1. precipitación de CaCO₃

1. Preparar 5 mL de 1 M de CaCl₂.
2. Prepare 5 mL M 1 Na₂CO₃.
3. En un tubo de centrífuga pequeña (1,5 mL), añadir 750 μl de CaCl₂ y 750 μl de Na₂CO₃.
4. Esperar 2 minutos para la reacción ocurrir. La solución debe resultar turbia.
5. Centrifugar la mezcla a 10.000 x g durante 5 minutos.
6. Decantar el sobrenadante.
7. Añadir 1 mL de agua fría a la pelotilla.
8. Resuspender el precipitado al mezclar en un vórtex durante 10 s.
9. Centrifugar la mezcla a 10.000 x g durante 5 minutos.
10. Decantar el sobrenadante.

2. precipitación de proteínas de la leche

1. Vierta la leche en un vaso de precipitados y agregar una barra de agitación.
2. Leche caliente suavemente hasta 40 ° C en una placa de agitación. No calentar sobre 40 ° C.
3. Preparar un 15% (v/v) de ácido acético por mezcla 7,5 mL de ácido acético y diluir en agua suficiente para llegar a 50 mL.
4. Sumerja el electrodo de un pHmetro en leche caliente y vigilar el pH.
5. Agregar el ácido acético mediante goteo a la leche hasta que se alcance un pH de 4.6.
6. Filtración de la leche
   1. Flauta de un pedazo de papel de filtro y colocarlo en un embudo.
   2. Coloque el embudo en un frasco y verter la solución de leche acidificada en el embudo.
   3. Como la solución se vierte, el papel de filtro puede conseguir tapado. Con una varilla, se agita la solución y el papel de filtro de vez en cuando para desatascar. Si no mejora el paso de la solución, cambiar el papel de filtro.
   4. Coloque un nuevo filtro de papel sobre la mesa y transferencia tanto de la húmeda sólida para el nuevo papel de filtro. Esto debe absorber más agua del sólido.
   5. Si el nuevo papel de filtro se moja demasiado, seguir a cambiar hasta que haya una cantidad mínima de humedad en el papel de filtro. Presione ligeramente para absorber más agua si es necesario.
   6. Tomar el sólido seco y vuelva a suspender en cerca de 70% etanol. Filtrar el sólido otra vez siguiendo los pasos 2.6.1 a 2.6.5.
7. Centrifugación de la leche (como alternativa a la filtración)
   1. Transferir porciones de 50 mL de la mezcla a tubos de centrífuga de 50 mL.
   2. Centrifugue a 4.500 × g por 10 min, luego decantar el sobrenadante.
   3. Añadir 50 mL de etanol de 70% para el pellet.
   4. Con una varilla, Resuspender el precipitado en el etanol.
   5. Centrifugar esta suspensión siguiente paso 2.7.2.
8. Resuspender el precipitado en tampón para su posterior análisis como SDS-PAGE, de lo contrario almacenarla a 4 ° C.

3. recristalización de KCl

1. Pesar 50 g de KCl en un matraz Erlenmeyer y añadir 100 mL de agua
2. Calentar la mezcla hasta que el agua hierve. Asegúrese de que se disuelva todo el polvo de KCl. Algunas impurezas no se pueden disolver en agua.
3. Otro matraz de Erlenmeyer (vacío) junto con la mezcla de calor y mantener muy caliente.
4. Coloque un embudo con papel filtro en el matraz caliente, vacíelo.
5. Verter la solución a través del papel filtro para eliminar impurezas no disueltas. El recipiente se mantiene caliente para asegurarse de que no hay cambios de temperatura ocurren durante la filtración, de lo contrario que se formará un precipitado crudo. Si esto ocurre, vuelva a calentar la mezcla hasta que se disuelva todo el precipitado.
6. Retirar el matraz con la solución del fuego.
7. Mantener en un lugar fresco en la habitación y deje que se enfríe lentamente durante 30 minutos, o hasta que ya no esté caliente al tacto.
8. Una vez enfriado a temperatura ambiente, colocar el matraz en un baño de hielo para reducir aún más la temperatura. Alternativomente, uno puede dejar el frasco dentro de la nevera o una sala de control de temperatura a 4 ° C.
9. Cristales pueden ser cosechados por filtración como en los pasos 3.4 – 3.5 (puede utilizarse un matraz y embudo a temperatura ambiente).