Este protocolo utiliza el método de muestreo de LCR de cisterna magna en serie para explorar los efectos de la EMTr en los niveles de alfa-beta y tau en mono rhesus. Esta técnica utiliza un nuevo método de muestreo de LCR que permite el muestreo repetido de LCR en condiciones completamente despiertas con bajo riesgo de eventos adversos. Demostrando el procedimiento estarán Ying-Qian Zhang, un asistente de investigación del Departamento de Fisiología de la Universidad Médica del Suroeste, y Hui-Xin Tan, un estudiante graduado de la Universidad de Sichuan.
Después de administrar analgesia y confirmar la anestesia exitosa, coloque al mono rhesus macho de cinco años en la mesa de operaciones en la posición de decúbito lateral y desinfecte el área alrededor de la parte baja de la espalda. Encorva su espalda y lleva sus rodillas hacia el pecho. Inserte una aguja espinal entre las vértebras lumbares L4 a L5 y empuje hasta que haya un estallido que indique la entrada en la cisterna lumbar donde se encuentra el ligamento flavum.
Continúe empujando la aguja más hasta que haya un segundo estallido que indique la entrada en la duramadre, luego retire el estilete de la aguja espinal y recoja gotas de LCR. A continuación, realice la inserción del catéter bajo guía fluoroscópica insertando el catéter epidural a través de la aguja de punción en el espacio subaracnoideo hasta que esté flotante en la cisterna magna. Luego, para la implantación del puerto, haga una incisión de cinco centímetros desde el sitio de la punción hacia la cabeza y aísle la piel del tejido subcutáneo para colocar el puerto de muestreo.
Conecte el puerto al extremo del catéter epidural, implante el puerto debajo de la piel y suture la incisión. Para la recolección de LCR, use las barras de la jaula para sujetar al mono y mantener su espalda doblada. Luego limpie con un hisopo con alcohol e inserte la jeringa en el centro del puerto de muestreo para extraer el LCR de la cisterna magna a través del catéter.
Deseche los primeros 200 microlitros de LCR, luego recoja un mililitro de LCR para su análisis. Fije al mono en la silla del mono antes del experimento para evitar la interrupción durante la intervención de EMTr, luego recoja el LCR para el análisis de biomarcadores cuando el mono esté despierto para evitar la influencia de los medicamentos anestésicos. Al tercer día después del cateterismo subaracnoideo y dos semanas antes del inicio del experimento, someter al mono a entrenamiento adaptativo con la silla del mono dos veces al día durante 30 minutos cada vez.
Realizar el entrenamiento adaptativo rTMS o estimulación simulada una semana después del entrenamiento adaptativo con la silla mono y una semana antes del inicio del experimento formal para evitar obstaculizar el progreso del experimento por vibraciones y sonidos durante el proceso de estimulación. Para la estimulación simulada, use una bobina simulada que produzca vibración y sonido, pero que no genere un campo magnético. Después de la estimulación, ofrezca comida al mono para ayudarlo a adaptarse al proceso.
Localizar la corteza prefrontal dorsolateral bilateral de acuerdo con el sistema internacional 10 a 20 y realizar tres sesiones diferentes de EMTr utilizando tres frecuencias diferentes sin un período de lavado superior a 24 horas. Realice la primera, segunda y tercera sesión dos veces al día durante tres días consecutivos. Para analizar los cuatro biomarcadores del LCR, utilice un método de cateterismo mínimamente invasivo para recolectar el LCR.
Recolectar LCR en cinco puntos de tiempo con cuatro muestras en cada punto de tiempo a intervalos de tres minutos. Después de recolectar un total de 60 muestras para tres frecuencias, cuéntelas y guárdelas en un refrigerador de menos 80 grados Celsius durante un máximo de un mes. Después del experimento, someta todas las muestras a la detección de chips líquidos de acuerdo con las instrucciones del fabricante.
Después de una estimulación de rTMS de hercios, los niveles de Abeta42 aumentaron gradualmente durante 24 horas. De manera similar con la EMTr a 20 hercios, los niveles de Abeta42 aumentaron con el tiempo y alcanzaron un pico a las seis horas después de la estimulación. En contraste, después de la estimulación de 40 hercios, los niveles de Abeta42 aumentaron significativamente inmediatamente en el punto de tiempo posterior a la EMTr, luego disminuyeron lentamente.
La proporción de Abeta42 a Abeta40 mostró una tendencia al alza después de la estimulación con rTMS de uno y 20 hercios y aumentó significativamente dos horas después de la estimulación. Sin embargo, no hubo diferencias significativas en la proporción a 40 hercios. Los niveles de tTau en el LCR aumentaron inmediatamente después de la estimulación de la EMTr de 20 y 40 hercios y disminuyeron gradualmente.
Sin embargo, no hubo diferencias significativas después de una estimulación de hercios. El nivel de pTau aumentó inmediatamente después de la estimulación de 40 hercios y disminuyó a menos del nivel basal después de 24 horas. En contraste, para la estimulación de uno y 20 hercios, el nivel de pTau mostró una tendencia a la baja.
Los investigadores que requieren múltiples muestras de LCR de mono pueden considerar este método de muestreo de LCR de cisterna magna en serie.
