Generación de una plataforma de xenoinjerto de melanoma uveal humano ortotópico hepático en ratones inmunodeficientes

La mayoría de los modelos animales tumorales derivados del paciente se implantan por vía subcutánea, lo que impide la evaluación de características importantes de los tumores y de la eficacia del fármaco. La vivienda de los tumores implantados dentro del hígado facilitó este análisis sin el riesgo de demasiadas desviaciones que ocurren dentro del hígado. Antes de comenzar el procedimiento, rocíe todos los materiales e instrumentos con 70% de alcohol etílico.

Confirme la falta de respuesta al pellizco del dedo del dedo del fin en el animal anestesiado. Coloque el ratón en posición supina sobre una almohadilla de calentamiento y moje el pelaje con 70% de alcohol etílico adicional. Extienda el pelaje para visualizar la piel debajo del área subcostal izquierda.

Retire el cabello y aplique yodo para ser absorbido en la piel. Coloque una cortina quirúrgica estéril con un orificio de dos centímetros sobre el ratón, y use fórceps ultra finos curvados para levantar la piel abdominal. Haga una incisión subcostal izquierda transversal de un centímetro en la piel de la tienda e inserte puntas curvas de tijera en la incisión para separar el peritoneo de la piel.

Retirar las tijeras sin abrir las cuchillas, y localizar el hígado debajo del peritoneo por su color rojizo oscuro. Utilice las tijeras curvas para hacer una incisión transversal de un centímetro en el peritoneo. Con la otra mano, inserte el borde de un hisopo de algodón debajo del lóbulo hepático izquierdo, y enrolle el hisopo hacia abajo para empujar hacia arriba el hígado.

Levante el hisopo para transferir el hígado a una lámina de tela absorbente no tejida. Sosteniendo una hoja de bisturí número 11 estéril paralela a la superficie, presione la hoja horizontalmente en el hígado para hacer una incisión de cinco milímetros de profundidad por cinco milímetros de ancho en el parénquima mientras presiona suavemente el sitio de la incisión con un hisopo de algodón. Enrolle el hisopo de algodón hacia arriba para abrir el sitio de la incisión.

Usa fórceps ultra finos curvos para implantar un cubo de tejido tumoral de un milímetro en el bolsillo. Retirar los fórceps mientras se enrolla el hisopo de algodón en la dirección inversa mientras presiona hacia abajo, y retire el hisopo. Coloque inmediatamente un hemostat absorbible en el lugar de la incisión y confirme la hemostasia.

Siguiente uso fórceps extremos contundentes para pelar el hígado de la hoja de tela, y devolver el hígado a la cavidad abdominal. A continuación, cierre el peritoneo con una sutura absorbible 5-0 y una ligadura doble, y cierre la piel con una sutura absorbible 5-0 y una triple ligadura. El tumor xenoinjerto eninjerta en el hígado como un tumor solitario sin nódulos hija.

La inyección ortotópica quirúrgica en el hígado utilizando microneedlas puede resultar en un injerto exitoso de un grupo de células de melanoma uveal metastásicas hepáticas humanas cultivadas dentro del hígado. Utilizando este modelo tumoral ortotópico hepático derivado del paciente, la eficacia de los fármacos inyectados directamente en el hígado se puede probar con resultados esperados similares a los observados en pacientes clínicos.