Este método ayuda a establecer la relación directa de las señales electrocorticales registradas tanto desde ECoG como desde las profundidades de los cables para responder preguntas clave sobre las contribuciones neuronales de los potenciales de evocación láser. La principal ventaja de esta técnica es que la implantación de electrodos puede ser protegida por cáscara poliláctica, por lo que la grabación se puede aplicar a nuestras ratas en movimiento libres. Este método se puede aplicar en el registro de las respuestas cerebrales evocadas por un estímulo de diferentes sensaciones o características breves de enfermedades psiquiátricas que promueven la investigación de sus respectivos neuromagnetismos.
Comience este procedimiento con la anestesia de la rata como se detalla en el protocolo de texto. Luego, usa un aparato estereotaxico para fijar la cabeza de la rata con su nariz colocada en la máscara anestésica. La tolerancia quirúrgica se logra cuando la rata no responde al pellizco de los dedos del dedo del dedo del final.
Aplique pomada oftálmica en los ojos para evitar el secado de la córnea. Afeitar la parte superior del cuero cabelludo de la rata usando una afeitadora estándar. Luego, esterilizar el cuero cabelludo usando la solución desinfectante de yodoforo médico y 75%alcohol para eliminar el yodo.
Inyectar 2%lidocaína en el cuero cabelludo para la analgesia local. Entonces, administrar atropina para inhibir la hipersecreación respiratoria. Haga una incisión de línea media de aproximadamente dos a tres centímetros en el cuero cabelludo usando un bisturí.
Cortar y eliminar parte del cuero cabelludo a lo largo de la línea media y exponer el cráneo. Marque las ubicaciones de los electrodos ECoG en función de las coordenadas estereotaxicas predefinidas. Además, marque las ubicaciones de los electrodos de referencia y de tierra en la línea media.
Taladre agujeros para los tornillos ECoG usando un taladro craneal eléctrico en el cráneo en las miras marcadas sin destruir la dura. Conduzca un tornillo inoxidable, que se conecta al alambre de cobre recubierto de aislamiento, en el agujero para una profundidad aproximada de un milímetro. Evite penetrar la duración subyacente.
Coloque una base protectora sobre el cráneo. Fijar la base con sus tornillos adyacentes en el cráneo usando acrílico dental. Marque las ubicaciones de los electrodos de alambre de profundidad en función de las coordenadas estereotaxicas predefinidas.
Ahora, taladre pequeños agujeros en el cráneo alrededor de las miras de la marca para la implantación del alambre y retire cuidadosamente la solapa ósea para exponer la dura. Lave la craneotomía con frecuencia con solución salina normal. Usando una aguja, levante y corte la dura sin dañar el pia mater, los vasos y la superficie del neocórtex.
Baje los electrodos de alambre de profundidad a la superficie del neocórtex. Luego, penetra lentamente el cerebro hasta la profundidad del objetivo. Selle la craneotomía con una mezcla de cera y aceite de parafina para asegurarse de que los electrodos de alambre de profundidad se pueden mover para las manipulaciones experimentales posteriores.
Fije el aparato del electrodo usando acrílico dental en el cráneo. Suelde cada cable de cobre que se conecta al tornillo ECoG al canal correspondiente en el módulo conector. Montar la pared protectora de la cáscara a la base y soldar la referencia y los electrodos de tierra a los canales correspondientes.
Fije la tapa a la carcasa protectora con cintas para evitar la contaminación. Después de inyectar la rata con penicilina, una sola casa de la rata en una jaula controlada de temperatura y humedad después de la cirugía como se detalla en el protocolo de texto. Coloque la rata en la cámara de comportamiento durante al menos una hora antes del experimento para asegurarse de que la rata se aclimata al entorno de grabación.
Conecte suavemente la etapa del cabezal de grabación con el módulo de electrodos para evitar asustar a la rata y dañar el módulo del electrodo. Configure el generador láser. Conecte la fibra óptica y ajuste el tamaño del punto del láser de acuerdo con el manual de los operadores del equipo.
Ahora, conecte la salida digital del generador de gatillo al puerto de entrada digital de la placa de grabación. Ajuste la cámara de video debajo de la esquina de la cámara experimental para registrar continuamente los comportamientos nociceptivos de la rata cuando su pata recibe estimulación láser nociceptiva. Proporcione ruido blanco continuo a través de un altavoz alto en la parte superior de la cámara.
Recopile los datos electrofisiológicos tanto del ECoG como de los electrodos de cable de profundidad utilizando el sistema de grabación de acuerdo con el manual de operadores del equipo. Ahora, entregue los pulsos láser al plantar de la proa de la rata a través de los huecos en la parte inferior de la cámara colocando primero el generador láser. A continuación, pulse el interruptor para proporcionar estimulación láser.
Aquí se muestran los datos electrofisiológicos brutos de los cortices motores primarios bilaterales, los cortices somatosensoriales primarios bilaterales y el ECoG. Un potencial claro evocado por láser, o respuesta LEP, es detectable después de la aparición del estímulo láser. Aquí se muestra el nivel de grupo promediado lep forma de onda de seis electrodos de cinco ratas.
Las respuestas LEP consisten en una desviación negativa dominante llamada onda N1. Tenga en cuenta que la onda N1 de los cortices somatosensoriales primarios bilaterales muestra una latencia más corta y una amplitud más alta que la de los cortices motores primarios bilaterales. Esta figura muestra la coherencia transformada de ondas entre los LEP muestreados a partir de los cables ECoG y de profundidad en S1 y M1 bilaterales, con el láser entregado en el plantar de la horquilla derecha de la rata.
Tenga en cuenta que el S1 izquierdo y el M1 mostraron una coherencia más alta que el S1 derecho y el M1 en la banda de frecuencia gamma. Después de su desarrollo, esta técnica allanará el camino para que los investigadores recuerden simultáneamente tanto los potenciales de relleno local ecoG como los intercorticales en ratas móviles libres para exponer las contribuciones neuronales de los potenciales evocados por láser.
