La obtención de fracciones vasculares estromales, o SVF, a partir de lipoaspiratos requiere digestión con colagenasa, lo que aumenta el riesgo de contaminación biológica. Se debe desarrollar una mejor manera de obtener SVF sin colagenasa. Estas técnicas nos permiten obtener el SVF en su matriz extracelular nativa a través de un sencillo proceso mecánico.
Demostrando el procedimiento estará Xihang Chen, un estudiante de posgrado de nuestro laboratorio. Después de obtener las muestras de grasa, transfiera los lipoaspiratos a un tubo de 50 mililitros, y permita que la grasa cosechada se equilibre durante 10 minutos. A continuación, utilice una pipeta de punta ancha para tirar de la grasa de la capa superior del tubo en un nuevo tubo de 50 mililitros y girar hacia abajo la grasa por centrifugación.
La capa superior en el tubo es la fracción de grasa Coleman. Transfiera la parte superior 2/3 de la grasa Coleman en un nuevo tubo de 15 mililitros. Esta porción se considera la grasa de baja densidad.
Transfiera el tercio inferior de la grasa de Coleman en un segundo tubo de 15 mililitros. Esta porción se considera la grasa de alta densidad. Para producir una matriz extracelular de gel de fracción vascular estromal a partir de la grasa de baja densidad, utilice dos jeringas de 20 mililitros conectadas por un conector de bloqueo luer hembra a hembra para intershiftar 10 mililitros de la grasa de baja densidad.
Este es el paso clave para destruir los adipocitos. La velocidad y el tiempo que se realiza el cambio de intersyringe contribuye a la calidad del producto final. Después de la última sesión de intershift, recoger la grasa por centrifugación y transferir la capa de aceite superior a un tubo de 15 mililitros.
A continuación, transfiera la capa de gel de fracción vascular estromal de matriz extracelular media pegajosa a un nuevo tubo cónico de 15 mililitros. Para producir una matriz extracelular de gel de fracción vascularstromal estromal a partir de la grasa de alta densidad, agregue dos mililitros de la fracción de aceite de baja densidad a cinco mililitros de la muestra de grasa de alta densidad. Intercienda la grasa mixta como se ha demostrado hasta que se observe un floculado dentro de la emulsión.
Recoger el floculado por centrifugación y desechar la capa de aceite superior. A continuación, recoja la capa media pegajosa y mezcle esta fracción con la muestra de gel de fracción vascular estromal de matriz extracelular de baja densidad. Después de procesar la grasa de Coleman a la matriz extracelular de gel de fracción vascular estromal, el volumen de aceite desechado ocupa el 80% del volumen final, y sólo el 20% del tejido adiposo conservado debajo de la capa de aceite se considera como gel de fracción vascular estromal de matriz extracelular.
El gel de fracción vascular estromal de matriz extracelular tiene una textura suave similar al líquido que le permite pasar a través de una aguja fina de calibre 27. Sin embargo, la grasa de Coleman se compone de una estructura adiposa integral con fibras grandes que sólo puede pasar a través de una cánula de calibre 18. En el tercer día después del trasplante, aparecen grandes cantidades de pequeños pre-adipocitos con múltiples gotas lipídicas intracelulares, tejido conectivo bien vascularizado extenso y células inflamatorias infiltradas.
A partir del día 15, el número de células inflamatorias comienza a reducirse gradualmente, y los adipocitos comienzan a madurar. Para el día 90, la mayor parte del tejido conectivo vascularizado en los injertos ha sido reemplazado por adipocitos maduros. Los injertos de gel de fracción vascular estromal de matriz extracelular también contienen algunos adipocitos positivos de perilipina tres días después del trasplante, con pre-adipocitos de tamaño pequeño, con múltiples gotas de lípidos intracelulares que comienzan a aparecer en el día 15.
Cada campo del día 90 matriz extracelular fracción vascular estromal secciones de injerto de gel exhiben numerosos adipocitos positivos de perilipina y vasos sanguíneos recién formados. La citometría de flujo se puede realizar para determinar la población celular en el producto. Y la microscopía electrónica de barrido se puede realizar para visualizar la microestructura del producto.
Esta técnica proporciona un método simple para que los cirujanos e investigadores obtengan un producto con alta concentración de células SVF con fibras de matriz extracelular nativas a partir del tejido adiposo.
