Este método utiliza frutas de café verde para probar la toxicidad de los insecticidas contra el barrenador de la baya del café. La aplicación de insecticida se realiza antes o después de la infestación de insectos para estudiar la repelencia de la mortalidad de insectos y otros efectos. El uso de café verde real con nutrientes adecuados para el crecimiento de insectos es la forma más adecuada de evaluar la toxicidad de los compuestos para los insectos en condiciones naturales simuladas.
El protocolo permite la evaluación de los efectos tóxicos de los insecticidas químicos y hacia patógenos como hongos o sustancias repelentes. Esta infección de las frutas y los insectos es el paso crítico, ya que una desinfección inadecuada puede causar la muerte de insectos debido a la contaminación. La calidad de los insectos también es importante ya que los insectos débiles sobreestimarán los resultados de un producto tóxico.
La demostración visual permite identificar la etapa apropiada de los frutos del proceso de infestación de insectos, el momento apropiado para propagar la sustancia tóxica. Y la forma de diseccionar los frutos. Demostrando el procedimiento estará Claudia Martínez, asistente de investigación del laboratorio.
Para comenzar, recolecte las frutas de café verde temprano en la mañana con la edad de desarrollo aproximada de 120 a 150 días después de la floración de las plantaciones de café. Seleccione alrededor de 300 frutas sanas y de tamaño uniforme y retire los pedúnculos. Sumerja las frutas de café verde en una solución de jabón al 2% y limpie a fondo frotándolas.
Luego enjuague las frutas tres veces con agua limpia. Sumérjalos en una solución de hipoclorito de sodio al 0,5% y colóquelos en el agitador durante 10 minutos a 110 revoluciones por minuto. Enjuague las frutas con agua limpia tres veces y séquelas con toallas de papel estériles.
Irradia los frutos colocándolos a 55 centímetros de la fuente UV durante 15 minutos, dentro de una estación de flujo laminar horizontal habilitada para UV. Mueva las frutas después de cada cinco minutos para asegurar la irradiación adecuada de la fruta entera. Para configurar los bioensayos, sumerja los barrenadores de bayas de café que surgieron el mismo día en una solución de hipoclorito de sodio al 0,5% y agítelos lentamente con un cepillo durante 10 minutos.
Filtra estos insectos a través de un paño de muselina y lávalos tres veces con agua destilada estéril. Retire el exceso de agua con toallas de papel estériles. Prepare un grupo de 30 frutas de café verde por unidad experimental y colóquelas en una caja de plástico.
Aplique diferentes concentraciones de un producto de prueba para su evaluación utilizando una unidad pulverizadora portátil, aquí, se utilizaron emulsiones alcaloides al 5% y 6%. Como control, rocíe un grupo de frutas de café verde con agua. Utilice al menos tres unidades experimentales por tratamiento, rociando una tras otra.
En una capucha estéril, suelte dos adultos barrenadores de bayas de café por fruta de café verde y cubra las cajas después de 30 minutos. Deje las cajas de plástico con las frutas de café verde infestadas en la oscuridad dentro de una habitación o incubadora, teniendo condiciones controladas. Después de 1, 7, 15 y 21 días, cuente el número de frutos de barrenador e insectos vivos y muertos fuera de las frutas en cada caja.
A los 20 días después de la infestación, diseccione cada fruta de café verde bajo un microscopio estereoscópico con un aumento de 10x y cuente el número de semillas sanas o semillas dañadas por los insectos en cada fruta. Cuente las diferentes etapas biológicas del barrenador de la baya del café. Observe el número de insectos muertos en cada semilla para determinar la mortalidad de insectos por unidad experimental.
En una capucha estéril, libere a los adultos barrenadores de la baya del café a las frutas de café verde previamente desinfectadas en una proporción de dos a uno y permita que la infestación proceda durante tres horas a 21 grados centígrados. La mayoría de las frutas de café verde deben infestarse después de tres horas con el abdomen del barrenador de la baya del café aún expuesto. Seleccione 46 frutas infestadas y colóquelas en un estante de plástico de 96 pocillos para que el tratamiento se pueda rociar directamente sobre el barrenador de la baya del café que perfora la fruta.
Rocíe tres bastidores al menos tres veces para el tratamiento, uno después del otro y cubra los bastidores después de 30 minutos. Después de 20 días, diseccione las frutas de café verde bajo un microscopio estereoscópico a un aumento de 10 x y cuente el número de semillas sanas o semillas dañadas por los insectos en cada fruta. Cuente las diferentes etapas biológicas del barrenador de la baya del café y el número de insectos muertos en cada semilla para determinar la mortalidad de insectos por unidad experimental.
Siga los pasos iniciales para evaluar un producto con un efecto protector sobre las frutas y libere las frutas de café verde adultos en las cajas de plástico. Luego cuente el número de barrenadores de bayas de café que vuelan lejos de las cajas y el número que infesta las frutas del café verde. Después de la incubación, en condiciones controladas, seguida de la disección a los 20 días después de la infestación y el recuento de las semillas y los insectos muertos, siga los pasos descritos para evaluar el producto, después de la infestación del barrenador de la baya del café.
Cuente el número de perforaciones de bayas de café que se movieron fuera de las frutas de café verde o volaron lejos de las frutas. Después de rociar cada tratamiento, siga los pasos desde la incubación en condiciones controladas para determinar la mortalidad de insectos por unidad experimental. 5% y 6% de insecticida aplicado al barrenador de la baya del café, causó una alta mortalidad de insectos en el día 20 y mostró diferencias significativas en comparación con el control.
Se vio que la aplicación del insecticida dos resultó en el 94% de las semillas sanas, y el insecticida uno resultó en el 89% de las semillas sanas. El 37% de las semillas no estaban infestadas en el grupo de control. En el caso de la post-infestación, los productos penetraron en la cutícula del insecto causando la mortalidad de los insectos.
La mayor mortalidad ocurrió con el insecticida dos. Los efectos de los insecticidas se reflejaron en el porcentaje de semillas sanas no infectadas, en el día 20 de la evaluación. Se encontró una población reducida de insectos dentro de las semillas de café en comparación con la población de insectos encontrada en el grupo de control, rociada con agua.
La acción combinada de entomopatógeno y repelente resultó en un daño mínimo de las semillas y una mortalidad máxima de insectos. Esta infección de los frutos y la desinfección de los insectos aseguran el éxito del protocolo. Esta metodología también se puede utilizar para evaluar la tolerancia o resistencia de las frutas de café al barrenador de la baya del café.
También se puede observar un efecto negativo contra la población de insectos en el caso de las semillas de café resistentes a los insectos. Esta metodología se puede utilizar no solo en entomología para evaluar insecticidas con diferentes modos de acción, sino también en fitomejoramiento para la evaluación de variedades tolerantes y fitopatología para estudiar la interacción fruto/patógeno.
