. </li><li> Airear Krebs con un 95% de O 2, 5% de CO 2 y colocarlo en un baño de 37 º C el agua que se utilizará durante todo el experimento. Coloque de lado ~ 200 ml de solución de Krebs aireado a temperatura ambiente que se utilizarán para la disección de tejidos. </li><li> Medir pH (~ 7.4) y la osmolaridad (~ 300 mOsm) de aireado Krebs. </li></ol> 2. experimental (Figura Esquema 1A) <ol><li> Rellene aireado (95% O 2, 5% de CO 2) cámaras con 10 ml de Krebs. </li><li> Encienda la bomba de circulación de agua para calentar las cámaras de hasta 37 ° C; encender el equipo necesario: amplificador (s), estimulador (s) y grabación de software. </li><li> Calibrar transductores con un 1 g de peso. </li></ol> 3. tisular (Figura 1B) Retire la vejiga de un Sprague Dawley adultas ingenuo hembra (200-250 g; ~ 10-12 semanas de edad) siguiendo estos pasos: <ol><li> Prepare el área de disección y los instrumentos necesarios: máquinas de afeitar eléctricas, pinzas con dientes, hoja de bisturí, tijeras de disección, micro tijeras, dos pinza de disección (autores prefieren Dumont fórceps # 3), clips de tejido (o sutura de seda), un plato de disección Sylgard recubiertos con Krebs y alfileres de disección de tejidos. </li><li> Anestesiar al animal con la inhalación de isoflurano (4% en O 2) en la cámara de inducción. Use pomada veterinaria en los ojos para evitar la sequedad, mientras que bajo anestesia. Controlar continuamente el nivel de anestesia mediante la observación de la tasa de respiración, la respuesta a los estímulos externos, y la pérdida de la extremidad trasera retirar reflejo. </li><li> Cuando el animal se anestesia el afeitado una baja del abdomenrea. Exponer los órganos de la pelvis a través de una incisión abdominal en la línea media. Identificar la vejiga y la uretra. Retire la vejiga por el corte en el cuello de la vejiga cerca de la uretra proximal. Coloque tejido inmediatamente en el plato recubierto Sylgard lleno con solución de Krebs aireada. </li><li> Si es necesario, retire el tejido adicional en este momento: la uretra, piezas de gastrointestinal (GI) y / o de la próstata, etc </li><li> Sacrificio del animal utilizando métodos aprobados IACUC (por ejemplo, por sobredosis de anestésico o asfixia de CO 2 seguido de un método secundario). </li><li> Inserte pernos de tejido a través de la disección de la cúpula vesical, el cuello y los uréteres, para estabilizar el tejido para su posterior disección. No estire el tejido. Retire, tejido graso conectivo, la uretra proximal, y uréteres si están presentes. </li><li> Abra la vejiga desde la base hasta la cúpula para crear una hoja plana, lado serosa abajo / lado luminal (Figura 1B). Coloque pasadores de disección en cada esquina del tejido. Retire dom vejigaE y tejido del cuello. </li><li> Si el propósito del experimento es determinar la contribución de la mucosa (urotelio y lámina propia - véase el diagrama de la Figura 1C) a la contracción del músculo liso, comparar las propiedades de las tiras del detrusor con y sin la mucosa unida. Para ello, antes de cortar el tejido en tiras, retire con cuidado la capa de la mucosa utilizando iris primavera tijeras y pinzas finas bajo un microscopio de disección. Al final del experimento, fijar las tiras para la tinción H &amp; E para confirmar la eliminación completa de la mucosa. Tenga en cuenta que este procedimiento es más fácil en la vejiga del ratón que en vejiga de rata. </li><li> Cortar el tejido a lo largo de la base de la cúpula en tiras de ~ 2 x 8 mm (Figura 1B). Ate o adjuntar un clip de tejido a ambos extremos de cada tira. NOTA: Una vejiga de rata por lo general se puede cortar en tiras 4, pero el número de tiras puede aumentar o disminuir dependiendo del tamaño del animal / vejiga. </li><li> Transferir las tiras a la expercámaras imental. Una un extremo de cada tira a un transductor de fuerza, que mide la contracción del tejido, y el otro a una varilla de vidrio / de metal fijo. NOTA: cámaras de tejidos varían en tamaño (0,2 ml a 20 ml o más). Cámaras típicas para vejigas de roedores son 5-20 ml, que proporcionan una altura suficiente para que las tiras se sumergieron completamente en la solución. Algunas cámaras vienen con una función de electrodos de estimulación, no otros. Se debe tener cuidado para asegurar que todas las conexiones de los electrodos están en buen estado, de lo contrario la estimulación de campo eléctrico no es confiable. </li><li> Aplicar una cantidad definida de la fuerza para cada tira por el estiramiento suavemente el tejido hasta que la tensión alcanza la línea de base 1 g (~ 10 mN). Inicialmente, el tejido tiende a relajarse, que se registra como una disminución en la tensión de línea de base. Lavar el tejido aproximadamente cada 15 min usando la cálida Krebs aireado y ajustar la tensión de la línea de base a 1 g después de cada lavado. Deje que el tejido se equilibre durante ~ 1-2 horas o hasta que la tensión de línea de base es estable (es decir, hay una mayor relajación del tejido). </li><li> Se alcanza prueba la viabilidad del tejido mediante la adición de KCl (80 mM) directamente al baño para ~ 5 min, o hasta que una respuesta meseta. Las respuestas a altas concentraciones de KCl también se pueden repetir durante el experimento o al final del experimento y se utilizan para la normalización de las respuestas a otros fármacos o entre las tiras (véase la normalización en la sección de análisis de datos). </li><li> Tejido Lavar varias veces (3-5x) con la tibia aireada Krebs para permitir que los tejidos regresen a las condiciones pre-tratamiento. </li></ol> 4. Estimulación Protocolos <ol><li> Para investigar los efectos de la patología en la actividad miogénica espontánea o tono del músculo liso, utilizar tiras de músculo liso de diferentes modelos animales, tales como SCI, BOO, o neonatos. Figura 2 ilustra el uso de este método para investigar los cambios en la actividad espontánea de la vejiga durante el desarrollo y después de la lesión. Además, los agentes farmacológicos pueden ser utilizados para modular spactividad ontaneous. Figura 3 ilustra el efecto de los moduladores del canal KCNQ, flupirtina y XE991, sobre la actividad espontánea y tono del músculo liso. </li><li> Para constructo estimulación muscular curvas de respuesta de concentración lisas farmacológicas mediante la adición de compuestos a partir de soluciones madre concentradas directamente al baño a intervalos de tiempo definidos. El consumo de drogas y el vehículo en bandas paralelas para dar cuenta de los efectos de los vehículos y de tiempo. <ol><li> Haga soluciones madre de los compuestos de ensayo deseados a 1000x la concentración de trabajo final. Para carbacol (CCh), un agonista de los receptores muscarínicos, preparar siguientes poblaciones: 10 -5 M, 3 x 10 -5 M, 10 -4 M, 3 x 10 -4 M, 10 -3 M, 3 x 10 -3 M , 10 -2 M. Las concentraciones finales en el baño es de 10 -8 M a 10 -5 M (Figuras 4C, D). Para neuromedina B (NMB), un receptor de bombesina subtipo 1 agonista, preparar siguientes poblaciones: 10 -8 M, 10 -7M, 10 -6 M, 10 -5 M, 10 -4 M, 10 -3 M y concentraciones finales en el baño son 10 -11 M a 10 -6 M. Se espera que tanto CCh y NMB para aumentar la contractilidad del tejido. </li><li> Para un baño de tejido de 10 ml, añadir 10 l de cada solución madre CCh tan pronto como la respuesta alcanza una meseta (Figura 4C, D). En tiras paralelas añadir la misma cantidad de vehículo (agua). Del mismo modo, añadir 10 l de cada solución neuromedina B ~ acción cada 5 min. NOTA: Observar el efecto excitatorio de NMB y CCh en tono del músculo liso en tiras de diferentes especies en la Figura 4. </li><li> Investigar las propiedades de relajación de los músculos lisos en los tejidos pre-contrato con un agente excitador, por lo general CCh o KCl. </li><li> Para bloquear una respuesta agonista, pretratar el tejido durante 10-20 min con el antagonista para permitir la penetración del tejido, antes de la estimulación agonista. </li></ol></li><li> Por estimulación neuralulación del músculo liso, también llamada estimulación de campo eléctrico (EFS) siga los pasos 1 a 3.13 y continuar como se describe a continuación. EFS está destinado a activar selectivamente los nervios frente del músculo liso. Parámetros para la estimulación deben ser elegidos cuidadosamente para evitar la estimulación directa del músculo liso. <ol><li> Establecer parámetros de estimulación: tipo de estímulo (pulsos individuales o trenes), la duración (duración del pulso y la duración de tren), la frecuencia y la intensidad, como se describe en los pasos a continuación y se ilustra en las figuras 5A, B. <ol><li> Para sola estimulación de pulso, set duración del pulso, intervalo entre el estímulo y la cantidad de estímulos deseados. Habituales parámetros de duración de estimulación son pulsos individuales de 0,05-0,3 mseg de duración entregado a intervalos deseados (Figura 5A). Siga el paso 4.3.1.4 de la intensidad del estímulo. </li><li> Para la estimulación de tren, establecer la duración de trenes y el intervalo entre trenes. Los valores típicos de tejido de la vejiga son 3-10 seg entregados al menos 1 men aparte (Figura 5B). Si se produce la fatiga del tejido (es decir EFS contracciones disminuyen durante el período de control), aumentar el intervalo entre trenes. </li><li> Establecer la frecuencia de los trenes de estímulos (número de pulsos de un tren - Figura 5B). Ejecutar una curva de respuesta de frecuencia que va desde 0,5 hasta 50 Hz. Frecuencias típicas para la vejiga son 10-20 Hz, que dan contracciones reproducibles y estables mediadas por ATP y ACh. Observar las respuestas dependientes de la frecuencia a la estimulación EFS en tiras de vejiga del ratón en la Figura 5 demuestran cómo este método se puede utilizar para evaluar la contribución de los mecanismos colinérgicos y purinérgicos a la neurotransmisión. </li><li> Establecer intensidad del estímulo: aumentar sistemáticamente la intensidad (voltaje) del estímulo hasta que la amplitud de la contracción alcanza una meseta (si se utiliza trenes de mantener constante la frecuencia). </li><li> Ajuste la intensidad del estímulo en función de laobjetivo del experimento. Si el objetivo es aumentar las contracciones neuralmente evocada, a continuación, utilizar la intensidad submáxima de manera que la amplitud de la contracción es de ~ 50% de la contracción máxima. Si el objetivo es disminuir las contracciones neuralmente evocada, a continuación, establezca la intensidad de ~ 80% de la amplitud máxima para evitar la fatiga del tejido. </li></ol></li><li> Una vez establecidos los parámetros de estimulación (duración, frecuencia e intensidad), permitirá a ~ 20-30 min para EFS- evocó las contracciones se estabilice antes de la prueba de drogas. NOTA: Para verificar la selectividad de EFS para la transmisión neuronal, bloque de transmisión neuronal con el bloqueador de los canales de Na +, la tetrodotoxina (TTX; 0,5-1 M). Realice este paso al comienzo del experimento, como TTX lava relativamente fácil. Además, realizar esta al final del experimento (véase el paso 4.3.5. Abajo). </li><li> Preparar soluciones madre a las concentraciones de trabajo 1,000x finales para: alfa, beta-ATP de metileno (ABMA; un activador del receptor purinérgicoy desensibilizante) 10 -2 M, atropina (un antagonista del receptor muscarínico) 10 -3 M (Figura 5C). Observe otros ejemplos en la Figura 6. El agonista del receptor 5HT4, cisaprida (3 x 10 -6 M, 10 -6 M, 3 x 10 -5 M, 10 -5 M, 3 x 10 -4 M, 10 -4 M, 3 x 10 -3 M, 10 -3 M), aumenta la contractilidad del tejido y SB-203186 (3 x 10 -3 M), un antagonista del receptor 5HT4, invierte los efectos de la cisaprida. </li><li> Para probar los efectos de la ABMA y atropina en EFS (Figura 5C), realizar dos curvas de respuesta de frecuencia de control. Añadir 10 l de 10 -2 M ABMA al baño para una concentración final de 10 mM. Esto se contraerá el tejido debido a la estimulación directa de los receptores purinérgicos en el músculo liso. Después de la respuesta vuelve a la línea de base, repetir las curvas de respuesta de frecuencia. Añadir 10 l de 10 -3 M de atropina para un concentrat definitivaion de 1 mM. Después de ~ 10 min (necesario para la atropina para bloquear los receptores muscarínicos), repetir las curvas de respuesta de frecuencia. En tiras paralelas añadir 10 l de vehículo, agua, en cada paso. NOTA: Para otros ejemplos en la Figura 6, añadir 10 l de cada solución de stock cisaprida a intervalos definidos de tiempo (~ cada 15 min; véase la discusión), seguido por 10 l de SB-203186 de stock solución directamente al baño y vigilar su efecto en contracción EFI inducida. En tiras paralelas añadir 10 l de vehículo, DMSO. Observar los efectos de la cisaprida, un agonista del receptor 5HT4, sobre las contracciones evocadas-EFS en los tejidos de la vejiga e íleon humanos en la Figura 6. Además, observe el efecto de DMSO, el vehículo de la cisaprida, el EFS evocados contracciones en la vejiga humana y tejidos íleon . </li><li> Al final del protocolo de EFS verificar la selectividad de EFS mediante el bloqueo de la transmisión neural con el bloqueador del canal de Na +, tetrodotoxina (TTX; 0,5-1 y# 181; M). Si las contracciones resistentes a TTX están todavía presentes, se recomienda ajustar la duración y la intensidad del estímulo en experimentos posteriores. </li></ol></li><li> Para determinar los efectos de los fármacos en los sitios pre o post-sináptica (Figura 7A) siga los pasos 1 a 4.3.2. Establecer respuestas reproducibles al carbachol y EFS, a continuación, añadir la droga X. </li><li> Al final del experimento, desenganchar o desatar las tiras, secar suavemente sobre un trozo de papel de seda para eliminar el exceso de líquido y medir el peso de cada tira con una balanza. También mida la longitud del tejido usando un calibrador para determinar el área de la sección transversal. Esta información se utiliza para la normalización de los datos (ver sección 5.4). </li></ol> Análisis 5. Datos Analizar datos utilizando el software adecuado (por ejemplo, Windaq, LabChart). <ol><li> Para la actividad espontánea, seleccione una ventana de al menos 30 segundos antes y en el pico de la respuesta inducida por drogas y measure amplitud y frecuencia de la actividad miogénica (Figura 3). <ol><li> Utilice el análisis de transformación rápida de Fourier para determinar el espectro de frecuencias que contribuyen a respuestas contráctil y si hay diferencias entre las diferentes partes de la vejiga (por ejemplo, la cúpula vs. cuello) o con el desarrollo, patología, y las drogas 8. </li></ol></li><li> Para efectos sobre el tono del músculo liso seleccionar una ventana de al menos 10-30 segundos antes y en el pico de la respuesta inducida por fármacos y medir la amplitud de la contracción. </li><li> Para efectos sobre las contracciones neuralmente evocadas-medir la amplitud, la duración y el área bajo la curva de las contracciones (al menos 3) antes y en el pico de la respuesta inducida por fármacos. NOTA: Es necesario medir tanto la amplitud y el área bajo la curva de las contracciones inducidas por EFS porque los componentes purinérgicos y colinérgicas tienen diferentes cinéticas. El componente purinérgico es rápido y transitorio (ATP activa purinergic ionotrópicos canales tales como P2X1 que permiten afluencia rápida de calcio, entonces se insensibilizan), contribuyendo así más a la respuesta de amplitud de pico y menos para el área bajo la curva. El componente colinérgico es más lenta y sostenida (ACh activa los receptores muscarínicos metabotrópicos, que requieren más tiempo para activar las vías intracelulares que en última instancia, activan canales iónicos que despolarizan del músculo liso para inducir una contracción). Por lo tanto, el componente muscarínico se captura mejor midiendo el área bajo la curva. </li><li> Normalizar los datos para poder comparar los resultados entre los tiras y tratamientos farmacológicos. El parámetro elegido para la normalización no debe estar influenciada por los compuestos de ensayo, condición patológica o estudió diseño experimental. Entre estos parámetros, el peso utilización tira, área de la sección transversal, las respuestas de KCl (Figura 4B),% de la respuesta máxima (Figura 7B) o% de la respuesta máxima a otro agente contráctil(Por ejemplo, CCh) o agentes de relajación (por ejemplo, papaverina). </li></ol>

Los autores declaran que no tienen intereses financieros en competencia.

En este trabajo se describe un método simple en la contractilidad del músculo liso in vitro que se puede utilizar para hacer frente a una serie de importantes cuestiones científicas relacionadas con la fisiología y la patología de la vejiga, así como ayudar al descubrimiento de nuevos fármacos para el tratamiento de disfunciones de la vejiga. Hemos ilustrado el uso de este método para la evaluación de las propiedades de desarrollo, patológicas y farmacológicas de la contractilidad del múscu...

El músculo liso de la vejiga se relaja para permitir el almacenamiento de la orina, y contratos para provocar la eliminación de orina. Relajación es mediado por las propiedades intrínsecas del músculo liso y por la liberación tónica de norepinefrina (NE) de los nervios simpáticos, que activa los receptores adrenérgicos beta (β 3 AR en humanos) en el detrusor. La micción se logra mediante la inhibición de la entrada simpática y la activación de los nervios parasimpáticos que la liberación de ACh / ATP se contraiga el músculo liso de la vejiga 1. Numerosos estados patológicos, incluyendo el cerebro y / o lesión de la médula espinal, enfermedades neurodegenerativas, diabetes, obstrucción de la salida de la vejiga o cistitis intersticial, pueden alterar profundamente la función de la vejiga, con graves repercusiones en la calidad de vida del paciente 2. Estas condiciones alteran la contractilidad del músculo liso al afectar a uno o más componentes de la vejiga: el músculo liso, el aferente o nervios eferentes y / o lamucosa. Varios in vivo y métodos in vitro para estudiar la función de la vejiga se han desarrollado. In vivo, cistometría es la principal medida de la función de la vejiga. Aunque esta es una preparación intacta que permite la recogida de información en virtud próximo a las condiciones fisiológicas, hay una serie de circunstancias en las que se prefiere el uso de tiras de músculo liso. Estos incluyen situaciones en las técnicas quirúrgicas y / o manipulaciones farmacológicas que puedan afectar a la supervivencia y la estabilidad de la preparación in vivo, o cuando los estudios requieren el uso de tejido humano o productos químicos caros. Este método también facilita un examen de los efectos de los fármacos, la edad y la patología en cada componente de la vejiga, es decir, el músculo liso, mucosa, aferentes y nervios eferentes. Tiras de vejiga se han empleado en los últimos años por muchos grupos para responder a una serie de preguntas científicas. Estaban acostumbrados a evaluate cambios en la actividad espontánea miogénica inducida por la patología. Se cree que esta actividad para contribuir a los síntomas de urgencia y frecuencia de la vejiga hiperactiva (OAB), y por lo tanto es una diana para fármacos se están desarrollando para OAB 3-9. Tiras de vejiga también se utilizaron para investigar los factores miogénicas y neuronales que modulan el tono del músculo liso con el objetivo de descubrir los canales iónicos y / o receptores y / o vías intracelulares que podrían ser objeto de inducir la relajación o contracción del músculo liso 3,10- 13. Otros estudios se han centrado en la naturaleza de la neurotransmisión, incluyendo transmisores y receptores implicados y los cambios inducidos por la patología 14,15. Además, el método ha sido utilizado para las comparaciones entre los tejidos de diferentes especies jóvenes de 16 18, entre los órganos 19-21, y la evaluación de las relaciones estructura-actividad de drogas 22-24. Una extensión de este método ha sido utilizado para Measure el efecto de los fármacos sobre la liberación del transmisor de los nervios eferentes 25. Además, una variedad de tejidos (vejiga, la uretra, el tracto gastrointestinal, GI) cosechado de animales o seres humanos (de cirugías o tejido de un donante de órganos aprobados para investigación) y de una variedad de modelos animales, incluyendo lesión de la médula espinal (SCI), obstrucción de la salida de la vejiga (BOO), o la cistitis intersticial (IC) pueden ser investigados mediante esta técnica. En este artículo se expone la aplicación de este método, junto con los protocolos experimentales necesarios, para abordar varias cuestiones científicas antes mencionadas.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="658">
	<tbody>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:237px;">Name of Material/ Equipment</td>
			<td style="width:123px;">Company</td>
			<td style="width:119px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:180px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:237px;">Equipment</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:180px;"></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:237px;">Tissue Bath System with Reservoir</td>
			<td>Radnoti, LLC</td>
			<td style="width:119px;">159920</td>
			<td style="width:180px;">isolated tissue baths</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">Warm water recirculator pump</td>
			<td style="width:123px;">Kent Scientific Corporation&#160;</td>
			<td style="width:119px;">TPZ-749</td>
			<td style="width:180px;">to keep tissue baths to 37 C</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:237px;">Computer</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:180px;"></td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">Data Acquisiton System</td>
			<td style="width:123px;">DataQ Instruments</td>
			<td style="width:119px;">DI-710-UH</td>
			<td style="width:180px;">To view, record and analyze data</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">Transbridge Transducer Amplifier</td>
			<td style="width:123px;">World Precision Instruments</td>
			<td style="width:119px;">SYS-TBM4M</td>
			<td style="width:180px;">Transducer amplifier</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">Grass stimulator</td>
			<td style="width:123px;">Grass Technologies</td>
			<td>Model S88</td>
			<td style="width:180px;">Stimulator</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">Anesthesia System</td>
			<td style="width:123px;">Kent Scientific Corporation&#160;</td>
			<td>ACV-1205S</td>
			<td style="width:180px;">To anesthetesize the animal</td>
		</tr>
		<tr height="18">
			<td height="18" style="height:18px;width:237px;"><a name="RANGE!A10">Anesthetizing Box</a></td>
			<td style="width:123px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:119px;">500116</td>
			<td style="width:180px;">To anesthetesize the animal</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">Anesthesia Masks</td>
			<td style="width:123px;">Kent Scientific Corporation&#160;</td>
			<td style="width:119px;">AC-09508</td>
			<td style="width:180px;">To anesthetesize the animal</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:237px;">Materials and surgical instruments</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:180px;"></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:237px;">sylgard</td>
			<td>Dow Corning Corp</td>
			<td>184 SIL ELAST KIT</td>
			<td style="width:180px;">To pin, dissect &#38; cut tissue</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:237px;">Petri Dish</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3160-152</td>
			<td style="width:180px;">To dissect/cut tissue</td>
		</tr>
		<tr height="51">
			<td height="51" style="height:51px;width:237px;">Insect Pins</td>
			<td style="width:123px;">ENTOMORAVIA Austerlitz Insect Pins</td>
			<td style="width:119px;">Size 5</td>
			<td style="width:180px;">To pin tissue</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:237px;">Bench Pad</td>
			<td style="width:123px;">VWR International</td>
			<td style="width:119px;">56617-014</td>
			<td style="width:180px;">Absorbent bench underpads</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">Rat surgical Kit</td>
			<td style="width:123px;">Kent Scientific Corporation&#160;</td>
			<td style="width:119px;">INSRATKIT</td>
			<td style="width:180px;">To remove and dissect tissue</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">2 Dumont #3 Forceps</td>
			<td style="width:123px;">Kent Scientific Corporation&#160;</td>
			<td style="width:119px;">INS500064</td>
			<td style="width:180px;">To remove and dissect tissue</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">Tissue Forceps</td>
			<td style="width:123px;">Kent Scientific Corporation&#160;</td>
			<td style="width:119px;">INS500092</td>
			<td style="width:180px;">To remove and dissect tissue</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">Scalpel</td>
			<td style="width:123px;">Kent Scientific Corporation&#160;</td>
			<td style="width:119px;">INS500236</td>
			<td style="width:180px;">To remove and dissect tissue</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">Scalpel blade</td>
			<td style="width:123px;">Kent Scientific Corporation&#160;</td>
			<td style="width:119px;">INS500239</td>
			<td style="width:180px;">To remove and dissect tissue</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">Professional Clipper&#160;</td>
			<td style="width:123px;">Braintree Scientific, Inc.</td>
			<td style="width:119px;">CLP-223&#160;45</td>
			<td style="width:180px;">To remove fur</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:237px;">Suture Thread</td>
			<td style="width:123px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:119px;">18020-50</td>
			<td style="width:180px;">Tie tissue</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">Tissue Clips</td>
			<td>Radnoti, LLC</td>
			<td style="width:119px;">158802</td>
			<td style="width:180px;">Attach tissue to rod/transducer</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:237px;">1g weight</td>
			<td style="width:123px;">&#160;Mettler Toledo</td>
			<td>11119525</td>
			<td style="width:180px;">For transducer calibration</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:237px;">Chemicals</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td></td>
			<td style="width:180px;"></td>
		</tr>
		<tr height="170">
			<td height="170" style="height:170px;width:237px;">Krebs Solution:&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; Sodium Chloride 
			Potassium Chloride 
			Monobasic Potassium Phosphate 
			Magnesium Sulfate 
			Dextrose 
			Sodium Bicarbonate 
			Calcium Chloride 
			Magnesium Chloride</td>
			<td style="width:123px;">Sigma&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; 
			Fisher 
			Fisher 
			Fisher 
			Fisher 
			Sigma 
			EMD 
			Baker</td>
			<td style="width:119px;">&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; S7653 
			P217-500 
			P285-3 
			M65-500 
			D16-500 
			S5761 
			CX0130-2 
			2444</td>
			<td style="width:180px;">To prepare Krebs solution</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:237px;">Isoflurane</td>
			<td style="width:123px;">Henry Schein</td>
			<td style="width:119px;">029405</td>
			<td style="width:180px;">To anesthetesize the animal</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">&#160;Oxygen tank</td>
			<td style="width:123px;">Matheson Tri Gas</td>
			<td style="width:119px;">ox251</td>
			<td style="width:180px;">To use with anesthesia system</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">Carbogen Tank (95% Oxygen; 5% Carbon Dioxide)&#160;</td>
			<td style="width:123px;">Matheson Tri Gas</td>
			<td style="width:119px;">Moxn00hn36D</td>
			<td style="width:180px;">To aerate Krebs solutions</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

bladder smooth muscle strip contractility as a method to evaluate lower urinary tract pharmacology

Se describe un método in vitro para medir la contractilidad del músculo liso de la vejiga, y su uso para la investigación de las propiedades fisiológicas y farmacológicas de músculo liso, así como los cambios inducidos por la patología. Este método proporciona información crítica para la comprensión de la función de la vejiga, mientras que la superación de las principales dificultades metodológicas encontradas en los experimentos in vivo, tales como manipulaciones quirúrgicas y farmacológicas que afectan la estabilidad y la supervivencia de las preparaciones, el uso de tejido humano, y / o el uso de productos químicos caros. También proporciona una manera de investigar las propiedades de cada componente de la vejiga (es decir, músculo liso, la mucosa, los nervios) en condiciones saludables y patológicos. La vejiga urinaria se retira de un animal anestesiado, se colocó en solución de Krebs y cortar en tiras. Las tiras se colocan en una cámara llena con solución caliente de Krebs. Un extremo está unido a un tensio isométrican transductor para medir la fuerza de contracción, el otro extremo está unido a una varilla fija. El tejido se estimuló mediante la adición de compuestos directamente al baño o electrodos de estimulación de campo eléctrico que activan los nervios, similar a la activación contracciones de la vejiga in vivo. Se demuestra el uso de este método para evaluar la contractilidad del músculo liso espontánea durante el desarrollo y después de una lesión de la médula espinal experimental, la naturaleza de la neurotransmisión (transmisores y receptores implicados), factores implicados en la modulación de la actividad del músculo liso, el papel de los componentes individuales de la vejiga, y las especies y las diferencias de órganos en respuesta a los agentes farmacológicos. Además, podría ser utilizado para la investigación de las vías intracelulares implicadas en la contracción y / o la relajación del músculo liso, relaciones estructura-actividad de la droga y la evaluación de la liberación del transmisor. El método de la contractilidad del músculo liso in vitro se ha utilizado ampliamente for más de 50 años, y ha proporcionado datos que han contribuido significativamente a nuestra comprensión de la función de la vejiga, así como para el desarrollo farmacéutico de los compuestos que se utilizan actualmente para el manejo clínico de la vejiga.

Actividad Myogenic espontánea Actividad miogénica espontánea es una característica importante del músculo liso que sufre cambios con el desarrollo postnatal 6-9 y patología (por ejemplo, SCI, BOO) 3-5. Como se cree que esta actividad para contribuir a los síntomas de la vejiga hiperactiva (OAB) 2, una evaluación de los receptores, vías intracelulares y agentes farmacológicos que modulan ella, es de gran interés para el des...

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Bladder Smooth Muscle Strip Contractility as a Method to Evaluate Lower Urinary Tract Pharmacology

Este manuscrito presenta una simple, pero potente, método in vitro para evaluar la contractilidad del músculo liso en respuesta a agentes farmacológicos o la estimulación nerviosa. Las principales aplicaciones son la detección de drogas y la comprensión fisiología del tejido, la farmacología y la patología.

Vejiga contractilidad del músculo liso de Gaza como un método para evaluar tracto urinario inferior Farmacología

We describe an in vitro method to measure bladder smooth muscle contractility, and its use for investigating physiological and pharmacological properties ...

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Research

JoVE Journal

Medicine

26.1K vistas.  University of Pittsburgh School of Medicine.  Este manuscrito presenta una simple, pero potente, método in vitro para evaluar la contractilidad del músculo liso en respuesta a agentes farmacológicos o la estimulación nerviosa. Las principales aplicaciones son la detección de drogas y la comprensión fisiología del tejido, la farmacología y la patología. 

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Manual Muscle Testing:  A Method of Measuring Extremity Muscle Strength Applied to Critically Ill Patients

Survivors of acute respiratory distress syndrome (ARDS) and other causes of critical illness often have generalized weakness, reduced exercise tolerance, and persistent nerve and muscle impairments after hospital discharge.1-6 Using an explicit protocol with a structured approach to training and quality assurance of research staff, manual muscle testing (MMT) is a highly reliable method for assessing strength, using a standardized clinical examination, for patients following ARDS, and can be completed with mechanically ventilated patients who can tolerate sitting upright in bed and are able to follow two-step commands. 7, 8 
This video demonstrates a protocol for MMT, which has been taught to &ge;43 research staff who have performed &gt;800 assessments on &gt;280 ARDS survivors. Modifications for the bedridden patient are included. Each muscle is tested with specific techniques for positioning, stabilization, resistance, and palpation for each score of the 6-point ordinal Medical Research Council scale.7,9-11 Three upper and three lower extremity muscles are graded in this protocol: shoulder abduction, elbow flexion, wrist extension, hip flexion, knee extension, and ankle dorsiflexion. These muscles were chosen based on the standard approach for evaluating patients for ICU-acquired weakness used in prior publications. 1,2.

Survivors of acute respiratory distress syndrome (ARDS) and critical illness frequently develop long-lasting muscle weakness. Manual muscle testing (MMT) is a standardized clinical examination commonly used to measure strength of peripheral skeletal muscle groups. This video demonstrates MMT using the 6-point Medical Research Council scale.

Pruebas musculares manuales: un método para medir fuerza de las extremidades muscular aplicada a los pacientes críticos

Survivors of acute respiratory distress syndrome (ARDS) and other causes of critical illness often have generalized weakness, reduced exercise tolerance, ...

Investigación

Medicina

Probe-based Confocal Laser Endomicroscopy of the Urinary Tract: The Technique

Probe-based confocal laser endomicroscopy (CLE) is an emerging optical imaging technology that enables real-time in vivo microscopy of mucosal surfaces during standard endoscopy. With applications currently in the respiratory1 and gastrointestinal tracts,2-6 CLE has also been explored in the urinary tract for bladder cancer diagnosis.7-10 Cellular morphology and tissue microarchitecture can be resolved with micron scale resolution in real time, in addition to dynamic imaging of the normal and pathological vasculature.7
The probe-based CLE system (Cellvizio, Mauna Kea Technologies, France) consists of a reusable fiberoptic imaging probe coupled to a 488 nm laser scanning unit. The imaging probe is inserted in the working channels of standard flexible and rigid endoscopes. An endoscope-based CLE system (Optiscan, Australia), in which the confocal endomicroscopy functionality is integrated onto the endoscope, is also used in the gastrointestinal tract. Given the larger scope diameter, however, application in the urinary tract is currently limited to ex vivo use.11 Confocal image acquisition is done through direct contact of the imaging probe with the target tissue and recorded as video sequences. As in the gastrointestinal tract, endomicroscopy of the urinary tract requires an exogenenous contrast agent&mdash;most commonly fluorescein, which can be administered intravenously or intravesically. Intravesical administration is a well-established method to introduce pharmacological agents locally with minimal systemic toxicity that is unique to the urinary tract. Fluorescein rapidly stains the extracellular matrix and has an established safety profile.12 Imaging probes of various diameters enable compatibility with different caliber endoscopes. To date, 1.4 and 2.6 mm probes have been evaluated with flexible and rigid cystoscopy.10 Recent availability of a &lt; 1 mm imaging probe13 opens up the possibility of CLE in the upper urinary tract during ureteroscopy. Fluorescence cystoscopy (i.e. photodynamic diagnosis) and narrow band imaging are additional endoscope-based optical imaging modalities14 that can be combined with CLE to achieve multimodal imaging of the urinary tract. In the future, CLE may be coupled with molecular contrast agents such as fluorescently labeled peptides15 and antibodies for endoscopic imaging of disease processes with molecular specificity.

Probe-based confocal laser endomicroscopy enables real-time microscopy of the human urinary tract during cystoscopy, providing dynamic, intravital imaging of pathological states such as bladder cancer with cellular resolution. Endomicroscopy may augment the diagnostic accuracy of standard white light endoscopy and provide intraoperative image guidance to improve surgical resection.

Basada en sondeos endomicroscopía Láser Confocal del tracto urinario: la técnica

Probe-based  confocal laser endomicroscopy (CLE) is an emerging optical imaging technology  that enables real-time in vivo microscopy of mucosal surfaces ...

A Modified Precipitation Method to Isolate Urinary Exosomes

Identification of biomarkers that allow early detection of kidney diseases in urine and plasma has been an area of active interest for several years. Urinary exosome vesicles, 40-100 nm in size, are released into the urine under normal conditions by cells from all nephron segments and may contain protein, mRNA and microRNA representative of their cell type of origin. Under conditions of renal dysfunction or injury, exosomes may contain altered proportions of these components, which may serve as biomarkers for disease. There are currently several methods available for isolation of urinary exosomes, and we have previously conducted an experimental comparison of each of these approaches, including three based on ultracentrifugation, one using a nanomembrane ultrafiltration concentrator, one using a commercial precipitation reagent and one using a modification of the precipitation technique using ExoQuick reagent that we developed in our laboratory. We found the modified precipitation method produced the highest yield of exosome particles, miRNA, and mRNA, making this approach suitable for the isolation of exosomes for subsequent RNA profiling. We conclude that the modified exosome precipitation method offers a quick, scalable, and effective alternative for the isolation of exosomes from urine. In this report, we describe our modified precipitation technique using ExoQuick reagent for isolating exosomes from human urine.

This manuscript describes a protocol for isolating exosomes from human urine using a modified precipitation technique.

Un método de precipitación Modificado para aislar urinaria exosomas

Identification of biomarkers that allow early detection of kidney diseases in urine and plasma has been an area of active interest for several years. ...

Urinary Bladder Distention Evoked Visceromotor Responses as a Model for Bladder Pain in Mice

Approximately 3-8 million people in the United States suffer from interstitial cystitis/bladder pain syndrome (IC/BPS), a debilitating condition characterized by increased urgency and frequency of urination, as well as nocturia and general pelvic pain, especially upon bladder filling or voiding. Despite years of research, the cause of IC/BPS remains elusive and treatment strategies are unable to provide complete relief to patients. In order to study nervous system contributions to the condition, many animal models have been developed to mimic the pain and symptoms associated with IC/BPS. One such murine model is urinary bladder distension (UBD). In this model, compressed air of a specific pressure is delivered to the bladder of a lightly anesthetized animal over a set period of time. Throughout the procedure, wires in the superior oblique abdominal muscles record electrical activity from the muscle. This activity is known as the visceromotor response (VMR) and is a reliable and reproducible measure of nociception. Here, we describe the steps necessary to perform this technique in mice including surgical manipulations, physiological recording, and data analysis. With the use of this model, the coordination between primary sensory neurons, spinal cord secondary afferents, and higher central nervous system areas involved in bladder pain can be unraveled. This basic science knowledge can then be clinically translated to treat patients suffering from IC/BPS.

Approximately 3-8 million people in the United States suffer from interstitial cystitis/bladder pain syndrome (IC/BPS), a debilitating condition characterized in part by pelvic pain. In order to study nervous system contributions to the condition, a physiological model of urinary bladder pain is used in mice and rats.

Las respuestas de la Vejiga Urinaria Distensión Evocados visceromotor como modelo para la vejiga Dolor en ratones

Approximately 3-8 million people in the United States suffer from interstitial cystitis/bladder pain syndrome (IC/BPS), a debilitating condition ...

Calcification of Vascular Smooth Muscle Cells and Imaging of Aortic Calcification and Inflammation

Cardiovascular disease is the leading cause of morbidity and mortality in the world. Atherosclerotic plaques, consisting of lipid-laden macrophages and calcification, develop in the coronary arteries, aortic valve, aorta, and peripheral conduit arteries and are the hallmark of cardiovascular disease. In humans, imaging with computed tomography allows for the quantification of vascular calcification; the presence of vascular calcification is a strong predictor of future cardiovascular events. Development of novel therapies in cardiovascular disease relies critically on improving our understanding of the underlying molecular mechanisms of atherosclerosis. Advancing our knowledge of atherosclerotic mechanisms relies on murine and cell-based models. Here, a method for imaging aortic calcification and macrophage infiltration using two spectrally distinct near-infrared fluorescent imaging probes is detailed. Near-infrared fluorescent imaging allows for the ex vivo quantification of calcification and macrophage accumulation in the entire aorta and can be used to further our understanding of the mechanistic relationship between inflammation and calcification in atherosclerosis. Additionally, a method for isolating and culturing animal aortic vascular smooth muscle cells and a protocol for inducing calcification in cultured smooth muscle cells from either murine aortas or from human coronary arteries is described. This in vitro method of modeling vascular calcification can be used to identify and characterize the signaling pathways likely important for the development of vascular disease, in the hopes of discovering novel targets for therapy.

Vascular calcification is an important predictor of and contributor to human cardiovascular disease. This protocol describes methods for inducing calcification of cultured primary vascular smooth muscle cells and for quantifying calcification and macrophage burden in animal aortas using near-infrared fluorescence imaging.

Calcificación de células del músculo liso y de imagen de la calcificación aórtica y la inflamación

Cardiovascular disease is the leading cause of morbidity and mortality in the world.  Atherosclerotic plaques, consisting of lipid-laden macrophages and ...

Contractility Measurements of Human Uterine Smooth Muscle to Aid Drug Development

Discovery and characterization of novel pharmaceutical compounds or biochemical probes rely on robust and physiologically relevant assay systems. We describe methods to measure ex vivo myometrium contractility. This assay can be used to investigate factors and molecules involved in the modulation of myometrial contraction and to determine their excitatory or inhibitory actions, and hence their therapeutic potential in vivo. Biopsies are obtained from women undergoing cesarean section delivery with informed consent. Fine strips of myometrium are dissected, clipped and attached to a force transducer within 1 mL organ baths superfused with physiological saline solution at 37 &#176;C. Strips develop spontaneous contractions within 2&#8211;3 h under set tension and remain stable for many hours (&#62;6 h). Strips can also be stimulated to contract such as by the endogenous hormones, oxytocin and vasopressin, which cause concentration-dependent modulation of contraction frequency, force and duration, to more closely resemble contractions in labor. Hence, the effect of known and novel drug leads can be tested on spontaneous and agonist-induced contractions.
This protocol specifically details how this assay can be used to determine the potency of known and novel agents by measuring their effects on various parameters of human myometrial contraction. We use the oxytocin- and V1a receptor antagonists, atosiban and SR49059 as examples of known compounds which inhibit oxytocin- and vasopressin-induced contractions, and demonstrate how this method can be used to complement and validate pharmacological data obtained from cell-based assays to aid drug development. The effects of novel agonists in comparison to oxytocin and vasopressin can also be characterized. Whilst we use the example of the oxytocin/ vasopressin system, this method can also be used to study other receptors and ion channels that play a role in uterine contraction and relaxation to advance the understanding of human uterine physiology and pathophysiology.

This article describes experimental protocols to study ex vivo contractions of human myometrium and their application in drug discovery. This technique is used to improve the understanding of myometrial physiology and pathophysiology as well as to validate pharmacological data from novel research probes or drug leads.

Mediciones de la contractilidad del musculo liso uterino humano desarrollo de fármacos de ayuda

Discovery and characterization of novel pharmaceutical compounds or biochemical probes rely on robust and physiologically relevant assay systems. We ...

Microelectrode Impalement Method to Record Membrane Potential from a Cannulated Middle Cerebral Artery

Membrane potential (Vm) of vascular smooth muscle cells determines vessel tone and thus blood flow to an organ. Changes in the expression and function of ion channels and electrogenic pumps that regulate Vm in disease conditions could potentially alter Vm, vascular tone, and blood flow. Thus, a basic understanding of electrophysiology and the methods necessary to accurately record Vm in healthy and diseased states are essential. This method will allow modulating Vm using different pharmacological agents to restore Vm. Although there are several methods, each with its advantages and disadvantages, this article provides protocols to record Vm from cannulated resistance vessels such as the middle cerebral artery using the microelectrode impalement method. Middle cerebral arteries are allowed to gain myogenic tone in a myograph chamber, and the vessel wall is impaled using high resistance microelectrodes. The Vm signal is collected through an electrometer, digitized, and analyzed. This method provides an accurate reading of the Vm of a vessel wall without damaging the cells and without changing the membrane resistance.

The primary goal of this article is to provide details of how to record membrane potential (Vm) from the middle cerebral artery using the microelectrode impalement method. The cannulated middle cerebral artery is equilibrated to gain myogenic tone, and the vessel wall is impaled using high resistance microelectrodes.

Método de empalamiento de microelectrodos para registrar el potencial de la membrana a partir de una arteria cerebral media cannulada

Membrane potential (Vm) of vascular smooth muscle cells determines vessel tone and thus blood flow to an organ. Changes in the expression and function of ...

Quantitative Analysis of Cellular Composition in Advanced Atherosclerotic Lesions of Smooth Muscle Cell Lineage-Tracing Mice

Atherosclerosis remains the leading cause of death worldwide and, despite countless preclinical studies describing promising therapeutic targets, novel interventions have remained elusive. This is likely due, in part, to a reliance on preclinical prevention models investigating the effects of genetic manipulations or pharmacological treatments on atherosclerosis development rather than the established disease. Also, results of these studies are often confounding because of the use of superficial lesion analyses and a lack of characterization of lesion cell populations. To help overcome these translational hurdles, we propose an increased reliance on intervention models that employ investigation of changes in cellular composition at a single cell level by immunofluorescent staining and confocal microscopy. To this end, we describe a protocol for testing a putative therapeutic agent in a murine intervention model including a systematic approach for animal dissection, embedding, sectioning, staining, and quantification of brachiocephalic artery lesions. In addition, due to the phenotypic diversity of cells within late-stage atherosclerotic lesions, we describe the importance of using cell-specific, inducible lineage tracing mouse systems and how this can be leveraged for unbiased characterization of atherosclerotic lesion cell populations. Together, these strategies may assist vascular biologists to more accurately model therapeutic interventions and analyze atherosclerotic disease and will hopefully translate into a higher rate of success in clinical trials.

We propose a standardized protocol to characterize the cellular composition of late-stage murine atherosclerotic lesions including systematic methods of animal dissection, tissue embedding, sectioning, staining, and analysis of brachiocephalic arteries from atheroprone smooth muscle cell lineage tracing mice.

Análisis cuantitativo de la composición celular en las lesiones ateroscleróticas avanzadas de músculo liso células linaje trazado ratones

Atherosclerosis remains the leading cause of death worldwide and, despite countless preclinical studies describing promising therapeutic targets, novel ...

Ultrasonography of the Adult Male Urinary Tract for Urinary Functional Testing

The incidence of clinical benign prostatic hyperplasia (BPH) and lower urinary tract symptoms (LUTS) is increasing due to the aging population, resulting in a significant economic and quality of life burden. Transgenic and other mouse models have been developed to recreate various aspects of this multifactorial disease; however, methods to accurately quantitate urinary dysfunction and the effectiveness of new therapeutic options are lacking. Here, we describe a method that can be used to measure bladder volume and detrusor wall thickness, urinary velocity, void volume and void duration, and urethral diameter. This would allow for the evaluation of disease progression and treatment efficacy over time. Mice were anesthetized with isoflurane, and the bladder was visualized by ultrasound. For non-contrast imaging, a 3D image was taken of the bladder to calculate volume and evaluate shape; the bladder wall thickness was measured from this image. For contrast-enhanced imaging, a catheter was placed through the dome of the bladder using a 27-gauge needle connected to a syringe by PE50 tubing. A bolus of 0.5 mL of contrast was infused into the bladder until a urination event occurred. Urethral diameter was determined at the point of the Doppler velocity sample window during the first voiding event. Velocity was measured for each subsequent event yielding a flow rate. In conclusion, high frequency ultrasound proved to be an effective method for assessing bladder and urethral measurements during urinary function in mice. This technique may be useful in the assessment of novel therapies for BPH/LUTS in an experimental setting.

We describe the use of high frequency ultrasound with contrast imaging as a method to measure bladder volume, bladder wall thickness, urine velocity, void volume, void duration, and urethral diameter. This strategy can be used to assess voiding dysfunction and treatment efficacy in various mouse models of lower urinary tract dysfunction (LUTD).

Ultrasonografía del tracto urinario masculino adulto para pruebas funcionales urinarias

The incidence of clinical benign prostatic hyperplasia (BPH) and lower urinary tract symptoms (LUTS) is increasing due to the aging population, resulting ...

Palatable Western-style Cafeteria Diet as a Reliable Method for Modeling Diet-induced Obesity in Rodents

Obesity is rapidly increasing in incidence in developed and developing countries and is known to induce or exacerbate many diseases.&#160;The health burden of obesity and its comorbid conditions highlight the need for better understanding of its pathogenesis, yet ethical constraints limit studies in humans. To this end externally valid models of obesity in laboratory animals are essential for the understanding of being overweight and obesity.&#160;While many species have been used to model the range of changes that accompany obesity in humans, rodents are most commonly used. Our laboratory has developed a western-style cafeteria diet that consistently leads to considerable weight gain and markers of metabolic disease in rodents. The diet exposes rodents to a variety of highly palatable foods to induce hyperphagia, modeling the modern western food environment. This diet rapidly induces weight gain and body fat accumulation in rats allowing for the study of effects of overeating and obesity. While the cafeteria diet may not provide the same control over macronutrient and micronutrient profile as purified high-fat or high-fat, high-sugar diets, the cafeteria diet typically induces a more severe metabolic phenotype than that observed with purified diets and is more in line with metabolic disturbances observed in the overweight and obese human population.

This protocol describes the use of a highly palatable, western-style cafeteria diet to model overeating and obesity in rodents. Here, we provide a detailed outline of food selection, preparation and measurement, and explain methodological factors that assist in generating a robust and reproducible phenotype.

Dieta de cafetería de estilo occidental palatable como un método confiable para modelar la obesidad inducida por la dieta en roedores

Obesity is rapidly increasing in incidence in developed and developing countries and is known to induce or exacerbate many diseases.&#160;The health ...