Bu protokol, rTMS'nin rhesus maymununda alfa-beta ve tau seviyeleri üzerindeki etkilerini keşfetmek için seri sarnıç magna CSF örnekleme yöntemini kullanır. Bu teknik, olumsuz olayların düşük riskleri ile tamamen uyanık koşullar altında tekrarlanan CSF örneklemesi için yeni bir CSF örnekleme yöntemi kullanır. Prosedürü gösterenler, Southwest Tıp Üniversitesi Fizyoloji Bölümü'nden araştırma görevlisi Ying-Qian Zhang ve Sichuan Üniversitesi'nden yüksek lisans öğrencisi Hui-Xin Tan olacak.
Analjezi uyguladıktan ve başarılı anesteziyi doğruladıktan sonra, beş yaşındaki erkek rhesus maymununu lateral dekülarus pozisyonunda ameliyat masasına yerleştirin ve alt sırtın etrafındaki bölgeyi dezenfekte edin. Sırtını kamburla ve dizlerini göğsüne doğru getir. Bel omurları L4 ila L5 arasına bir omurilik iğnesi yerleştirin ve ligamentum flavum'un bulunduğu bel sarnıcına girişi gösteren bir pop olana kadar itin.
Dura mater'e girişi gösteren ikinci bir pop olana kadar iğneyi daha fazla itmeye devam edin, ardından stileti omurilik iğnesinden çekin ve CSF damlalarını toplayın. Daha sonra, epidural kateteri, sarnıç magnasında şamandıra olana kadar punçlama iğnesi içinden subaraknoid alana sokarak floroskopik rehberlik altında kateter yerleştirmeyi gerçekleştirin. Daha sonra port implantasyonu için, delinme bölgesinden başa doğru beş santimetrelik bir kesi yapın ve örnekleme portunu yerleştirmek için deri altı dokusundan cildi izole edin.
Bağlantı noktasını epidural kateterin ucuna bağlayın, portunu derinin altına yerleştirin ve kesiği dikin. CSF koleksiyonu için, maymunu dizginlemek ve sırtını bükmek için kafes çubuklarını kullanın. Daha sonra bir alkol çubuğu ile silin ve şırınnayı numune alma portunun ortasına sokarak csf'yi kateterden sarnıç magnasından çıkarın.
CSF'nin ilk 200 mikrolitresini atın, ardından analiz için bir mililitre CSF toplayın. RTMS müdahalesi sırasında kesintiyi önlemek için deneyden önce maymun sandalyesine maymunu sabitlayın, ardından maymun anestezik ilaçların etkisinden kaçınmak için uyanıkken biyobelirteç analizi için CSF toplayın. Subaraknoid kateterizasyondan sonraki üçüncü günde ve deneyin başlamasından iki hafta önce, maymunu her seferinde 30 dakika boyunca günde iki kez maymun sandalyesi ile adaptif eğitime tabi edin.
RTMS uyarlamalı eğitimi veya sahte stimülasyonu, maymun sandalyesi ile adaptif eğitimden bir hafta sonra ve stimülasyon işlemi sırasında titreşimler ve sesler tarafından deneyin ilerlemesini engellememek için resmi deneyin başlamasından bir hafta önce gerçekleştirin. Sahte stimülasyon için, titreşim ve ses üreten ancak manyetik alan oluşturmayan bir sahte bobin kullanın. Stimülasyondan sonra, sürece uyum sağlamasına yardımcı olmak için maymuna yiyecek sunun.
İkili dorsolateral prefrontal korteksi uluslararası 10 ila 20 sistemine göre lokalize edin ve 24 saati aşan bir yıkama süresi olmadan üç farklı frekans kullanarak üç farklı rTMS seansı gerçekleştirin. Üst üste üç gün boyunca günde iki kez birinci, ikinci ve üçüncü oturumları gerçekleştirin. Dört CSF biyobelirtecisini analiz etmek için, CSF'yi toplamak için minimal invaziv bir kateterizasyon yöntemi kullanın.
CSF'i üç dakikalık aralıklarla her zaman noktasında dört örnekle beş zaman noktasında toplayın. Üç frekans için toplam 60 örnek topladıktan sonra, bir aya kadar eksi 80 santigrat derece buzdolabında numaralandırma ve saklama. Deneyden sonra, tüm örnekleri üreticinin talimatlarına göre sıvı talaş tespitine tabi edin.
Bir hertz rTMS stimülasyonundan sonra, Abeta42 seviyeleri 24 saat içinde kademeli olarak arttı. Benzer şekilde rTMS ile 20 hertz,Abeta42 seviyeleri zamanla arttı ve stimülasyondan altı saat sonra zirveye ulaştı. Buna karşılık, 40 hertz stimülasyondan sonra, Abeta42 seviyeleri rTMS sonrası zaman noktasında hemen önemli ölçüde arttı, daha sonra yavaşça azaldı.
Abeta42'nin Abeta40'a oranı, bir ve 20 hertz rTMS ile stimülasyondan sonra bir yükseliş gösterdi ve stimülasyondan iki saat sonra önemli ölçüde arttı. Ancak 40 hertz'de bu oranda önemli bir fark yoktu. CSF'deki tTau seviyeleri 20 ve 40 hertz rTMS stimülasyonundan hemen sonra arttı ve yavaş yavaş azaldı.
Ancak, bir hertz stimülasyonundan sonra önemli bir fark yoktu. pTau seviyesi 40 hertz stimülasyondan hemen sonra arttı ve 24 saat sonra taban çizgisi seviyesinin altına düştü. Buna karşılık, bir ve 20 hertz stimülasyonu için pTau seviyesi düşüş eğilimi gösterdi.
Maymun CSF'nin birden fazla örneğine ihtiyaç duyduğu araştırmacılar, bu seri sarnıç magna CSF örnekleme yöntemini düşünebilirler.
