El desarrollo de un método de detección de 15 alcaloides de pirrolizidina en malezas, suelo, hojas de té frescas y muestras de té seco puede proporcionar apoyo técnico para explorar la fuente de contaminación por alcaloides de pirrolizidina en el té. En comparación con la extracción en fase sólida, el método adsorbente para la muestra de suelo puede ahorrar tiempo, reducir el costo y mejores recuperaciones para el análisis de alcaloides de pirrolizidina. Para comenzar la extracción en los productos de té seco precalentados, hojas de té frescas o malezas, pese un gramo de una muestra en un tubo de centrífuga de 50 mililitros y agregue 10 mililitros de 0.1 moles por litro de solución de ácido sulfúrico en el tubo.
A continuación, realice un vórtice de la muestra durante dos minutos si se va a analizar mediante extracción en fase sólida, mientras que durante un minuto si la misma se va a analizar mediante limpieza de adsorbentes. Luego someta la muestra a la extracción ultrasónica durante 15 minutos, seguida de centrifugación a 9, 390 G durante 10 minutos a temperatura ambiente. Luego, con un gotero con punta de plástico, transfiera la solución sobrenadante a un tubo de centrífuga de 50 mililitros.
Después de realizar la extracción dos veces, combine los sobrenadantes en el tubo. Para comenzar la extracción en el suelo preparado, pese un gramo de una muestra en un tubo de centrífuga de 50 mililitros. Agregue 0.1 mililitros de 0.1 moles por litro de solución de citrato trisódico para ajustar el pH del suelo a 6.0 y deje reposar la muestra durante dos minutos.
Luego agregue 10 mililitros de 0.1 moles por litro de solución de metanol de ácido sulfúrico en el tubo, y vortex la muestra durante dos minutos, seguido de agitar durante 30 minutos. A continuación, realice la extracción ultrasónica durante 30 minutos como se demostró anteriormente. Luego centrifugar la muestra a 9, 390 G durante 10 minutos.
Y usando un gotero con punta de plástico, transfiera el sobrenadante a un tubo de centrífuga de 50 mililitros. Después de realizar la extracción dos veces, combine los sobrenadantes. Active el cartucho de extracción en fase sólida o SPE con cinco mililitros de metanol seguidos de cinco mililitros de agua desionizada.
Después de la activación, agregue 10 mililitros del sobrenadante de la extracción de la muestra al cartucho preactivado. Después de que el nivel de la solución de muestra alcance la capa superior de cartuchos, eluya la matriz de muestra con cinco mililitros de solución de ácido fórmico al 1%, seguido de cinco mililitros de metanol, y deseche los eluyentes. A continuación, eluya los analitos con cinco mililitros de metanol que contiene 0,5% de agua de amoníaco.
Filtrar el eluyente a través de un filtro de membrana de 0,22 micras para analizar por UPLC-MS/MS. Para realizar la limpieza de la muestra con adsorbente, prepare un tubo de centrífuga de 10 mililitros con el adsorbente comprometiendo GCB, PSA y C18 en una proporción de 10 a 20 a 15 miligramos. Luego agregue dos mililitros del sobrenadante obtenido después del tratamiento de la muestra.
A continuación, vortex la muestra y la mezcla adsorbente durante un minuto y centrifugar a 9, 390 G durante ocho minutos a temperatura ambiente. Filtrar un mililitro del sobrenadante resultante a través de un filtro de membrana de 0,22 micras en un vial de muestra antes de analizarlo por UPLC-MS/MS. En el estudio, se obtuvo un mayor porcentaje de recuperación de 15 alcaloides de pirrolizidina de hojas de té frescas, muestras de té seco y malezas utilizando la técnica de purificación adsorbente en comparación con el método de cartucho SPE.
Las recuperaciones de los alcaloides en el suelo mediante purificación adsorbente fueron del 79 al 111% En las hojas de té frescas recogidas en los cinco sitios de muestreo, se detectó un mayor contenido de N-óxido intermedino que de senecionina. No se detectó senecionina en hojas maduras de los sitios de muestreo uno y dos. Entre los 11 alcaloides de pirrolizidina, solo se detectó N-óxido intermedino en el suelo, mientras que la senecionina y el N-óxido intermedino se detectaron en diferentes partes de las plantas de té.
Además, se encontró que el contenido del N-óxido Intermedine en un brote con dos hojas era el más alto. Al intentar esto primero, lo más importante es agregar 0.1 mililitros de 0.1 moles por litro de solución de citrato trisódico para ajustar el pH del suelo a 6.0. Este método se puede aplicar al análisis de alcaloides en otras plantas comestibles, y también proporciona una técnica natural para explorar la fuente de alcaloides en ellos.
