Esta técnica de aislamiento se puede utilizar para explorar si las células madre adiposas pueden ayudar a los pacientes a regenerar la función eréctil después de la prostatectomía radical. Este método no está limitado para una enfermedad específica. Podría usarse en todas las áreas de investigación con células madre adiposas.
Las células madre aisladas se utilizan para tratar la disfunción eréctil, pero la técnica de aislamiento es un procedimiento general y las células madre pueden ser útiles en otras áreas dentro de la investigación con células madre. Comience desinfectando la piel del abdomen y el escroto con clorhexidina al 0,5%. Utilice un marcador quirúrgico para dibujar las áreas del abdomen donde se va a realizar la liposucción, generalmente el área entre la síntesis y el ombligo.
Haga dos incisiones de seis milímetros de ancho en la piel del abdomen con un bisturí número 11. Coloque las incisiones simétrica y lateralmente desde el área dibujada hacia arriba de la liposucción. Coloque un poco de lubricante en las incisiones para asegurarse de que la cánula de infiltración se deslice dentro y fuera de las incisiones fácilmente durante la liposucción.
Luego introduzca una cánula de infiltración de calibre 14 a través de las incisiones en la piel. Inyecte la solución de Klein modificada por vía subcutánea en las áreas marcadas paralelas a la superficie de la piel hasta que el tejido objetivo se hinche y firme o tumescente. Inyecte un volumen de solución de Klein modificada en una proporción de uno a uno en el tejido adiposo.
Espere 10 minutos para maximizar los efectos de la adrenalina y reducir la cantidad de sangre en el tejido adiposo recolectado. Realice una liposucción de infusión de chorro estándar para cosechar de 200 a 300 milímetros de tejido adiposo. Use cánulas romas que sean huecas con un tubo de infusión y una boquilla integrados.
Conecte la cánula a un dispositivo de succión para la liposucción. Introducir una jeringa de tres milímetros con una punta roma a través de las incisiones en el abdomen y recoger el tejido adiposo en el Lipo Collector para preservar el lipoaspirado en un ambiente estéril. El lipoaspirado comenzará a separarse de la fase acuática.
Use jeringas estériles de 50 mililitros para succionar el lipoaspirado del LipoCollector, minimizando el volumen de agua aspirada en las jeringas. Atornille un tapón en la punta de las jeringas para mantener el tejido adiposo estéril. Coloque las jeringas con la punta hacia abajo en una bolsa de plástico estéril para comenzar la separación del lipoaspirado de la fase de agua.
Luego coloque la bolsa en un recipiente estéril. Cubra el recipiente con una cortina estéril para asegurar el ambiente estéril durante el transporte. Cierre las incisiones de la piel con el material de sutura preferido por el cirujano.
Coloque una prenda de compresión alrededor del abdomen para reducir el edema postoperatorio. Para hacer un bloqueo del pene, inyecte la bupivacaína en dos sitios, uno colocado ventralmente y el otro dorsalmente. Introduzca toda la aguja en el tejido subcutáneo, apuntándola lateralmente hacia la derecha, e inyecte la anestesia a medida que la aguja se retrae.
Repita la inyección, apuntando la aguja hacia la izquierda. Coloque todos los consumibles y enzimas asépticamente sobre la mesa cubierta por una toalla quirúrgica desechable estéril. Limpie el dispositivo con etanol y cargue el conjunto de consumibles.
Luego conecte una bolsa de timbres lactados al sistema. Realizar la serie de pruebas semiautomáticas antes de añadir el lipoaspirado. Mientras se prepara el dispositivo, deje que el lipoaspirado se coloque en un tubo de 50 mililitros para permitir que la grasa se separe de la fase líquida.
Tenga en cuenta la cantidad total de tejido graso y úselo para asegurarse de que la cantidad total de grasa cargada estará en el rango de la capacidad del dispositivo. Cargue el tejido cuando el dispositivo se lo solicite. La máquina drenará el exceso de líquido.
Pesa la cantidad de tejido graso y lávala con anillos lactados. Cuando el pañuelo haya sido lavado y drenado, conecte una nueva bolsa de infusión con anillos lactados de 37 a 39 grados Celsius. Reconstituir la enzima disponible comercialmente que contiene la mezcla de colagenasa y proteasa en anillos lactados de cinco mililitros.
Asegúrese de que el dispositivo muestre la cantidad de enzima para inyectar en el recipiente con el tejido graso. Una vez inyectada la digestión enzimática durará alrededor de 20 minutos. Después de la digestión de los tejidos, verifique que el contenido esté separado en un lípido superior que contenga la fase amarilla y una capa rosa inferior que contenga las células regenerativas derivadas de tejido adiposo, o ADRC.
Deje que la capa rosa drene en la cámara de procesamiento celular del conjunto de consumibles, dejando atrás la capa lipídica. Permita que los ADRC se concentren en la cámara de procesamiento celular durante múltiples rondas de centrifugación. Luego agregue 10 mililitros de intrabase reconstituidos en los timbres lactados.
La reacción enzimática dura 10 minutos y los ADRC se lavan después. Cuando se haya completado el aislamiento de los ADRC, vuelva a suspender las células en cinco mililitros de lactato de Ringer y aspire la solución en una jeringa de cinco mililitros. Monte una llave de paso Luer hembra de tres vías en la jeringa y aspire cuatro mililitros de ADRC en otra jeringa estéril de cinco mililitros.
Transfiera el último mililitro de ADRC a una jeringa de un mililitro. Utilice esta alícuota para los análisis de caracterización de ADRC, como el recuento de células, la viabilidad celular, el análisis de marcadores de superficie por citometría de flujo y la capacidad de diferenciación de ADRC. Coloque una aguja de calibre 25 en la jeringa de cinco mililitros que contiene los cuatro mililitros de ADRC.
Luego envuélvalo en una cortina estéril. Esta solución de ADRC se inyectará en el receptor y debe contener en promedio de 8,4 a 32,7 millones de células. Asegúrese de que la solución de los ADRC permanezca homogénea inclinando la jeringa suavemente hasta que se inyecte en el cuerpo cavernoso.
Coloque una cortina de apertura sobre el pene. Y un torniquete en la raíz del pene con un lazo de vaso de silicona. Apriete el lazo y asegúrelo con fórceps, haciendo que el torniquete sea lo suficientemente apretado como para detener el flujo sanguíneo del pene.
Use dos hisopos antisépticos para desinfectar la piel del pene en el lugar de la inyección. Luego inyecte un mililitro de la solución ADRC en un ángulo directo en el cuerpo cavernoso, en el lado derecho en dos lugares diferentes. Repita este paso en los cuerpos cavernosos izquierdos, inyectando un volumen total de cuatro mililitros.
Este método se probó en un ensayo clínico abierto de fase uno en 21 hombres con una edad media de 60 años y una erección normal y una vida sexual activa antes de una prostatectomía radical. Seis de los hombres también sufrían de incontinencia. Todos los hombres recibieron una sola inyección inter cavernosa de ADRC aislados y fueron seguidos con cuatro visitas en la clínica ambulatoria a los 1, 3, 6 y 12 meses después de la inyección.
No ocurrieron eventos graves durante el tiempo de observación. Ocho hombres informaron enrojecimiento transitorio e hinchazón en los sitios de inyección, y tres informaron reacción en el área del pene. Ocho hombres experimentaron eventos menores reversibles relacionados con la liposucción, como molestias abdominales leves y hematomas abdominales menores.
Ningún paciente reportó molestias en el seguimiento de un mes. Su función sexual fue evaluada con el Índice Internacional de la Función Eréctil Cinco y el Puntaje de Dureza de la Erección. Ocho de cada 15 hombres en el grupo del continente informaron que su función eréctil era suficiente para el coito a los 12 meses.
El grupo de seis hombres incontinentes no mostró ninguna mejoría de la función eréctil Al intentar este protocolo, tenga en cuenta que las enzimas que se utilizan durante el procedimiento de aislamiento deben sacarse del congelador o refrigerador dos horas antes de que se inicie el procedimiento. Los resultados de esta técnica han allanado el camino para un ECA donde los efectos de las células madre adiposas se exploran a mayor escala.
