Этот метод помогает установить прямую связь электрокортикальных сигналов, записанных как из ECoG, так и из глубин проводов, чтобы ответить на ключевые вопросы о нейрональных вкладах потенциалов лазерного вызывая. Основным преимуществом этой техники является то, что имплантация электродов может быть защищена полилактической оболочкой, таким образом, запись может быть применена к нашим свободно движущихся крыс. Этот метод может быть применен в записи реакции мозга, вызванные стимулами различных ощущений или краткие особенности психических заболеваний, которые способствуют расследованию их соответствующих нейромагнитов.
Начните эту процедуру с анестезии крысы, как описано в текстовом протоколе. Затем используйте стереотактический аппарат, чтобы зафиксировать голову крысы носом, помещенным в анестезиатичную маску. Хирургическая толерантность достигается, когда тогда крыса не реагирует на щипать ногой.
Нанесите офтальмологическую мазь на глаза, чтобы избежать высыхания роговицы. Бритье верхней части кожи головы крысы с помощью стандартной бритвы. Затем стерилизовать кожу головы с помощью медицинского раствора дезинфекции йода и 75% алкоголя для удаления йода.
Введи 2%лидокаин в кожу головы для местной анальгезии. Затем вводят атропин для ингибирования гиперсекреации дыхательных путей. Сделайте разрез средней линии примерно два-три сантиметра на коже головы с помощью скальпеля.
Вырезать и удалить часть кожи головы вдоль средней линии и подвергать черепа. Отметните расположение электродов ECoG на основе предопределенных стереотаксисных координат. Кроме того, отметь расположение эталонных и наземных электродов на средней линии.
Сверлить отверстия для винтов ECoG с помощью электрической черепной дрели на черепе на отмеченных прицелах, не разрушая дуру. Привод нержавеющей винт, который соединяется с изоляцией покрытием медной проволоки, в отверстие для приблизительной глубины одного миллиметра. Избегайте проникновения в лежащую в основе дуру.
Поместите защитную основу оболочки на череп. Исправить базу с его прилегающих винтов на черепе с помощью зубного акрила. Отметь расположение электродов глубинного провода на основе предопределенных стереотаксисных координат.
Теперь, просверлить небольшие отверстия на черепе вокруг знака достопримечательностей для проволоки имплантации и тщательно удалить костной лоскут подвергать dura. Вымойте краниотомию часто с нормальным солевым раствором. Используя иглу, поднимите и вырежьте дуру, не повреждая пиа-матер, сосуды и поверхность неокортекса.
Опустите электроды проволоки глубины на поверхность неокортекса. Затем медленно проникают в мозг на целевую глубину. Печать краниотомии со смесью воска и парафинового масла, чтобы гарантировать, что электроды глубины провода могут быть перемещены для последующих экспериментальных манипуляций.
Зафиксите электродный аппарат с помощью зубного акрила на черепе. Сварите каждый медный провод, который подключается к винту ECoG к соответствующему каналу на модуле разъема. Соберите защитную стенку оболочки к основанию и сварить эталонные и наземные электроды к соответствующим каналам.
Зафиксните крышку на защитной оболочке с помощью лент, чтобы избежать загрязнения. После введения крысы с пенициллином, один дом крысы в температуре и влажности контролируемой клетке после операции, как подробно описано в текстовом протоколе. Поместите крысу в камеру поведения, по крайней мере за час до эксперимента, чтобы убедиться, что крыса акклиматизируется к среде записи.
Аккуратно соедините головную сцену записи с электродным модулем, чтобы не пугать крысу и не повреждать электродный модуль. Настройка лазерного генератора. Подключите оптическое волокно и отрегулируйте размер пятна лазера в соответствии с руководством операторов оборудования.
Теперь подключите цифровой выход от триггерного генератора к цифровому входу порта доски звукозаписи. Установите видеокамеру под углом экспериментальной камеры, чтобы непрерывно записывать ноцицептивное поведение крысы, когда ее лапа получает ноцицептивную лазерную стимуляцию. Доставка текущих белый шум через громкоговоритель в верхней части камеры.
Соберите электрофизиологические данные как с ECoG, так и с электродов глубинного провода с помощью системы записи в соответствии с руководством операторов оборудования. Теперь доставите лазерные импульсы подошве крысы через зазоры в нижней части камеры, сначала распоистив лазерный генератор. Затем нажмите переключатель, чтобы обеспечить лазерную стимуляцию.
Здесь показаны необработанные электрофизиологические данные двусторонних первичных моторных корти, двусторонних первичных соматосенкорных кортисков и ECoG. Четкий лазерный потенциал, или ответ LEP, обнаруживается после начала лазерного стимула. Здесь показан уровень группы усредненых форм волны LEP от 6 электродов 5 крыс.
Ответы LEP состоят из доминирующего отрицательного отклонения под названием N1 Wave. Обратите внимание, что N1 волна двусторонних первичных кортиконов соматосенкории показывает более короткую задержку и более высокую амплитуду, чем у двусторонних первичных моторных корти. Эта цифра показывает волновую трансформацию согласованности между LEPs, взятыми из ECoG, и глубинными проводами в двусторонних S1 и M1, с лазером, доставленным на подошве правого лапа крысы.
Обратите внимание, что левые S1 и M1 показали более высокую согласованность, чем правые S1 и M1 на гамма-частотной полосе. После его развития этот метод проложит путь для исследователей, чтобы одновременно вспомнить как ECoG и межкортик местных заполнить потенциалы в свободно движущихся крыс подвергать нейронных вкладов лазерного вызываемого потенциалов.
