preparation-of-drosophila-s2-cells-for-light-microscopy

Preparation of <em>Drosophila</em> S2 cells for Light Microscopy

The ideal experimental system would be cheap and easy to maintain, amenable to a variety of techniques, and would be supported by an extensive literature ...

University of Arizona (UOA)

H8 &#x6D3E;&#x751F;&#x81EA;&#x529B;&#x8840;&#x6E05;&#x578B;&#x6C99;&#x95E8;&#x6C0F;&#x83CC;&#x80A0;&#x708E;&#x6C99;&#x95E8;&#x6C0F;&#x83CC;&#x566C;&#x83CC;&#x4F53;&#x7684;&#x96C6;&#x5408;&#x3002;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x7ED3;&#x6784;&#x53CA;&#x5176;&#x5F62;&#x6001;&#x76F8;&#x4F3C;&#x7684;&#x566C;&#x83CC;&#x4F53; T5 Siphoviridae &#x5BB6;&#x65CF;&#x4E2D;&#x7684;&#x90A3;&#x4E9B;&#x3002;H8 &#x611F;&#x67D3; S.&#x529B;&#x8840;&#x6E05;&#x578B;&#x80A0;&#x708E;&#x6C99;&#x95E8;&#x6C0F;&#x83CC;&#x548C;&#x9F20;&#x4F24;&#x5BD2;&#x548C;&#x5927;&#x80A0;&#x57C3;&#x5E0C;&#x6C0F;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x5916;&#x819C;&#x86CB;&#x767D;&#x5F62;&#x72B6;&#x7684;&#x521D;&#x59CB;&#x5438;&#x9644;&#x3002;&#x94C1; enterobactin &#x6291;&#x5236; H8 &#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x5F62;&#x72B6; &#xFF08;50%&#x6291;&#x5236;&#x6D53;&#x5EA6;&#xFF0C;98 nM&#xFF09;&#xFF0C;&#x548C;&#x5176;&#x4ED6;&#x94C1;&#x90BB;&#x82EF;&#x4E8C;&#x915A;&#x53CC;&#x53D7;&#x4F53; &#xFF08;&#x91D1;&#x878D;&#x60C5;&#x62A5;&#x5BA4;&#x3001; Cir &#x548C;&#x94C1;&#xFF09; &#x6CA1;&#x6709;&#x53C2;&#x52A0;&#x566C;&#x83CC;&#x4F53;&#x5438;&#x9644;&#x3002;H8 &#x611F;&#x67D3;&#x901A;&#x5E03;&#x5C9B;&#x7684;&#x4F9D;&#x8D56;&#xFF0C;&#x4F46; exbB &#x7A81;&#x53D8;&#x6C99;&#x95E8;&#x6C0F;&#x83CC;&#x6216;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x4E2D;&#x7684;&#x5E76;&#x6CA1;&#x6709;&#x9632;&#x6B62;&#x611F;&#x67D3; &#xFF1B;&#x53EA;&#x6709; exbB tolQ &#x6216; exbB tolR &#x53CC;&#x7A81;&#x53D8;&#x4EBA; H8 &#x4E0D;&#x60F3;&#x53BB;&#x3002;&#x5220;&#x9664;&#x548C;&#x66FF;&#x6362;&#x7A81;&#x53D8;&#x7684;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x8868;&#x660E;&#x53D7;&#x4F53;-&#x566C;&#x83CC;&#x4F53;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x9996;&#x5148;&#x6D89;&#x53CA;&#x5206;&#x5E03;&#x5728;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x5916;&#x8868;&#x9762;&#x7684;&#x6B8B;&#x7559;&#x7269;&#x7136;&#x540E;&#x7F29;&#x5C0F;&#x5230;&#x540C;&#x4E00;&#x5E26;&#x7535; (R316) &#x6216;&#x53C2;&#x4E0E;&#x7684;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x548C;&#x8FD0;&#x8F93;&#x94C1; enterobactin &#x548C; colicins B &#x548C; D &#x7684;&#x82B3;&#x9999; (Y260) &#x6B8B;&#x7559;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6570;&#x636E;&#x4F7F;&#x4E4B;&#x5408;&#x7406;&#x5316;&#x7684;&#x5F62;&#x72B6;&#x7684;&#x591A;&#x529F;&#x80FD;&#xFF1A; &#x6709;&#x6BD2;&#x914D;&#x50CF;&#x7EC6;&#x83CC;&#x548C;&#x566C;&#x83CC;&#x4F53;&#x7A7F;&#x900F;&#x5916;&#x819C;&#x7684;&#x5BC4;&#x751F;&#x6B8B;&#x7559;&#x7269;&#x7684;&#x5F62;&#x72B6;&#x662F;&#x9002;&#x5E94;&#x8FD0;&#x8F93;&#x7684;&#x5929;&#x7136;&#x914D;&#x4F53;&#xFF0C;&#x94C1; enterobactin&#x3002;DNA &#x5E8F;&#x5217;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x53D1;&#x73B0; H8 &#x5B8C;&#x6574;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x7684; 104.4 kb&#x3002;&#x603B;&#x5171;&#x6709; 120 &#x5176; 143 &#x9884;&#x6D4B;&#x5F00;&#x653E;&#x9605;&#x8BFB;&#x6846;&#x67B6; &#xFF08;ORFS&#xFF09; &#x662F;&#x540C;&#x6E90;&#x5230; ORFS t5&#xFF0C;84%&#x7684;&#x8EAB;&#x4EFD;&#x548C; 89%&#x76F8;&#x4F3C;&#x4E00;&#x7EA7;&#x3002;&#x5728; T5&#x3001; H8 &#x7ED3;&#x6784;&#x57FA;&#x56E0;&#x6309;&#x5176;&#x529F;&#x80FD;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x4E0A;&#x805A;&#x96C6;&#x5728;&#x566C;&#x83CC;&#x4F53;&#x7684;&#x751F;&#x547D;&#x5468;&#x671F;&#x3002;T5 &#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x5305;&#x542B;&#x7684; DNA&#xFF0C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5C06;&#x5176;&#x5220;&#x9664;&#xFF0C;&#x7F3A;&#x5E2D;&#x7684;&#x4E00;&#x5927;&#x6BB5;&#x4E2D; H8: H8 T5 &#x4E0E;&#x76F8;&#x6BD4;&#xFF0C;&#x5305;&#x542B; 9,000 bp &#x5220;&#x9664;&#x65E9;&#x671F;&#x5730;&#x533A;&#x5176;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x548C;&#x4E5D;&#x4E2A;&#x53EF;&#x80FD;&#x552F;&#x4E00;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x4EA7;&#x54C1;&#x3002;&#x566C;&#x83CC;&#x4F53;&#x5728;&#x540C;&#x4E00;&#x5BB6;&#x5EAD;&#x4E2D;&#x7684;&#x5C3E;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x5E8F;&#x5217;&#x5206;&#x6790;&#x663E;&#x793A;&#xFF0C;&#x76F8;&#x5BF9;&#x4E8E; pb5 (&#x74E6;&#x5FB7;) H8 &#x5F62;&#x72B6;&#x7ED3;&#x5408;&#x86CB;&#x767D; (Rbp) T5 &#x548C; BF23 &#x5C0F;&#x65F6;&#xFF0C;&#x5305;&#x542B;&#x552F;&#x4E00;&#x9178;&#x6027;&#x548C;&#x82B3;&#x9999;&#x7684;&#x6B8B;&#x7559;&#x7269;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x4FA7;&#x94FE;&#x53EF;&#x80FD;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x57FA;&#x672C;&#x548C;&#x82B3;&#x9999;&#x4E2D;&#x6B8B;&#x7559;&#x91CF;&#x5F62;&#x72B6;&#xFF0C;&#x901A;&#x5E38;&#x5728;&#x94C1; enterobactin &#x7684;&#x5438;&#x9644;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x9884;&#x6D4B;&#x7684; H8 &#x5C3E;&#x86CB;&#x767D;&#x8868;&#x660E;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x8BA4;&#x540C;&#x548C; pb2 &#x7684; T5&#xFF0C;&#x8FD9;&#x8868;&#x660E;&#x5B83;&#x8FD8;&#x51FD;&#x6570;&#x5728;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x4FE1;&#x5C01;&#x901A;&#x8FC7;&#x5B54;&#x9699;&#x5F62;&#x6210;&#x76F8;&#x4F3C;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x86CB;&#x767D;&#x53EF;&#x53D8;&#x533A;&#x5305;&#x542B;&#x4E00;&#x4E2A;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x901A;&#x5E03;&#x5C9B;&#x6846;&#xFF0C;&#x5B83;&#x53C2;&#x4E0E;&#x4E86;&#x566C;&#x83CC;&#x4F53;&#x611F;&#x67D3;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x7684;&#x4F9D;&#x8D56;&#x901A;&#x5E03;&#x5C9B;&#x7684;&#x9636;&#x6BB5; &#xFF1B; &#x8BE5;&#x62A5;&#x544A;&#x901A;&#x77E5;&#x3002;

&#x566C;&#x83CC;&#x4F53;&#x4F9D;&#x8D56;&#x5F62;&#x72B6;&#x7684;&#x901A;&#x5E03;&#x5C9B; H8: &#x53D7;&#x4F53;&#x7ED3;&#x5408;&#x548C;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x5E8F;&#x5217;&#x3002;

H8 is derived from a collection of Salmonella enterica serotype Enteritidis bacteriophage. Its morphology and genomic structure closely resemble those of bacteriophage T5 in the family Siphoviridae. H8 infected S. enterica serotypes Enteritidis and Typhimurium and Escherichia coli by initial adsorption to the outer membrane protein FepA. Ferric enterobactin inhibited H8 binding to E. coli FepA (50% inhibition concentration, 98 nM), and other ferric catecholate receptors (Fiu, Cir, and IroN) did not participate in phage adsorption. H8 infection was TonB dependent, but exbB mutations in Salmonella or E. coli did not prevent infection; only exbB tolQ or exbB tolR double mutants were resistant to H8. Experiments with deletion and substitution mutants showed that the receptor-phage interaction first involves residues distributed over the protein's outer surface and then narrows to the same charged (R316) or aromatic (Y260) residues that participate in the binding and transport of ferric enterobactin and colicins B and D. These data rationalize the multifunctionality of FepA: toxic ligands like bacteriocins and phage penetrate the outer membrane by parasitizing residues in FepA that are adapted to the transport of the natural ligand, ferric enterobactin. DNA sequence determinations revealed the complete H8 genome of 104.4 kb. A total of 120 of its 143 predicted open reading frames (ORFS) were homologous to ORFS in T5, at a level of 84% identity and 89% similarity. As in T5, the H8 structural genes clustered on the chromosome according to their function in the phage life cycle. The T5 genome contains a large section of DNA that can be deleted and that is absent in H8: compared to T5, H8 contains a 9,000-bp deletion in the early region of its chromosome, and nine potentially unique gene products. Sequence analyses of the tail proteins of phages in the same family showed that relative to pb5 (Oad) of T5 and Hrs of BF23, the FepA-binding protein (Rbp) of H8 contains unique acidic and aromatic residues. These side chains may promote binding to basic and aromatic residues in FepA that normally function in the adsorption of ferric enterobactin. Furthermore, a predicted H8 tail protein showed extensive identity and similarity to pb2 of T5, suggesting that it also functions in pore formation through the cell envelope. The variable region of this protein contains a potential TonB box, intimating that it participates in the TonB-dependent stage of the phage infection process.

FepA- and TonB-dependent bacteriophage H8: receptor binding and genomic sequence.

H8 est d&eacute;riv&eacute; d&#39;une collection de Salmonella enterica s&eacute;rotype Enteritidis phage. Sa morphologie et la structure g&eacute;nomique sont tr&egrave;s proches de celles du bact&eacute;riophage T5 appartenant &agrave; la famille des Siphoviridae. H8 infect&eacute;s par S. enterica s&eacute;rotypes Enteritidis et Typhimurium et Escherichia coli par adsorption initiale &agrave; la prot&eacute;ine de membrane externe FepA. Ferrique ent&eacute;robactine inhib&eacute;e la liaison de H8 &agrave; e. coli FepA (concentration inhibitrice de 50 %, 98 nM), et d&#39;autres r&eacute;cepteurs cat&eacute;cholate ferrique (CRF, Cir et fer) ne participent pas &agrave; l&#39;adsorption du phage. H8 infection &eacute;tait TonB d&eacute;pendant, mais des mutations exbB Salmonella ou Escherichia coli n&#39;a pas emp&ecirc;ch&eacute; l&#39;infection ; seulement exbB tolQ ou exbB tolR doubles mutants &eacute;taient r&eacute;sistants &agrave; H8. Exp&eacute;riences avec la suppression et la substitution des mutants ont montr&eacute; que l&#39;interaction de r&eacute;cepteur-phage implique tout d&#39;abord les r&eacute;sidus r&eacute;parties sur la surface externe de la prot&eacute;ine et puis se r&eacute;tr&eacute;cit &agrave; la m&ecirc;me charge (R316) ou les r&eacute;sidus aromatiques (Y260) qui participent &agrave; la liaison et le transport de l&#39;ent&eacute;robactine ferrique et colicines B et D. Ces donn&eacute;es rationaliser la multifonctionnalit&eacute; de la FepA : ligands toxiques comme les bact&eacute;riocines et phage p&eacute;n&egrave;trent la membrane externe par parasitant les r&eacute;sidus en FepA adapt&eacute;s au transport de ligand naturel, ent&eacute;robactine ferrique. D&eacute;terminations de s&eacute;quence d&#39;ADN a r&eacute;v&eacute;l&eacute; la totalit&eacute; du g&eacute;nome de 104,4 kb H8. Un total de 120 de ses 143 pr&eacute;dit cadres ouverts de lecture (ORF) &eacute;taient homologues &agrave; l&#39;ORF en T5, &agrave; un degr&eacute; de similitude entre identit&eacute; et 89 % de 84 %. Comme dans T5, les g&egrave;nes structuraux H8 regroup&eacute;s sur le chromosome selon leur fonction dans le cycle de vie du phage. Le g&eacute;nome de T5 contient une grande partie de l&#39;ADN qui peuvent &ecirc;tre supprim&eacute;s et qui est absent en H8 : par rapport &agrave; T5, H8 contient une d&eacute;l&eacute;tion de 9 000 PB dans la r&eacute;gion au d&eacute;but de ses chromosomes et neuf produits de g&egrave;nes potentiellement unique. Analyse de la s&eacute;quence des prot&eacute;ines queue des phages dans la m&ecirc;me famille qui montre pb5 (Oad) de T5 et Hrs de BF23, la prot&eacute;ine liant le FepA (Rbp) de H8 contient des r&eacute;sidus acides et aromatiques uniques. Ces cha&icirc;nes lat&eacute;rales peuvent favoriser la liaison aux r&eacute;sidus aromatiques et base en FepA qui fonctionnent normalement dans l&#39;adsorption de l&#39;ent&eacute;robactine ferrique. De plus, une prot&eacute;ine queue H8 a montr&eacute; identit&eacute; vaste et similitude &agrave; pb2 du T5, sugg&eacute;rant qu&#39;elles fonctionnent &eacute;galement dans la formation de pores &agrave; travers l&#39;enveloppe cellulaire. La r&eacute;gion variable de cette prot&eacute;ine contient une zone de TonB potentielle, ce qu&#39;elle participe &agrave; l&#39;&eacute;tape de TonB d&eacute;pendant du processus d&#39;infection bact&eacute;riophage.

Bact&eacute;riophage d&eacute;pendante du FepA et TonB H8 : fixation du r&eacute;cepteur et la s&eacute;quence g&eacute;nomique.

H8 ist eine Sammlung von Salmonella Enterica Serotyp Enteritidis Bakteriophage abgeleitet. Seine Morphologie und genomische Struktur &auml;hnelt stark der Bakteriophage T5 in der Familie Siphoviridae. H8 infiziert S. Enterica Serotypen Enteritidis und Typhimurium und Escherichia coli von anf&auml;nglichen Adsorption an die &auml;u&szlig;ere Membrane Proteine FepA. Ferric Enterobactin gehemmt H8 Bindung an E. Coli FepA (50 % Hemmung Konzentration, 98 nM), und anderen Eisen-III-Catecholate-Rezeptoren (Fiu, Cir und Eisen) nicht Phage Adsorption an. H8-Infektion war TonB abh&auml;ngigen, aber ExbB Mutationen im Salmonellen oder E. Coli Infektion nicht verhindern; nur ExbB TolQ oder ExbB TolR Doppel Mutanten waren resistent gegen H8. Experimente mit L&ouml;schung und Ersetzung von Mutanten zeigte, dass die Rezeptor-Phage Interaktion zuerst R&uuml;ckst&auml;nde &uuml;ber das Protein Au&szlig;enfl&auml;che verteilt umfasst und verengt sich dann zur gleichen aufgeladenen (R316) oder aromatische (Y260)-R&uuml;ckst&auml;nde, die Teilnahme an der Bindung und den Transport von Eisen Enterobactin und Colicins B und D. Diese Daten rationalisieren die Multifunktionalit&auml;t der FepA: toxischen Liganden wie Colicine und Phage die &auml;u&szlig;ere Membran durchdringen durch parasitizing R&uuml;ckst&auml;nde in FepA, die f&uuml;r den Transport des nat&uuml;rlichen Liganden, ferric Enterobactin angepasst sind. DNA-Sequenz-Ermittlungen ergeben das komplette Genom H8 104.4 kb. Insgesamt 120 von seiner 143 vorhergesagt, dass offene Lesung Rahmen (ORFS) homologe zu ORFS in T5, auf Ebene der Identit&auml;t und 89 % &Auml;hnlichkeit 84 % waren. Wie in T5 gruppierte die H8 strukturelle Gene auf dem Chromosom je nach Funktion im Lebenszyklus Phage. Das T5-Genom enth&auml;lt einen gro&szlig;en Teil der DNA, die gel&ouml;scht werden k&ouml;nnen und das ist nicht vorhanden, in H8: im Vergleich zu T5, H8 enth&auml;lt 9.000-bp L&ouml;schung in der fr&uuml;hen Region seine Chromosom, und neun m&ouml;glicherweise eindeutiger Genprodukte. Sequenz-Analysen der Schwanz-Proteine der Phagen in der gleichen Familie haben gezeigt, dass relativ pb5 (Oad) T5 und Stunden des BF23, das FepA-verbindliches Protein (Rbp) von H8 enth&auml;lt einzigartige sauer und aromatische R&uuml;ckst&auml;nde. Diese Seitenketten k&ouml;nnen Bindung an Grund- und aromatische R&uuml;ckst&auml;nde in FepA f&ouml;rdern, die in die Adsorption von Eisen Enterobactin normal zu funktionieren. Ferner zeigte eine vorhergesagte H8-Schwanz-Protein umfassende Identit&auml;ts- und &Auml;hnlichkeitsrecherche, pb2 T5, was darauf hindeutet, dass es auch in Porenbildung durch die Zellh&uuml;llen funktioniert. Die Variable Region dieses Protein enth&auml;lt eine potenzielle TonB-Box, die andeutet, dass es in der TonB-abh&auml;ngigen Phase des Prozesses Bakterium Infektion beteiligt ist.

FepA - und TonB-abh&auml;ngigen Bakteriophage H8: Rezeptor und genomischen Sequenz.

H8 &egrave; derivato da un insieme di sierotipo di Salmonella enterica Enteritidis batteriofago. La morfologia e la struttura genomic strettamente assomigliano a quelle del batteriofago T5 della famiglia Siphoviridae. H8 infetti sierotipi enterica di S. Enteritidis e Typhimurium ed Escherichia coli per adsorbimento iniziale alla proteina di membrana esterna FepA. Ferrico enterobactina inibito H8 associazione di e. coli FepA (concentrazione di inibizione del 50%, 98 nM), e altri recettori catecholate ferrico (Fiu, Cir e ferro) non hanno partecipato ad adsorbimento dei fagi. H8 infezione era TonB dipendente, ma mutazioni exbB Salmonella o Escherichia coli non hanno impedito l&#39;infezione; solo exbB tolQ o exbB tolR doppia mutanti erano resistenti a H8. Esperimenti con eliminazione e sostituzione mutanti hanno mostrato che l&#39;interazione recettore-fago prima comporta residui distribuiti sulla superficie esterna della proteina e quindi si restringe per la stessa carica (R316) o aromatici residui (Y260) che partecipano all&#39;associazione e trasporto di enterobactina ferrico e colicins B e D. Questi dati razionalizzare la multifunzionalit&agrave; della FepA: ligandi tossici come batteriocine e dei fagi penetrare la membrana esterna da parasitizing residui in FepA che sono adattati per il trasporto del legante naturale, enterobactina ferrico. Le determinazioni di sequenza del DNA ha rivelato il genoma completo H8 di 104,4 kb. Un totale di 120 dei suoi 143 predetto open reading frame (ORF) erano omologhi di ORFS in T5, a un livello di somiglianza di identit&agrave; e 89% 84%. Come T5, i geni strutturali H8 cluster sul cromosoma secondo la loro funzione nel ciclo di vita dei fagi. Il genoma T5 contiene un&#39;ampia sezione di DNA che pu&ograve; essere cancellato e che &egrave; assente in H8: rispetto al T5, H8 contiene una delezione di 9.000-bp della regione precoce del suo cromosoma e nove prodotti potenzialmente unico gene. Analisi delle sequenze di proteine coda dei fagi della stessa famiglia che ha mostrato rispetto pb5 (Oad) di T5 e ore di BF23, FepA-binding protein (Rbp) di H8 contiene residui di acido e aromatici unici. Queste catene laterali possono promuovere associazione a base e aromatici residui FepA che normalmente funzionano nell&#39;adsorbimento di Enterobactina ferrico. Inoltre, una proteina di coda H8 predetta ha mostrato ampia identit&agrave; e somiglianza a pb2 del T5, suggerendo che essa funziona anche nella formazione dei pori attraverso la busta delle cellule. La regione variabile di questa proteina contiene un potenziale box TonB, intimating che partecipa nella fase del processo di infezione dei fagi TonB-dipendente.

Batteriofago FepA - e TonB-dipendente H8: associazione del recettore e sequenza genomica.

H8 &#x30B5;&#x30EB;&#x30E2;&#x30CD;&#x30E9;&#x9D8F;&#x5375;&#x8840;&#x6E05;&#x578B;&#x8178;&#x708E;&#x30D0;&#x30AF;&#x30C6;&#x30EA;&#x30AA;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x306E;&#x30B3;&#x30EC;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x304B;&#x3089;&#x6D3E;&#x751F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5F62;&#x614B;&#x3068;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x69CB;&#x9020;&#x306F;&#x5BC6;&#x63A5;&#x306B;&#x30D0;&#x30AF;&#x30C6;&#x30EA;&#x30AA;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8; T5 &#x306E;&#x5BB6;&#x65CF; Siphoviridae &#x306E;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x306B;&#x4F3C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;H8 S. &#x9D8F;&#x5375;&#x8840;&#x6E05;&#x578B;&#x8178;&#x708E;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30B5;&#x30EB;&#x30E2;&#x30CD;&#x30E9;&#x83CC;&#x3084;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x5916;&#x819C;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; FepA &#x521D;&#x671F;&#x5438;&#x7740;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x611F;&#x67D3;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x9244; enterobactin &#x963B;&#x5BB3; H8 &#x306B;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3059;&#x308B;&#x5927;&#x8178;&#x83CC; FepA (50% &#x963B;&#x5BB3;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x3001;98 nM)&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x4ED6;&#x306E;&#x9244; catecholate &#x306E;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53; &#xFF08;Fiu&#x3001;Cir&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x9244;) &#x30D0;&#x30AF;&#x30C6;&#x30EA;&#x30AA;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x5438;&#x7740;&#x306B;&#x53C2;&#x52A0;&#x3057;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;H8 &#x611F;&#x67D3;&#x30C8;&#x30F3;&#x30D6;&#x5CF6;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3001;&#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x304C;&#x3001;&#x30B5;&#x30EB;&#x30E2;&#x30CD;&#x30E9;&#x83CC;&#x3084;&#x5927;&#x8178;&#x83CC; exbB &#x5909;&#x7570;&#x306F;&#x611F;&#x67D3;&#x75C7;&#x3092;&#x4E88;&#x9632;&#x3057;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;;&#x306E;&#x307F; exbB tolQ &#x307E;&#x305F;&#x306F; exbB tolR &#x306E;&#x4E8C;&#x91CD;&#x5909;&#x7570; H8 &#x306B;&#x8010;&#x6027;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;.&#x6700;&#x521D;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x5916;&#x5074;&#x8868;&#x9762;&#x4E0A;&#x306B;&#x5206;&#x6563;&#x6B8B;&#x57FA;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x3057;&#x3001;&#x540C;&#x3058;&#x5145;&#x96FB; (R316) &#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x3068;&#x9244;&#x306E; enterobactin &#x3068; colicins B &#x304A;&#x3088;&#x3073; D &#x306E;&#x8F38;&#x9001;&#x306B;&#x53C2;&#x52A0; &#xFF08;Y260&#xFF09; &#x6B8B;&#x57FA;&#x306E;&#x82B3;&#x9999;&#x306B;&#x72ED;&#x304F;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;-&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x5B9F;&#x9A13;&#x3092;&#x524A;&#x9664;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x7F6E;&#x63DB;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x5C5E;&#x591A;&#x9762;&#x7684;&#x5408;&#x7406;&#x5316;: &#x30D0;&#x30AF;&#x30C6;&#x30EA;&#x30AA;&#x30B7;&#x30F3;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30D0;&#x30AF;&#x30C6;&#x30EA;&#x30AA;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x5929;&#x7136;&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x3001;&#x9244; enterobactin &#x306E;&#x8F38;&#x9001;&#x306B;&#x9069;&#x5FDC;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x6B8B;&#x57FA;&#x306E; FepA &#x306E;&#x5BC4;&#x751F;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x5916;&#x819C;&#x3092;&#x8CAB;&#x901A;&#x3059;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x6709;&#x6BD2;&#x914D;&#x4F4D;&#x5B50;&#x3002;DNA &#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x306E;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x306F; 104.4 kb &#x306E;&#x5B8C;&#x5168;&#x306A; H8 &#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x305D;&#x306E; 143 &#x306E; 120 &#x306E;&#x5408;&#x8A08;&#x958B;&#x3044;&#x305F;&#x30EA;&#x30FC;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0; &#x30FB; &#x30D5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30E0; (ORFS) &#x76F8;&#x540C; ORFS T5 &#x306F;&#x3001;84 &#xFF05; &#x306E;&#x30A2;&#x30A4;&#x30C7;&#x30F3;&#x30C6;&#x30A3;&#x30C6;&#x30A3;&#x3068; 89% &#x306E;&#x985E;&#x4F3C;&#x6027;&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3068;&#x4E88;&#x6E2C;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;T5 &#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x306F;&#x30D0;&#x30AF;&#x30C6;&#x30EA;&#x30AA;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x306E;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D5; &#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x3067;&#x305D;&#x306E;&#x95A2;&#x6570;&#x306B;&#x5F93;&#x3063;&#x3066;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x4E0A; H8 &#x69CB;&#x9020;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x5316;&#x3002;T5 &#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x306B;&#x306F; DNA &#x3092;&#x524A;&#x9664;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x304C;&#x6B20;&#x3051;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x306E;&#x5927;&#x898F;&#x6A21;&#x306A;&#x30BB;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3067; H8: T5 &#x306B;&#x6BD4;&#x3079;&#x308B;&#x3068;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x3068; 9 &#x3064;&#x306E;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x306E;&#x3042;&#x308B;&#x30E6;&#x30CB;&#x30FC;&#x30AF;&#x306A;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x7523;&#x7269;&#x306E;&#x65E9;&#x3044;&#x5730;&#x57DF;&#x3067; 9,000 bp &#x524A;&#x9664;&#x306B;&#x306F; h8 &#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x540C;&#x3058;&#x5BB6;&#x65CF;&#x306E;&#x4E2D;&#x306B;&#x611F;&#x67D3;&#x3059;&#x308B;&#x30D0;&#x30AF;&#x30C6;&#x30EA;&#x30AA;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x306E;&#x5C3E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x89E3;&#x6790; pb5 &#x76F8;&#x5BFE;&#x7684;&#x306A;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F; &#xFF08;Oad&#xFF09; T5 &#x3068; BF23 &#x6642;&#x9593;&#x306E;&#x30E6;&#x30CB;&#x30FC;&#x30AF;&#x306A;&#x9178;&#x6027;&#x3068;&#x82B3;&#x9999;&#x65CF;&#x6B8B;&#x57FA;&#x306B;&#x306F; H8 &#x306E; FepA &#x7D50;&#x5408;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; (Rbp) &#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x5074;&#x9396;&#x9244; enterobactin &#x306E;&#x5438;&#x7740;&#x3067;&#x306F;&#x6B63;&#x5E38;&#x306B;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3059;&#x308B; FepA &#x306E;&#x57FA;&#x672C;&#x7684;&#x306A;&#x82B3;&#x9999;&#x65CF;&#x306E;&#x6B8B;&#x7559;&#x3078;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3059;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x4E88;&#x6E2C;&#x3055;&#x308C;&#x305F; H8 &#x5C3E;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306F;&#x5E83;&#x7BC4;&#x306A;&#x30A2;&#x30A4;&#x30C7;&#x30F3;&#x30C6;&#x30A3;&#x30C6;&#x30A3;&#x3068;&#x305D;&#x308C;&#x3082;&#x7D30;&#x5B54;&#x5F62;&#x6210;&#x7D30;&#x80DE;&#x30A8;&#x30F3;&#x30D9;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D7;&#x3092;&#x901A;&#x3058;&#x3066;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x985E;&#x4F3C; T5&#x3001;pb2 &#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x53EF;&#x5909;&#x9818;&#x57DF;&#x306B;&#x306F; intimating &#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x611F;&#x67D3;&#x904E;&#x7A0B;&#x306E;&#x30C8;&#x30F3;&#x30D6;&#x5CF6;&#x4F9D;&#x5B58;&#x578B;&#x306E;&#x6BB5;&#x968E;&#x3067;&#x53C2;&#x52A0;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306F;&#x3001;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306A;&#x30C8;&#x30F3;&#x30D6;&#x5CF6;&#x30DC;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

FepA-&#x30C8;&#x30F3;&#x30D6;&#x5CF6;&#x4F9D;&#x5B58;&#x30D0;&#x30AF;&#x30C6;&#x30EA;&#x30AA;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8; H8: &#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x7D50;&#x5408;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0; &#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x3002;

H8 &#xC0B4; &#xBAA8; &#xB12C; &#xB77C; enterica serotype Enteritidis &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC624;&#xD30C;&#xC9C0;&#xC758; &#xCEEC;&#xB809;&#xC158;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD30C;&#xC0DD; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xAC83;&#xC758; &#xD615;&#xD0DC;&#xC640; &#xAC8C;&#xB188; &#xAD6C;&#xC870; &#xAC00;&#xC871; Siphoviridae &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC624;&#xD30C;&#xC9C0; t 5&#xC758; &#xC720;&#xC0AC;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. H8 &#xC678;&#xBD80; &#xB9C9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; FepA &#xCD08;&#xAE30; &#xD761;&#xCC29; &#xD558; &#xC5EC; S. enterica serotypes Enteritidis &#xBC0F; &#xD2F0; &#xBC0F; &#xBCD1;&#xC6D0; &#xC131; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0;&#xC5D0; &#xAC10;&#xC5FC;. &#xCCA0; enterobactin &#xC800;&#xD574; H8 &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC744; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0; FepA (50% &#xC800;&#xD574; &#xB18D;&#xB3C4;, 98 nM), &#xB2E4;&#xB978; &#xCCA0; catecholate &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; (Fiu, Cir, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xCCA0;) &#xC0B4; &#xADE0; &#xC18C; &#xD761;&#xCC29;&#xC5D0; &#xCC38;&#xC5EC; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4;. H8 &#xAC10;&#xC5FC; TonB &#xC885;&#xC18D;, &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; exbB &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0; &#xC774;&#xB098; &#xC0B4; &#xBAA8; &#xB12C; &#xB77C; &#xAC10;&#xC5FC;; &#xB9C9;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4; exbB tolQ &#xB610;&#xB294; exbB tolR &#xC774;&#xC911; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; h8&#xC5D0; &#xC800;&#xD56D; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC0AD;&#xC81C; &#xBC0F; &#xB300;&#xCCB4; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xC0B4; &#xADE0; &#xC18C; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xBA3C;&#xC800; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC678;&#xBD80; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; &#xBD84;&#xC0B0; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xACE0; &#xB2E4;&#xC74C; &#xB3D9;&#xC77C;&#xD55C; &#xCCAD;&#xAD6C; (R316) &#xB610;&#xB294; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xBC0F; &#xCCA0; enterobactin &#xBC0F; B&#xC640; D. colicins&#xC758; &#xC804;&#xC1A1;&#xC5D0; &#xCC38;&#xC5EC; &#xD558;&#xB294; &#xC544;&#xB85C;&#xB9C8; (Y260) &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC744; &#xC881;&#xD799;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBCF4;&#xC600;&#xB2E4; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xB294; FepA &#xB300;&#xD3ED;&#xC744; &#xD569;&#xB9AC;&#xD654;: &#xB3C5;&#xC131; ligands bacteriocins &#xBC0F; &#xC0B4; &#xADE0; &#xC18C; &#xC790;&#xC5F0; &#xB9AC;&#xAC04;&#xB4DC; &#xCCA0; enterobactin &#xC804;&#xC1A1;&#xC5D0; &#xC801;&#xC751; &#xD558;&#xB294; Fepa&#xC5D0;&#xC11C; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC744; parasitizing &#xD558; &#xC5EC; &#xBC14;&#xAE65; &#xB9C9;&#xC5D0; &#xCE68;&#xD22C; &#xD558;&#xB294; &#xCC98;&#xB7FC;. DNA &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xACB0;&#xC815; 104.4 kb&#xC758; &#xC644;&#xC804; &#xD55C; H8 &#xAC8C;&#xB188;&#xC744; &#xACF5;&#xAC1C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xCD1D; 120&#xC758; 143 &#xC5F4;&#xB824;&#xC788;&#xB294; &#xB3C5;&#xC11C; &#xD504;&#xB808;&#xC784; (ORFS) &#xD588;&#xB2E4; &#xB3D9;&#xC885; ORFS T5, 84% &#xC815;&#xCCB4;&#xC131;&#xACFC; 89% &#xC720;&#xC0AC;&#xC131; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC608;&#xCE21; &#xD588;&#xB2E4;. T 5&#xB85C; H8 &#xAD6C;&#xC870; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC5D0; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xC5FC;&#xC0C9;&#xCCB4; &#xC0B4; &#xADE0; &#xC18C; &#xB77C;&#xC774;&#xD504; &#xC0AC;&#xC774;&#xD074; &#xD074;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xD130;&#xB9C1;. T5 &#xAC8C;&#xB188; DNA &#xC0AD;&#xC81C; &#xD558; &#xACE0; &#xACB0; &#xC11D;&#xC758; &#xD070; &#xC139;&#xC158;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; h8&#xC5D0;&#xC11C;: t 5&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574;, H8 &#xD3EC;&#xD568;&#xC758; &#xC5FC;&#xC0C9;&#xCCB4;&#xC640; 9 &#xAC1C;&#xC758; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB3C5;&#xD2B9;&#xD55C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC81C;&#xD488;&#xC758; &#xCD08;&#xAE30; &#xC601;&#xC5ED;&#xC5D0;&#xC11C; 9000 bp &#xC0AD;&#xC81C;. &#xAC19;&#xC740; &#xAC00;&#xC871; &#xD398;&#xC774;&#xC9C0;&#xC758; &#xAF2C;&#xB9AC; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xBD84;&#xC11D; pb5&#xC5D0; &#xC0C1;&#xB300;&#xC801;&#xC778; &#xAC83;&#xC73C;&#xB85C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0AC;&#xB2E4; (Oad)&#xC758; t 5&#xC640; bf23&#xC758; &#xC2DC;&#xAC04;, H8 FepA &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (Rbp) &#xD3EC;&#xD568; &#xB3C5;&#xD2B9;&#xD55C; &#xC0B0; &#xC131; &#xBC0F; &#xD5A5;&#xAE30;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xCE21;&#xBA74; &#xCCB4;&#xC778; &#xCCA0; enterobactin&#xC758; &#xD761;&#xCC29;&#xC5D0; &#xC815;&#xC0C1;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC791;&#xB3D9; &#xD558;&#xB294; Fepa&#xC5D0; &#xAE30;&#xBCF8; &#xD558; &#xACE0; &#xD5A5;&#xAE30;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC744; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC744; &#xD64D;&#xBCF4; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC608;&#xCE21;&#xB41C; H8 &#xAF2C;&#xB9AC; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD55C; &#xC815;&#xCCB4;&#xC131;&#xACFC; &#xC720;&#xC0AC;&#xC131; T5, pb2 &#xC140; &#xBD09;&#xD22C;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xAE30; &#xACF5; &#xD615;&#xC131;&#xC5D0;&#xB3C4; &#xC791;&#xB3D9; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;&#xC744; &#xC81C;&#xC548; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xBCC0;&#xC218; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xC758; &#xC554;&#xC2DC; &#xC0B4; &#xADE0; &#xC18C; &#xAC10;&#xC5FC; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xC758; TonB &#xC885;&#xC18D; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC5D0; &#xCC38;&#xC5EC; &#xD558;&#xB294; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778; TonB &#xC0C1;&#xC790;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xB418;&#xC5B4; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

FepA &#xBC0F; TonB &#xC885;&#xC18D; &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC624;&#xD30C;&#xC9C0; H8: &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xBC0F; &#xAC8C;&#xB188; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;.

H8 se deriva de una colecci&oacute;n de Salmonella enterica serotipo Enteritidis bacteri&oacute;fago. Su morfolog&iacute;a y estructura gen&oacute;mica asemejan las de bacteri&oacute;fagos T5 de la familia Siphoviridae. H8 infectados S. enterica serotipos Enteritidis y Typhimurium y Escherichia coli por adsorci&oacute;n inicial a la prote&iacute;na de membrana externa FepA. Enterobactina f&eacute;rrico inhibida H8 vinculante a FepA de e. coli (50% de concentraci&oacute;n de inhibici&oacute;n, 98 nM), y otros receptores de catecholate f&eacute;rrico (Fiu, Cir y hierro) no particip&oacute; en la adsorci&oacute;n del fago. H8 infecci&oacute;n era TonB dependiente, pero exbB mutaciones en Salmonella o e. coli no previno la infecci&oacute;n; s&oacute;lo exbB tolQ o exbB tolR dobles mutantes eran resistentes a H8. Experimentos con mutantes de deleci&oacute;n y sustituci&oacute;n demostraron que la interacci&oacute;n del receptor-Fago consiste primero en residuos distribuidos sobre la superficie externa de la prote&iacute;na y luego se estrecha a la misma carga (R316) o arom&aacute;ticos residuos (Y260) que participan en el enlace y transporte de enterobactina f&eacute;rrico y colicins B y D. Estos datos racionalizaci&oacute;n la multifuncionalidad de FepA: ligandos t&oacute;xicos como bacteriocinas y Fago penetran la membrana externa por parasitando residuos en FepA que est&aacute;n adaptados para el transporte del ligando natural, enterobactina f&eacute;rrico. Las determinaciones de secuencia de ADN revelaron el genoma completo de H8 de 104,4 kb. Un total de 120 de sus 143 predijo marcos de lectura abierta (ORFS) fueron hom&oacute;logos a ORFS en T5, a nivel de similitud de identidad y el 89% de 84%. Como en T5, los genes estructurales de H8 agrupados en el cromosoma seg&uacute;n su funci&oacute;n en el ciclo de vida del fago. El genoma de T5 contiene una gran parte del ADN que puede eliminarse y que est&aacute; ausente en H8: Comparado con T5, H8 contiene una canceladura de 9.000-bp en la regi&oacute;n temprana de su cromosoma y nueve productos potencialmente &uacute;nico gene. An&aacute;lisis de la secuencia de las prote&iacute;nas de la cola de fagos en la misma familia que demostraron en relaci&oacute;n con pb5 (Oad) de T5 y horas de BF23, la prote&iacute;na de uni&oacute;n a FepA (Rbp) de H8 contiene residuos &aacute;cidos y arom&aacute;ticos &uacute;nicos. Estas cadenas laterales pueden promover el enlace a residuos b&aacute;sicos y arom&aacute;ticos en FepA que normalmente funcionan en la adsorci&oacute;n de enterobactina f&eacute;rrico. Adem&aacute;s, una prote&iacute;na de cola H8 predicha demostr&oacute; amplia identidad y semejanza a pb2 de T5, sugiriendo que tambi&eacute;n funciona en la formaci&oacute;n de poros a trav&eacute;s de la envoltura celular. La regi&oacute;n variable de esta prote&iacute;na contiene un cuadro de TonB potencial, entender que participa en la etapa de TonB dependiente del proceso de infecci&oacute;n del fago.

Joseph E. Klebba

Department of Cell Biology and Anatomy

University of Arizona (UOA)

Preparation of Drosophila S2 cells for Light Microscopy