Cribado de moléculas pequeñas y pruebas de toxicidad en larvas de pez cebra en fase inicial

Para comenzar, reúna embriones de pez cebra en etapa temprana tres días después de la fertilización en una placa de Petri. Con una micropipeta de 1000 microlitros configurada a un volumen de 100 microlitros, transfiera un embrión eclosionado de aspecto saludable a cada pocillo de una placa de 96 pocillos. Ahora, pipetee la cantidad necesaria del producto problema en cada pocillo de una placa de 12 pocillos.

A continuación, ajusta el volumen total a 2,4 mililitros con medio E3. Prepare el control del vehículo de acuerdo con el solvente utilizado para disolver el producto químico de prueba de stock. Con una pipeta de 200 microlitros, retire cualquier solución E3 existente de cada pocillo de la placa de 96 pocillos.

Utilice una micropipeta de ocho canales para sustituirla por 100 microlitros del medio de prueba preparado para cada concentración. Asegúrese de que se analice un total de 24 larvas por concentración. Después de 24 horas, utilice un microscopio óptico estereoscópico para realizar la puntuación morfológica.

Puntúe la morfología utilizando un método binario, donde ausente indica una morfología normal y presente indica una anormalidad morfológica. Una vez finalizado el corte, retire 50 microlitros del medio de cada pocillo. Reemplácelo con 50 microlitros de medio de prueba recién preparado.

Retire y registre las larvas muertas, luego incube las larvas a 28,5 grados centígrados con un ciclo de 14 horas de luz y 10 horas de oscuridad. El pez cebra a los cinco días después de la fertilización exhibió diversos fenotipos después de dos días de exposición al medicamento. Los peces cebra no afectados se observaron como normales, mientras que el edema pericárdico leve fue evidente en algunos peces.

En otros se observó edema pericárdico grave, acompañado de hemorragia vitelino y extensión de la yema. También se observó retraso en el desarrollo con reducción de la pigmentación, la vejiga natatoria y la longitud total. Los fenotipos adicionales incluyeron el pez cebra con yema hinchada y aleta caudal retorcida, aleta caudal ausente y notocorda curvada.

Los casos graves presentaron truncamiento y muerte con necrosis.