El escarabajo de la papa de Colorado es una de las plagas más graves de la papa en las zonas templadas. Los estudios de inmunidad y patogenia de esta plaga se llevan a cabo principalmente en la etapa activa. Sin embargo, en zonas templadas, esta plaga pasa la mayor parte de su ciclo de vida en estado de hibernación.
En este estudio, presentamos un método para la hibernación del escarabajo de la papa de Colorado y una técnica para recolectar escarabajos en invierno. La principal ventaja de este método es que permite obtener cualquier número de individuos invernantes para el análisis del virus en cualquier período de hibernación. Use jaulas hechas de un marco rígido de madera con un tamaño de 25 por 25 por 40 centímetros.
Para construir un marco para la jaula, use listones de madera de al menos dos centímetros de grosor y cuatro centímetros de ancho. Cubra el interior de la jaula con una malla de acero inoxidable con un tamaño de no más de cinco por tres milímetros. Fija la malla con una grapadora de madera.
Forrar el interior de la jaula con un geotextil sintético negro con una densidad de 60 gramos por metro cuadrado. Sujete firmemente un tubo de tela sintética translúcida translúcida, de aproximadamente 60 centímetros de altura a la parte superior de la jaula. Cruza y fija dos cuerdas fuertes al fondo de la jaula para sacarla del suelo cuando sea necesario.
Cava un hoyo en el suelo de 40 centímetros de profundidad. Coloque hierba seca o heno en el hoyo. Coloque la jaula adentro de modo que el heno o la hierba seca queden entre las paredes de la jaula y el suelo.
Llene las jaulas con tierra del mismo campo de papas donde se recolectan los insectos. Instale registradores de datos de temperatura y humedad a prueba de agua en las jaulas a las profundidades requeridas. Plante las plántulas de papa dentro de la jaula de tres a cuatro semanas antes de la introducción del escarabajo y riéguelas moderadamente.
Fija un tubo de tela sintética verticalmente a un palo de cualquier material instalado en el exterior de la jaula. Recoja manualmente los escarabajos adultos en los campos de papa libres de pesticidas hacia el final de la vegetación de papa. Mantenga los escarabajos recolectados en cubos de plástico de 20 litros que contengan puntas de papa para alimentar a los insectos antes de colocarlos en las jaulas.
Cubre los cubos con una tela transpirable. Coloque no más de 200 individuos de escarabajos en las plantas de papa cubiertas por la malla de tela sintética. Cuando se consuman las puntas de las papas, agregue las frescas colocadas en un frasco de plástico que contenga agua y luego cambie las puntas de las papas diariamente.
Una vez que todos los escarabajos se hayan enterrado en el suelo para pasar el invierno, desate el tubo de tela sintética del palo y coloque la tela en el suelo. Retira la nieve por encima de la superficie de la jaula. Afloja la jaula a cada lado con una pala fuerte.
Saca la jaula de la tierra con cuerdas. Lleva la jaula al laboratorio. Retire la tierra de la jaula en pequeñas porciones, rompa con cuidado los trozos grandes de tierra y aísle los escarabajos con pinzas.
Separe los escarabajos vivos de los cadáveres. Los escarabajos vivos y sanos compactan el suelo a su alrededor formando una cavidad de aire, la llamada cuna, y por lo tanto se separan fácilmente del suelo. Los escarabajos muertos por hongos están momificados o tienen micelio visible en la superficie.
Los insectos en descomposición bacteriana son oscuros. Tamiza la tierra a través de un colador para asegurarte de que todos los escarabajos estén aislados y no estén dañados. Coloque los cadáveres con síntomas de una infección fúngica o descomposición bacteriana en un tubo Falcon estéril individual para su futura identificación.
Guarde los escarabajos vivos en un refrigerador a una temperatura de 2 grados centígrados hasta su análisis en recipientes cerrados ventilados que contengan una bola de algodón húmeda. Para recolectar hemolinfa, haga una punción en la parte lateral del abdomen debajo de la aorta con una aguja de insulina. Para aislar el intestino, corte la cápsula de la cabeza, exprima todo el contenido en una placa de Petri con tampón de fosfato.
Separa el intestino y límpialo de grasa y vasos de Malpighi. Separe una sección deseada del intestino, como el intestino anterior, el intestino medio o el intestino posterior. Para aislar el cuerpo graso, sepárelo de los otros tejidos después del aislamiento del intestino.
Para aislar los hongos entomopatógenos de los cadáveres, coloque los cadáveres momificados en una cámara de humedad estéril. Utilice conidios aéreos o esclerocios del contenido interno de los escarabajos para colocar en agar dextrosa Sabouraud con ácido láctico al 0,4%. Aísle las bacterias de los cadáveres con síntomas de descomposición bacteriana.
Corta la cabeza de un escarabajo, exprime el contenido interno y recógelo en tubos para su posterior colocación en un medio para detectar bacterias. Se registraron temperaturas bajo cero en las jaulas a una profundidad de 30 centímetros, desde finales de noviembre hasta principios de abril. La temperatura media durante este periodo fue de 3,3 a 0,1 grados centígrados.
La temperatura más baja registrada fue de 7,9 grados centígrados a mediados de febrero. La mortalidad de los insectos aumentó durante la hibernación y alcanzó un máximo en primavera, antes de la emergencia. El número inicial de escarabajos fue de 2.000, de los cuales sobrevivieron 1.470 individuos.
Así, la tasa de supervivencia de los escarabajos durante la hibernación fue del 61%Un análisis de 530 cadáveres mostró que durante el período de hibernación el 53% de ellos se caracterizaron por síntomas de descomposición bacteriana y el 25% se caracterizaron por síntomas de infección fúngica. Beauveria dominó entre los cultivos aislados de hongos entomopatógenos. Metarhizium, Cordyceps y Lecanicillium fueron mucho menos comunes.
Entre las bacterias aisladas de los cadáveres con síntomas de descomposición bacteriana, se identificaron especies pertenecientes a los géneros Bacillus, Sphingobacterium, Peribacillus, Pseudomonas, Serratia, Rahnella y Glutamicibacter. El uso de este método puede resolver el problema de obtener escarabajos de la papa de Colorado del campo en invierno. Permite obtener tantos individuos como necesite con la baja tasa de mortalidad de los insectos.
El estudio de diversos aspectos de la hibernación de los escarabajos es importante tanto desde el punto de vista fundamental como aplicado para mejorar el enfoque del control de esta plaga. Y, por supuesto, esta técnica se puede adaptar a otras especies de insectos que hibernan en el suelo.
