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Single Particle Electron Microscopy Reconstruction of the Exosome Complex Using the Random Conical Tilt Method

Single particle electron microscopy (EM) reconstruction has recently become a popular tool to get the three-dimensional (3D) structure of large ...

Yale University

&#xC778;&#xAC04;&#xC758; coactosin &#xAC19;&#xC740; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (CLP) coactosin, filamentous (F)&#xC640; &#xB192;&#xC740; homology &#xACF5;&#xC720;-&#xB9D0;&#xB77C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;, 5LO &#xBC0F; F &#xB9D0;&#xB77C;&#xC640; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD558; &#xACE0;. &#xC885;&#xC591; &#xD56D; &#xC6D0;&#xC73C;&#xB85C; CLP &#xC885;&#xC591; &#xC870;&#xC9C1; &#xC138;&#xD3EC; &#xB610;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC; &#xB77C;&#xC778;&#xC5D0; overexpressed &#xBC0F; &#xC778;&#xCF54;&#xB529;&#xB41C; epitopes &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; &#xCCB4;&#xC561; &#xC131; &#xBA74;&#xC5ED; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC778;&#xC2DD; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xB2E4;. &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xAE30;&#xB2A5;&#xACFC; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC758; &#xB354; &#xB098;&#xC740; &#xC774;&#xD574;&#xB97C; &#xC5BB;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0;&#xC5D0; &#xD45C;&#xD604; &#xB41C; CLP&#xC758; &#xACB0;&#xC815; &#xAD6C;&#xC870; 1.9 A &#xD574;&#xC0C1;&#xB3C4;&#xB85C; &#xACB0;&#xC815; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAD6C;&#xC870; &#xD3EC;&#xD568;, &#xC2DC;&#xD2B8;&#xC758; &#xC591;&#xCABD;&#xC5D0; &#xB450; &#xAC1C;&#xC758; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xBE61; &#xBE61; &#xC18C;&#xC218; &#xCF54;&#xC5B4;&#xB85C; &#xB458;&#xB7EC;&#xC2F8;&#xC778; &#xC911;&#xC559; &#xBCA0;&#xD0C0;-&#xC2DC;&#xD2B8;&#xB97C; &#xAC16;&#xCD94;&#xACE0; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. CLP depolymerizing &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; superfamily &#xB9D0;&#xB77C;&#xC5D0; &#xC18D;&#xD558;&#xACE0; &#xD6A8; &#xBAA8; cofilin &#xBC0F; actophilin&#xC640; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xAD6C;&#xC870; &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xBC14;&#xD0D5;&#xC73C;&#xB85C;, CLP F &#xB9D0;&#xB77C;&#xB85C; &#xC815;&#xD655;&#xD55C; &#xB3D9;&#xC77C;&#xD55C; &#xBC18;&#xBCF5; &#xAC70;&#xB9AC;&#xC640; crystallographic b &#xCD95; &#xC911;&#xD569;&#xCCB4; &#xD615;&#xC131; &#xAD00;&#xCC30; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. CLP &#xD3F4;&#xB9AC;&#xBA38; &#xBC0F; F &#xB9D0;&#xB77C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xBAA8;&#xB378; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xC81C;&#xC548; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

1.9 A &#xD574;&#xC0C1;&#xB3C4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; coactosin &#xAC19;&#xC740; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xACB0;&#xC815; &#xAD6C;&#xC870;.

Coactosin-como la prote&iacute;na humana (CLP) comparte homolog&iacute;a alta con coactosin, un filamentosa (F)-actina binding protein e interact&uacute;a con 5LO y F-actina. Como un ant&iacute;geno tumoral, CLP se sobreexpresa en c&eacute;lulas del tejido del tumor o l&iacute;neas celulares y los epitopos codificados pueden ser reconocidos por el sistema inmunol&oacute;gico celular y humoral. Para obtener una mejor comprensi&oacute;n de sus diversas funciones y las interacciones con prote&iacute;nas relacionadas, se ha determinado la estructura cristalina de CLP expresado en Escherichia coli que 1.9 una resoluci&oacute;n. La estructura cuenta con una beta-hoja central rodeada por h&eacute;lices, con dos corazones hidrof&oacute;bicos muy ajustados a cada lado de la hoja. CLP pertenece a la superfamilia de prote&iacute;nas de depolymerizing de actina y es similar a la levadura cofilin y actophilin. Basado en el an&aacute;lisis estructural, observamos que el CLP forma un pol&iacute;mero en el eje b cristalogr&aacute;fico con la misma distancia repetici&oacute;n exacta como F-actina. Por lo tanto se ha propuesto un modelo para el pol&iacute;mero CLP y Uni&oacute;n de la F-actina.

Estructura cristalina de la prote&iacute;na humana coactosin-como en 1,9 una resoluci&oacute;n.

&#x4EBA;&#x9593;&#x306E; coactosin &#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA; &#xFF08;CLP&#xFF09; &#x7CF8;&#x72B6; (F) coactosin &#x3068;&#x9AD8;&#x3044;&#x76F8;&#x540C;&#x6027;&#x3092;&#x5171;&#x6709;-&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x7D50;&#x5408;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3068; 5LO &#x3068; F &#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x5BFE;&#x8A71;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x816B;&#x760D;&#x6297;&#x539F;&#x3068;&#x3057;&#x3066; CLP &#x306E;&#x904E;&#x5270;&#x306B;&#x816B;&#x760D;&#x7D44;&#x7E54;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#x682A;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x767A;&#x73FE;&#x3057;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x4F53;&#x6DB2;&#x6027;&#x514D;&#x75AB;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30A8;&#x30D4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30D7;&#x3092;&#x8A8D;&#x8B58;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x69D8;&#x3005; &#x306A;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3068;&#x306E;&#x95A2;&#x9023;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3068;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x3088;&#x308A;&#x826F;&#x3044;&#x7406;&#x89E3;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x7D50;&#x6676;&#x69CB;&#x9020;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x3067;&#x767A;&#x73FE; CLP &#x306E; 1.9 &Aring; &#x5206;&#x89E3;&#x80FD;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x69CB;&#x9020;&#x304C;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x306E; &beta; &#x30B7;&#x30FC;&#x30C8;&#x3068;&#x30B7;&#x30FC;&#x30C8;&#x306E;&#x5404;&#x5074;&#x306B; 2 &#x3064;&#x306E;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x30BF;&#x30A4;&#x30C8;&#x306A;&#x758E;&#x6C34;&#x6027;&#x30B3;&#x30A2;&#x306E;&#x30D8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x306B;&#x56F2;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;CLP &#x306F;&#x3001;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30B9;&#x30FC;&#x30D1;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC;&#x91CD;&#x5408;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x306B;&#x5C5E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3057;&#x3001;&#x9175;&#x6BCD;&#x30B3;&#x30D5;&#x30A3;&#x30EA;&#x30F3;&#x3068; actophilin &#x306B;&#x4F3C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x69CB;&#x9020;&#x89E3;&#x6790;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x304F;&#x3001;CLP &#x7D50;&#x6676; b &#x8EF8; F &#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6B63;&#x78BA;&#x306A;&#x540C;&#x3058;&#x7E70;&#x308A;&#x8FD4;&#x3057;&#x306E;&#x8DDD;&#x96E2;&#x306B;&#x6CBF;&#x3063;&#x3066;&#x30DD;&#x30EA;&#x30DE;&#x30FC;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3002;CLP &#x30DD;&#x30EA;&#x30DE;&#x30FC;&#x3068; F &#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x7D50;&#x5408;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306F;&#x305D;&#x3053;&#x3067;&#x63D0;&#x6848;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

1.9 &Aring; &#x5206;&#x89E3;&#x80FD;&#x306E;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E; coactosin &#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x7D50;&#x6676;&#x69CB;&#x9020;&#x3002;

&#x4EBA;&#x7C7B; coactosin &#x6837;&#x86CB;&#x767D; &#xFF08;&#x4E2D;&#x7535;&#xFF09; coactosin&#xFF0C;&#x4E1D;&#x72B6;&#x7684; (F) &#x4E0E;&#x5171;&#x4EAB;&#x9AD8;&#x540C;&#x6E90;-&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x7ED3;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x4E0E; 5LO &#x4EE5;&#x53CA; F-&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x8FDB;&#x884C;&#x4EA4;&#x4E92;&#x3002;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x4E00;&#x79CD;&#x80BF;&#x7624;&#x6297;&#x539F;&#x4E2D;, &#x7535;&#x5728;&#x80BF;&#x7624;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6216;&#x7EC6;&#x80DE;&#x682A;&#x6297;&#x539F;&#x548C;&#x7F16;&#x7801;&#x7684;&#x6297;&#x539F;&#x8868;&#x4F4D;&#x53EF;&#x4EE5;&#x8BC6;&#x522B;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x514D;&#x75AB;&#x548C;&#x4F53;&#x6DB2;&#x514D;&#x75AB;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x3002;&#x82E5;&#x8981;&#x83B7;&#x5F97;&#x66F4;&#x597D;&#x5730;&#x4E86;&#x89E3;&#x5176;&#x5404;&#x9879;&#x804C;&#x80FD;&#x53CA;&#x4E0E;&#x76F8;&#x5173;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x4E2D;, &#x7535;&#x5728;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x4E2D;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x6676;&#x4F53;&#x7ED3;&#x6784;&#x5DF2;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E3A; 1.9 A &#x51B3;&#x8BAE;&#x3002;&#x7ED3;&#x6784;&#x7279;&#x70B9;&#x662F;&#x4E2D;&#x592E;&#x7684; beta &#x677F;&#x5305;&#x56F4;&#x87BA;&#x65CB;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x5DE5;&#x4F5C;&#x8868;&#x7684;&#x6BCF;&#x4E00;&#x4FA7;&#x7684;&#x4E24;&#x4E2A;&#x5F88;&#x7D27;&#x758F;&#x6C34;&#x5185;&#x6838;&#x3002;&#x4E2D;&#x7535;&#x5C5E;&#x4E8E;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x89E3;&#x805A;&#x86CB;&#x767D;&#x5BB6;&#x65CF;&#xFF0C;&#x662F;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x4E8E;&#x9175;&#x6BCD; cofilin &#x548C; actophilin&#x3002;&#x57FA;&#x4E8E;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x5206;&#x6790;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x4E2D;&#x7535;&#x5F62;&#x5F0F;&#x6CBF;&#x7684;&#x8DDD;&#x79BB;&#x5B8C;&#x5168;&#x76F8;&#x540C;&#x7684;&#x91CD;&#x590D;&#x8DDD;&#x79BB; F-&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x6676;&#x4F53;&#x5B66; b &#x8F74;&#x7684;&#x805A;&#x5408;&#x7269;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#x5DF2;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x4E2D;&#x7535;&#x805A;&#x5408;&#x7269;&#x548C; F-&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x6A21;&#x578B;&#x3002;

1.9 A &#x5206;&#x8FA8;&#x7387;&#x7684;&#x4EBA;&#x7C7B; coactosin &#x6837;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x6676;&#x4F53;&#x7ED3;&#x6784;&#x3002;

Human coactosin-like protein (CLP) shares high homology with coactosin, a filamentous (F)-actin binding protein, and interacts with 5LO and F-actin. As a tumor antigen, CLP is overexpressed in tumor tissue cells or cell lines, and the encoded epitopes can be recognized by cellular and humoral immune systems. To gain a better understanding of its various functions and interactions with related proteins, the crystal structure of CLP expressed in Escherichia coli has been determined to 1.9 A resolution. The structure features a central beta-sheet surrounded by helices, with two very tight hydrophobic cores on each side of the sheet. CLP belongs to the actin depolymerizing protein superfamily, and is similar to yeast cofilin and actophilin. Based on our structural analysis, we observed that CLP forms a polymer along the crystallographic b axis with the exact same repeat distance as F-actin. A model for the CLP polymer and F-actin binding has therefore been proposed.

Crystal structure of human coactosin-like protein at 1.9 A resolution.

Coactosin-comme la prot&eacute;ine humaine (CLP) partage une forte homologie avec coactosin, un filamenteux (F)-actin binding protein et interagit avec 5LO et l&#39;actine F. Comme un antig&egrave;ne tumeur, CLP est surexprim&eacute; dans les cellules de tissu de tumeur ou de lign&eacute;es cellulaires et les &eacute;pitopes cod&eacute;s peuvent &ecirc;tre reconnus par le syst&egrave;me immunitaire cellulaire et humoral. Pour acqu&eacute;rir une meilleure compr&eacute;hension de ses diverses fonctions et interactions avec les prot&eacute;ines, la structure cristalline du CLP exprim&eacute; chez Escherichia coli a &eacute;t&eacute; d&eacute;termin&eacute;e &agrave; une r&eacute;solution de 1,9. La structure dispose d&#39;une b&ecirc;ta-feuille centrale entour&eacute;e d&#39;h&eacute;lices, avec deux c&oelig;urs hydrophobes tr&egrave;s serr&eacute;s de chaque c&ocirc;t&eacute; de la feuille. CLP appartient &agrave; l&#39;actine d&eacute;polym&eacute;risation superfamille des prot&eacute;ines et est semblable &agrave; la levure cofilin et actophilin. D&#39;apr&egrave;s notre analyse structurale, nous avons observ&eacute; que le CLP forme un polym&egrave;re le long de l&#39;axe cristallographique b avec la distance exacte de r&eacute;p&eacute;tition m&ecirc;me comme l&#39;actine F. Un mod&egrave;le pour le polym&egrave;re CLP et la liaison de l&#39;actine F a donc &eacute;t&eacute; propos&eacute;.

Structure cristalline de la prot&eacute;ine humaine coactosin &agrave; 1.9 r&eacute;solution.

Kristallstruktur des menschlichen coactosin-&#xE4;hnliches Protein mit 1,9 A Aufl&#xF6;sung.

Coactosin-come proteina umana (CLP) condivide elevata omologia con coactosin, un filamentose (F)-actin binding protein e interagisce con 5LO e F-actina. Come un antigene tumorale, CLP &egrave; overexpressed in cellule del tessuto tumorale o linee cellulari e gli epitopi codificati possono essere riconosciuti dal sistema immunitario umorale e cellulare. Per acquisire una migliore comprensione delle sue diverse funzioni e le interazioni con proteine correlate, &egrave; stata determinata la struttura di cristallo del CLP espresso in Escherichia coli a risoluzione 1,9. La struttura dispone di un beta-foglio centrale circondato da eliche, con due core idrofobici molto stretti su ogni lato del foglio. CLP appartiene l&#39;actina depolymerizing superfamiglia di proteine ed &egrave; simile al lievito cofilin e actophilin. Basato sulla nostra analisi strutturali, abbiamo osservato che CLP forma un polimero lungo l&#39;asse cristallografico b con la stessa distanza di ripetizione esatta come F-actina. Pertanto &egrave; stato proposto un modello per il polimero CLP e associazione di F-actina.

Struttura di cristallo della proteina umana coactosin-like a risoluzione 1,9.

&#x4EBA;&#x7C7B; coactosin &#x6837;&#x86CB;&#x767D; &#xFF08;&#x4E2D;&#x7535;&#xFF09; &#x6240;&#x5C5E;&#x7684;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x7ED3;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x89E3;&#x805A;&#x56E0;&#x5B50; (ADF) &#x5BB6;&#x5EAD;&#x3002;&#x4E2D;&#x7535;&#x4E0E; 5-&#x8102;&#x6C27;&#x5408;&#x9176; (5LO) &#x548C;&#x4E1D;&#x72B6;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D; (F-&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;) &#x901A;&#x8FC7;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7AD9;&#x70B9;&#x8FDB;&#x884C;&#x4EA4;&#x4E92;&#x3002;&#x5168;&#x957F; 142 &#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x7684;&#x4E2D;&#x7535;&#x7EC4;&#x6210;&#x4E86;&#x6297;&#x539F;&#x5728;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x4E2D;&#x3002;&#x4E2D;&#x7535;&#x6676;&#x4F53;&#x83B7;&#x5F97;&#x4F7F;&#x7528;&#x786B;&#x9178;&#x94F5;&#x6C89;&#x6DC0;&#x5728; ph &#x503C; 8.5 &#x4F5C;&#x4E3A;&#x6302;&#x653E;&#x84B8;&#x6C14;&#x6269;&#x6563;&#x6280;&#x672F;&#x3002;&#x884D;&#x5C04;&#x6570;&#x636E;&#x5230; 1.9 &#x4ECE;&#x5C5E;&#x4E8E;&#x7A7A;&#x95F4;&#x6676;&#x4F53;&#x6536;&#x96C6;&#x4E86;&#x4E00;&#x9879;&#x51B3;&#x8BAE;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x53C2;&#x6570;&#x7EC4; P2(1)&#xFF0C;= 25.6&#xFF0C;b = 55.2&#xFF0C;c = 37.4&#xFF0C;beta = 96.0 &#x5EA6;&#x3002;&#x6709;&#x4E0D;&#x5BF9;&#x79F0;&#x5355;&#x4F4D;&#x7684;&#x4E00;&#x5206;&#x5B50;&#x3002;

&#x7ED3;&#x6676;&#x548C;&#x4EBA;&#x7C7B; coactosin &#x6837;&#x86CB;&#x767D; &#xFF08;&#x4E2D;&#x7535;&#xFF09; &#x7684;&#x521D;&#x6B65;&#x6676;&#x4F53;&#x5B66;&#x7814;&#x7A76;&#x3002;

The human coactosin-like protein (CLP) belongs to the actin-depolymerizing factor (ADF) family of actin-binding proteins. CLP interacts with 5-lipoxygenase (5LO) and filamentous actin (F-actin) via different binding sites. The full-length CLP comprising of 142 amino acids has been overexpressed in Escherichia coli. Crystals of CLP were obtained using the hanging-drop vapour-diffusion technique with ammonium sulfate as precipitant at pH 8.5. Diffraction data to 1.9 A resolution were collected from a crystal belonging to space group P2(1), with unit-cell parameters a = 25.6, b = 55.2, c = 37.4 A, beta = 96.0 degrees. There is one molecule per asymmetric unit.

Crystallization and preliminary crystallographic studies of human coactosin-like protein (CLP).

La prot&eacute;ine humaine du type coactosin (CLP) appartient &agrave; la famille de facteur (ADF) d&eacute;polym&eacute;risation de l&#39;actine des prot&eacute;ines de liaison de l&#39;actine. CLP interagit avec la 5-lipoxyg&eacute;nase (5LO) et l&#39;actine filamenteuse (F-actine) par l&#39;interm&eacute;diaire de sites de liaison diff&eacute;rents. Le CLP pleine longueur comprenant 142 acides amin&eacute;s a &eacute;t&eacute; surexprim&eacute;e chez Escherichia coli. Cristaux de CLP ont &eacute;t&eacute; obtenues en utilisant la technique de diffusion de vapeur suspendue-d&eacute;placer au sulfate d&#39;ammonium comme pr&eacute;cipitant &agrave; pH 8,5. P2(1), du groupe de donn&eacute;es de diffraction &agrave; 1,9 r&eacute;solution ont &eacute;t&eacute; r&eacute;colt&eacute;es dans un cristal appartenant &agrave; l&#39;espace avec des param&egrave;tres de maille un = 25,6, b = 55,2, c = 37,4, b&ecirc;ta = 96,0 degr&eacute;s. Il y a une mol&eacute;cule par unit&eacute; asym&eacute;trique.

Cristallisation et des &eacute;tudes pr&eacute;liminaires cristallographiques de la prot&eacute;ine humaine ressemblant &agrave; des coactosin (CLP).

Kristallisation und vorl&#xE4;ufige kristallographische Untersuchungen der menschlichen coactosin-like protein (CLP).

La proteina umana coactosin-like (CLP) appartiene alla famiglia actina-depolymerizing factor (ADF) dell&#39;actina-binding proteins. CLP interagisce con la 5-lipossigenasi (5LO) e actina filamentosa (F-actina) tramite i siti di legame differenti. Il full-length, CLP composto 142 amminoacidi &egrave; overexpressed in Escherichia coli. Cristalli di CLP sono state ottenute utilizzando la tecnica di sospensione-goccia-diffusione del vapore con solfato di ammonio come precipitante a pH 8,5. Dati di diffrazione a 1.9 risoluzione sono stati raccolti da un cristallo appartenendo allo spazio del gruppo P2(1), con i parametri di cella unitaria un = 25,6, b = 55,2, c = 37,4, beta = 96,0 gradi. C&#39;&egrave; una molecola asimmetrica unitario.

Cristallizzazione e studi cristallografici preliminari di coactosin-come proteina umana (CLP).

&#x4EBA;&#x9593;&#x306E; coactosin &#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA; &#xFF08;CLP&#xFF09; &#x306E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x7D50;&#x5408;&#x6027;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x91CD;&#x5408;&#x56E0;&#x5B50; (ADF) &#x306E;&#x5BB6;&#x65CF;&#x306B;&#x5C5E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;CLP 5-&#x30EA;&#x30DD;&#x30AD;&#x30B7;&#x30B2;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; (5LO) &#x3068;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x7D50;&#x5408;&#x90E8;&#x4F4D;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3; &#x30D5;&#x30A3;&#x30E9;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8; &#xFF08;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;) &#x3068;&#x3084;&#x308A;&#x53D6;&#x308A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30D5;&#x30EB;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B0;&#x30B9;&#x306E; CLP 142 &#x500B;&#x306E;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x304B;&#x3089;&#x6210;&#x308B;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x3067;&#x904E;&#x5270;&#x306B;&#x767A;&#x73FE;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30CF;&#x30F3;&#x30AE;&#x30F3;&#x30B0; &#x30C9;&#x30ED;&#x30C3;&#x30D7;&#x84B8;&#x6C17;&#x62E1;&#x6563;&#x6CD5;&#x30A2;&#x30F3;&#x30E2;&#x30CB;&#x30A6;&#x30E0;&#x786B;&#x9178;&#x925B; pH 8.5 &#x3067;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066; CLP &#x306E;&#x7D50;&#x6676;&#x304C;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x56DE;&#x6298;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306B;&#x7A7A;&#x9593;&#x306B;&#x5C5E;&#x3059;&#x308B;&#x7D50;&#x6676;&#x304B;&#x3089;&#x53CE;&#x96C6;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3001;&#x89E3;&#x50CF;&#x5EA6; 1.9 &#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7; P2(1)&#x3001;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8; &#x30BB;&#x30EB;&#x306E;&#x30D1;&#x30E9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x3001;25.6&#x3001;= b 55.2, c = 37.4 = &#x306F;&#x3001;&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x7248; 96.0 &#x5EA6; =&#x3002;1 &#x3064;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x975E;&#x5BFE;&#x79F0;&#x5358;&#x4F4D;&#x3042;&#x305F;&#x308A;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

&#x7D50;&#x6676;&#x5316;&#x3068;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E; coactosin &#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA; &#xFF08;CLP&#xFF09; &#x306E;&#x4E88;&#x5099;&#x306E;&#x7D50;&#x6676;&#x5B66;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x3002;

&#xC778;&#xAC04;&#xC758; coactosin &#xAC19;&#xC740; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (CLP) &#xB9D0;&#xB77C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB9D0;&#xB77C; depolymerizing &#xC694;&#xC18C; (ADF) &#xC81C;&#xD488;&#xAD70;&#xC5D0; &#xC18D;&#xD55C;&#xB2E4;. CLP 5 lipoxygenase (5LO) &#xBC0F; filamentous &#xB9D0;&#xB77C; (F-&#xB9D0;&#xB77C;) &#xB2E4;&#xB978; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. 142 &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0;&#xC758; &#xC804;&#xCCB4; &#xAE38;&#xC774; CLP &#xAD6C;&#xC131; &#xB41C; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0;&#xC5D0; overexpressed &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xD588;&#xB2E4;. &#xD06C;&#xB9AC;&#xC2A4;&#xD0C8;&#xC758; CLP pH 8.5&#xC5D0;&#xC11C; &#xB0B4;&#xB824;&#xC9C4;&#xC73C;&#xB85C; &#xD669;&#xC0B0;&#xC73C;&#xB85C; &#xB9E4;&#xB2EC;&#xB824; &#xB4DC;&#xB86D; &#xC218;&#xC99D;&#xAE30; &#xD655;&#xC0B0; &#xAE30;&#xC220;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC5BB;&#xC740; &#xD588;&#xB2E4;. 1.9 &#xD574;&#xC0C1;&#xB3C4; &#xACF5;&#xAC04;&#xC5D0; &#xC18D;&#xD558;&#xB294; &#xD06C;&#xB9AC;&#xC2A4;&#xD0C8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC218;&#xC9D1; &#xB41C; &#xD68C;&#xC808; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xB2E8;&#xC704; &#xC140; &#xB9E4;&#xAC1C; &#xBCC0;&#xC218; P2(1), &#xADF8;&#xB8F9;&#xC744; = 25.6, b = 55.2 c = 37.4, &#xBCA0;&#xD0C0; = 96.0&#xB3C4;. &#xBE44;&#xB300;&#xCE6D; &#xB2E8;&#xC704; &#xB2F9; &#xD55C; &#xBD84;&#xC790;&#xAC00; &#xC774;&#xB2E4;.

&#xACB0;&#xC815; &#xD654;&#xC640; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; coactosin &#xAC19;&#xC740; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (CLP)&#xC758; &#xC608;&#xBE44; crystallographic &#xC5F0;&#xAD6C;.

La prote&iacute;na humana como coactosin (CLP) pertenece a la familia de factor (ADF) de actina-depolymerizing de prote&iacute;nas de uni&oacute;n a actina. CLP interact&uacute;a con la 5-lipoxigenasa (5LO) y actina filamentosa (F-actina) a trav&eacute;s de sitios de Uni&oacute;n diferentes. El largometraje CLP consta de 142 amino&aacute;cidos ha sido sobreexpresa en Escherichia coli. Cristales de CLP se obtuvieron mediante la t&eacute;cnica de la gota colgante vapor difusi&oacute;n con sulfato de amonio como precipitado a pH 8,5. Datos de difracci&oacute;n a 1.9 se recolectaron una resoluci&oacute;n de un cristal que pertenecen al espacio del grupo P2(1), con par&aacute;metros de celda unidad un = 25,6, b = 55.2, c = 37,4 A, beta = 96.0 grados. Hay una mol&eacute;cula por unidad asim&eacute;trica.

Cristalizaci&oacute;n y los estudios cristalogr&aacute;ficos preliminares de prote&iacute;na humana coactosin (CLP).

Il dominio SH3 betaPIX mouse, residui 8-63 della chinasi P21-attivato fattore di scambio, di interazione &egrave; stato caratterizzato da diffrazione a raggi x. Cristalli appartenenti al gruppo spazio P3 (2) 21 diffratte 2.0 A e la struttura &egrave; stata gradualmente dal metodo singolo-lunghezza d&#39;onda anomala diffrazione. Il dominio &egrave; un beta-barilotto compatto con una conformazione complessiva simile alla struttura generale SH3. La struttura a raggi x Mostra dominio SH3 betaPIX mouse vincolante il modo in cui gli amminoacidi caratteristico betaPIX farlo per una superficie di associazione del ligando non convenzionale. Questa disposizione fornisce una spiegazione logica per il motivo di riconoscimento insolito ligando esposto dal dominio SH3 betaPIX del mouse. Confronto con un altro SH3/peptide complesso dimostra che le modalit&agrave; di riconoscimento del dominio SH3 betaPIX mouse dovrebbe essere molto simile alla modalit&agrave; di associazione del ligando RXXK. Unica tasca idrofobica grande e planare possa contribuire alla promiscuit&agrave; del dominio SH3 betaPIX risultanti nelle sue molteplici funzioni biologiche.

Struttura cristallina del dominio N-terminale SH3 del mouse betaPIX, p21-attivato fattore di scambio chinasi interagenti.

&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9; betaPIX SH3 &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3001;&#x6B8B;&#x7559; 8 63 P21-&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x4EA4;&#x63DB;&#x56E0;&#x5B50;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E; x &#x7DDA;&#x56DE;&#x6298;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x7279;&#x5FB4;&#x3065;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7D50;&#x6676;&#x56DE;&#x6298; 2.0 A &#x3068;&#x69CB;&#x9020; (2) 21 &#x5B87;&#x5B99;&#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7; P3 &#x306B;&#x5C5E;&#x3059;&#x308B;&#x5358;&#x4E00;&#x6CE2;&#x9577;&#x7570;&#x5E38;&#x5206;&#x6563;&#x6CD5;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x6BB5;&#x968E;&#x7684;&#x306B;&#x5EC3;&#x6B62;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306F;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x30C8;&#x306A; &beta; &#x30D0;&#x30EC;&#x30EB;&#x3068;&#x3001;&#x5168;&#x4F53;&#x7684;&#x306A;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x4E00;&#x822C; SH3 &#x69CB;&#x9020;&#x306B;&#x4F3C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;X &#x7DDA;&#x69CB;&#x9020;&#x306E; betaPIX &#x306E;&#x7279;&#x5FB4;&#x7684;&#x306A;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x578B;&#x7834;&#x308A;&#x306A;&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x7D50;&#x5408;&#x306E;&#x9762;&#x306B;&#x305D;&#x306E;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3092;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9; &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9; betaPIX SH3 &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x914D;&#x7F6E;&#x306F;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9; betaPIX SH3 &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5C55;&#x793A;&#x7570;&#x5E38;&#x306A;&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x8A8D;&#x8B58;&#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5;&#x306E;&#x7406;&#x8AD6;&#x7684;&#x6839;&#x62E0;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5225; SH3/&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x3068;&#x306E;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9; betaPIX SH3 &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x8A8D;&#x8B58;&#x30E2;&#x30FC;&#x30C9;&#x304C; RXXK &#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x7D50;&#x5408;&#x30E2;&#x30FC;&#x30C9;&#x306B;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x985E;&#x4F3C;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4E00;&#x610F;&#x306E;&#x5E83;&#x3044;&#x3068;&#x5E73;&#x9762;&#x306E;&#x758E;&#x6C34;&#x6027;&#x30DD;&#x30B1;&#x30C3;&#x30C8;&#x306B;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7684;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306B;&#x8D77;&#x56E0; betaPIX SH3 &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x4E71;&#x4EA4;&#x306B;&#x8CA2;&#x732E;&#x3059;&#x308B;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x3002;

P21-&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x4EA4;&#x63DB;&#x56E0;&#x5B50;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9; betaPIX &#x306E; N &#x672B;&#x7AEF;&#x5074; SH3 &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x7D50;&#x6676;&#x69CB;&#x9020;&#x3002;

X-&#xC120; &#xD68C;&#xC808; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; betaPIX SH3 &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;, &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; 8-63 P21 &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD0A4; &#xAD50;&#xD658; &#xC694;&#xC778;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC758; &#xD2B9;&#xC9D5; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD06C;&#xB9AC;&#xC2A4;&#xD0C8; (2) 21 2.0 A&#xC640; &#xAD6C;&#xC870;&#xAC00; diffracted P3 &#xACF5;&#xAC04; &#xADF8;&#xB8F9;&#xC5D0; &#xC18D;&#xD55C;&#xB294; &#xB2E8;&#xC77C; &#xD30C;&#xC7A5; &#xBCC0;&#xCE59; &#xD68C;&#xC808; &#xBC29;&#xBC95;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;. &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xC804;&#xCCB4; &#xB098; &#xB780; &#xC77C;&#xBC18; SH3 &#xAD6C;&#xC870;&#xC640; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C;&#xC640; &#xC18C;&#xD615; &#xBCA0;&#xD0C0; &#xBC30;&#xB7F4; &#xC774;&#xB2E4;. X-&#xC120; &#xAD6C;&#xC870; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; betaPIX SH3 &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC744; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB294; betaPIX &#xD2B9;&#xC131; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0; &#xADF8;&#xB807;&#xAC8C; &#xD30C;&#xACA9;&#xC801; ligand &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xD2B9;&#xC774; &#xD55C; &#xB9AC;&#xAC04;&#xB4DC; &#xC778;&#xC2DD; &#xBAA8;&#xD2F0;&#xBE0C; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; betaPIX SH3 &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC804;&#xC2DC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xADFC;&#xAC70;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xB2E4;&#xB978; SH3/&#xD3A9;&#xD0C0;&#xC774;&#xB4DC;&#xC640; &#xBE44;&#xAD50; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; betaPIX SH3 &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC758; &#xC778;&#xC2DD; &#xBAA8;&#xB4DC; RXXK ligand &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xBAA8;&#xB4DC; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xC720;&#xC0AC; &#xB418;&#xC5B4;&#xC57C; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB3C5;&#xD2B9;&#xD55C; &#xD06C;&#xACE0; &#xD3C9;&#xBA74; &#xC18C;&#xC218; &#xD3EC;&#xCF13; betaPIX-SH3 &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC758; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559;&#xC801; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xB530;&#xB978; &#xC131;&#xD589;&#xC704;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; betaPIX, p21 &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; &#xC791;&#xC6A9; &#xAD50;&#xD658; &#xBE44;&#xC728;&#xC758; N &#xB2E8;&#xC790; SH3 &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC758; &#xACB0;&#xC815; &#xAD6C;&#xC870;.

El dominio de betaPIX-SH3 de rat&oacute;n, residuos 8-63 de la quinasa activada por P21 interactuando factor de cambio, se ha caracterizado por difracci&oacute;n de rayos x. Cristales pertenecientes al grupo de espacio P3 (2) 21 difractada 2.0 A y la estructura fue gradualmente por el m&eacute;todo de difracci&oacute;n an&oacute;mala sola longitud de onda. El dominio es un barril beta compacto con una conformaci&oacute;n general similar a la estructura general de SH3. La estructura de la radiograf&iacute;a muestra dominio SH3-betaPIX de rat&oacute;n vinculante la manera en que los amino&aacute;cidos caracter&iacute;stico de betaPIX lo hacen por una superficie de uni&oacute;n del ligando no convencionales. Esta disposici&oacute;n proporciona un an&aacute;lisis razonado para el motivo de reconocimiento de ligando inusual exhibido por el dominio de betaPIX-SH3 de rat&oacute;n. Comparaci&oacute;n con otro SH3/p&eacute;ptido complejo muestra que el modo de reconocimiento del dominio SH3-betaPIX rat&oacute;n debe ser muy similar al modo de uni&oacute;n ligando RXXK. El &uacute;nico bolsillo hidrof&oacute;bico grande y plano puede contribuir a la promiscuidad de dominio SH3-betaPIX resultando en sus m&uacute;ltiples funciones biol&oacute;gicas.

Estructura cristalina del dominio N-terminal SH3 de rat&oacute;n betaPIX, p21-activa interacci&oacute;n quinasa factor de intercambio.

Die Maus-BetaPIX-SH3-Dom&auml;ne, R&uuml;ckst&auml;nde 8-63 von P21-aktivierte Kinase Interaktion Austausch-Faktor, war durch R&ouml;ntgenbeugung charakterisiert. Kristalle geh&ouml;ren Raumgruppe P3 (2) 21 gebeugt 2.0 A und der Struktur wurde von der Einzel-Wellenl&auml;nge anomale Beugung-Methode eingestellt. Die Dom&auml;ne ist ein kompakter Beta-Fass mit einer insgesamt Konformation der allgemeine SH3-Struktur &auml;hnlich. Die x-ray-Struktur zeigt Maus-BetaPIX-SH3-Dom&auml;ne, die verbindlich der Art und Weise, in der die BetaPIX charakteristische Aminos&auml;uren f&uuml;r eine unkonventionelle Ligand-Bindung-Fl&auml;che tun. Diese Anordnung bietet eine Begr&uuml;ndung f&uuml;r das ungew&ouml;hnliche Ligand-Anerkennung-Motiv von Maus-BetaPIX-SH3-Dom&auml;ne ausgestellt. Vergleich mit einem anderen SH3/Peptid Komplex zeigt, dass der Anerkennung-Modus der Maus-BetaPIX-SH3-Dom&auml;ne sehr &auml;hnlich zu den RXXK-Ligand-Bindungsmodus sein sollte. Die einzigartige gro&szlig;e und planare hydrophobe Tasche kann zu der Promiskuit&auml;t BetaPIX-SH3-Dom&auml;ne, was seine vielf&auml;ltigen biologischen Funktionen beitragen.

Kristallstruktur von der N-terminalen SH3-Dom&auml;ne der Maus BetaPIX, p21-aktivierte Kinase-Interaktion Austausch Faktor.

X &#x5C04;&#x7EBF;&#x884D;&#x5C04;&#x6CD5;&#x7684;&#x7279;&#x70B9;&#x662F;&#x9F20;&#x6807; betaPIX SH3 &#x57DF;&#xFF0C;&#x6B8B;&#x7559; 8 63 &#x7684; P21 &#x6FC0;&#x6D3B;&#x6FC0;&#x9176;&#x4E92;&#x52A8;&#x4EA4;&#x6D41;&#x7684;&#x56E0;&#x7D20;&#x3002;&#x5355;&#x6CE2;&#x957F;&#x53CD;&#x5E38;&#x884D;&#x5C04;&#x6CD5;&#x5206;&#x9636;&#x6BB5;&#x5C5E;&#x4E8E;&#x7A7A;&#x95F4;&#x7EC4; P3 (2) 21 2.0 A &#x548C;&#x7ED3;&#x6784;&#x884D;&#x5C04;&#x6676;&#x4F53;&#x3002;&#x7D27;&#x51D1;&#x7684; beta &#x7248;&#x6BCF;&#x6876;&#x6574;&#x4F53;&#x5F62;&#x6001;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x4E8E;&#x4E00;&#x822C;&#x7684; SH3 &#x7ED3;&#x6784;&#x57DF;&#x3002;X &#x5C04;&#x7EBF;&#x7ED3;&#x6784;&#x663E;&#x793A;&#x9F20;&#x6807; betaPIX SH3 &#x57DF;&#x540D;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7684; betaPIX &#x7279;&#x6027;&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x8FD9;&#x6837;&#x505A;&#x5BF9;&#x4E8E;&#x975E;&#x5E38;&#x89C4;&#x914D;&#x4F53;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x66F2;&#x9762;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x5B89;&#x6392;&#x9F20;&#x6807; betaPIX SH3 &#x57DF;&#x6240;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA;&#x7684;&#x4E0D;&#x5BFB;&#x5E38;&#x7684;&#x914D;&#x4F53;&#x8BC6;&#x522B;&#x4E3B;&#x9898;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x7406;&#x7531;&#x3002;&#x4E0E;&#x53E6;&#x4E00;&#x4E2A; SH3/&#x80BD;&#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x6BD4;&#x8F83;&#x663E;&#x793A;&#x9F20;&#x6807; betaPIX SH3 &#x57DF;&#x7684;&#x8BC6;&#x522B;&#x6A21;&#x5F0F;&#x5E94;&#x8BE5;&#x662F;&#x975E;&#x5E38;&#x76F8;&#x4F3C;&#x7684; RXXK &#x914D;&#x4F53;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x6A21;&#x5F0F;&#x3002;&#x72EC;&#x7279;&#x7684;&#x5927;&#x548C;&#x5E73;&#x9762;&#x758F;&#x6C34;&#x53E3;&#x888B;&#x91CC;&#x53EF;&#x80FD;&#x6709;&#x52A9;&#x4E8E;&#x5BFC;&#x81F4;&#x5176;&#x591A;&#x79CD;&#x751F;&#x7269;&#x529F;&#x80FD;&#x7684; betaPIX SH3 &#x57DF;&#x7684;&#x6EE5;&#x4EA4;&#x3002;

N &#x7EC8;&#x7AEF; SH3 &#x57DF;&#x7684;&#x9F20;&#x6807; betaPIX&#xFF0C;p21 &#x6FC0;&#x6D3B;&#x6FC0;&#x9176;&#x4E92;&#x52A8;&#x4EA4;&#x6D41;&#x56E0;&#x5B50;&#x7684;&#x6676;&#x4F53;&#x7ED3;&#x6784;&#x3002;

The mouse betaPIX-SH3 domain, residues 8-63 of P21-activated kinase interacting exchange factor, has been characterized by X-ray diffraction. Crystals belonging to space group P3(2)21 diffracted to 2.0 A and the structure was phased by the single-wavelength anomalous diffraction method. The domain is a compact beta-barrel with an overall conformation similar to the general SH3 structure. The X-ray structure shows mouse betaPIX-SH3 domain binding the way in which the betaPIX characteristic amino acids do so for an unconventional ligand binding surface. This arrangement provides a rationale for the unusual ligand recognition motif exhibited by mouse betaPIX-SH3 domain. Comparison with another SH3/peptide complex shows that the recognition mode of the mouse betaPIX-SH3 domain should be very similar to the RXXK ligand binding mode. The unique large and planar hydrophobic pocket may contribute to the promiscuity of betaPIX-SH3 domain resulting in its multiple biological functions.

Crystal structure of the N-terminal SH3 domain of mouse betaPIX, p21-activated kinase-interacting exchange factor.

Le domaine de la souris betaPIX-SH3, r&eacute;sidus de 8 &agrave; 63 de P21-activated kinase interagissant facteur de change, a &eacute;t&eacute; caract&eacute;ris&eacute; par diffraction des rayons x. Cristaux appartenant au groupe d&#39;espace P3 (2) 21 diffract&eacute;e 2.0 A et la structure a &eacute;t&eacute; progressivement par la m&eacute;thode de diffraction anormale de simple-longueur d&#39;onde. Le domaine est un b&ecirc;ta-Canon compact avec une conformation g&eacute;n&eacute;rale semblable &agrave; la structure g&eacute;n&eacute;rale de SH3. La diffraction des rayons x indique le domaine de betaPIX-SH3 souris liant la mani&egrave;re dont les acides amin&eacute;s caract&eacute;ristiques de betaPIX faire pour une surface de liaison du ligand non conventionnelles. Cet arrangement fournit une justification pour le motif de reconnaissance ligand inhabituelle par domaine SH3-betaPIX de souris. La comparaison avec un autre SH3/peptide complexe montre que le mode de reconnaissance du domaine betaPIX-SH3 souris devrait &ecirc;tre tr&egrave;s similaire &agrave; la mode de liaison du ligand RXXK. La poche hydrophobe de grande et plane unique peut contribuer &agrave; la promiscuit&eacute; du domaine de betaPIX-SH3 r&eacute;sultant dans ses multiples fonctions biologiques.

Structure cristalline du domaine N-terminal SH3 de souris betaPIX, p21-activated kinase interagissant avec facteur de change.

&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x53CD;&#x5E94; (HSR) &#x662F;&#x4E00;&#x79CD;&#x65E0;&#x5904;&#x4E0D;&#x5728;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x673A;&#x5236;&#xFF0C;&#x5E94;&#x5BF9;&#x5404;&#x79CD;&#x5404;&#x6837;&#x7684;&#x538B;&#x529B;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x53CD;&#x5E94;&#x88AB;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x6D3B;&#x5316;&#x5242;&#xFF0C;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x56E0;&#x7D20; (HSFs&#xFF09;&#xFF0C;&#x662F;&#x5728;&#x4E25;&#x683C;&#x76D1;&#x7BA1;&#x4E0B;&#x7684;&#x5BB6;&#x5EAD;&#x3002;HSF &#x7ED3;&#x5408;&#x86CB;&#x767D; 1 (HSBP1) &#x62A5;&#x4E13;&#x95E8;&#x4E0E;&#x6D3B;&#x52A8;&#x4E09;&#x8054;&#x7684; HSF1&#xFF0C;&#x4ECE;&#x800C;&#x6291;&#x5236;&#x5176;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7A97;&#x4F53;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7684;&#x662F;&#x6D88;&#x6781;&#x7684; HSR &#x8C03;&#x8282;&#x5668;&#x3002;HSBP1 &#x5305;&#x542B;&#x4E03;&#x80BD;&#x91CD;&#x590D;&#x4E3B;&#x5E8F;&#x5217;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x5E76;&#x4E14;&#x88AB;&#x8BA4;&#x4E3A;&#x7559;&#x5728;&#x6EB6;&#x6DB2;&#x4E2D;&#x7684;&#x4E09;&#x805A;&#x4F53;&#x5F62;&#x5F0F;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A; M30I/L55P &#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x7684;&#x4EBA;&#x7C7B; HSBP1 1.8 A &#x5206;&#x8FA8;&#x7387;&#x4E09;&#x805A;&#x57DF;&#x7684;&#x6676;&#x4F53;&#x7ED3;&#x6784;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x6676;&#x4F53;&#x5F62;&#x5F0F;&#xFF0C;HSBP1 &#x7247;&#x6BB5;&#x7684;&#x6B8B;&#x7559;&#x7269; 6 53 &#x5F62;&#x5F0F;&#x8FDE;&#x7EED;&#x3001; 11 &#x8F6E;&#x957F;&#x87BA;&#x65CB;&#x3002;&#x87BA;&#x65CB; self-associates&#xFF0C;&#x5F62;&#x6210;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5E73;&#x884C;&#x3001; &#x5BF9;&#x79F0;&#x3001; &#x4E09;&#x5377;&#x7EBF;&#x5708;&#x87BA;&#x65CB;&#x5305;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x5C06;&#x6C47;&#x7F16;&#x6210;&#x4E8C;&#x805A;&#x4F53;&#x4E09;&#x805A;&#x4F53;&#x4EE5;&#x9762;&#x5BF9;&#x9762;&#x7684;&#x65B9;&#x5F0F;&#x3002;&#x89E3;&#x51B3;&#x65B9;&#x6848;&#x7814;&#x7A76;&#x8BC1;&#x5B9E;&#x91CE;&#x751F;&#x578B; HSBP1 &#x4E0E;&#x7ED3;&#x6676;&#x53D8;&#x4F53;&#x5171;&#x4EAB;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x7269;&#x7406;&#x7279;&#x6027;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E86; Ser31&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x5728;&#x758F;&#x6C34;&#x5BA4;&#x5185;&#x7684;&#x87BA;&#x65CB;&#x675F;&#xFF0C;&#x57CB;&#x5176;&#x6781;&#x6027;&#x4FA7;&#x94FE;&#xFF0C;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x7A33;&#x5B9A;&#x5F31;&#x73B0;&#x8D27;&#x3002;&#x8BED;&#x6587;&#x6559;&#x80B2;&#x5B66;&#x9662;&#x8FD9;&#x6E23;&#x66FF;&#x4EE3;&#x589E;&#x52A0;&#x7194;&#x5316;&#x6E29;&#x5EA6; 24 &#x6444;&#x6C0F;&#x5EA6;&#xFF0C;&#x7275;&#x8FDE;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E2A;&#x4FDD;&#x5B88;&#x7684;&#x4E1D;&#x6C28;&#x9178;&#x6B8B;&#x57FA;&#x7EF4;&#x6301;&#x5728; 31 &#x4F4D;&#x7F6E;&#x529F;&#x80FD;&#x76EE;&#x7684;&#x3002;

&#x4EBA;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x56E0;&#x5B50;&#x7ED3;&#x5408;&#x86CB;&#x767D; 1 &#x7684;&#x516D;&#x805A;&#x4F53;&#x7684;&#x6676;&#x4F53;&#x7ED3;&#x6784;&#x3002;

Heat shock response (HSR) is a ubiquitous cellular mechanism that copes with a variety of stresses. This response is mediated by a family of transcriptional activators, heat shock factors (HSFs), which are under tight regulation. HSF binding protein 1 (HSBP1) is a negative regulator of HSR and is reported to bind specifically with the active trimeric form of HSF1, thus inhibiting its activity. HSBP1 contains heptad-repeats in the primary sequence and was believed to stay in a trimer form in solution. We report the crystal structure of the trimerization domain of the M30I/L55P mutant of human HSBP1 at 1.8 A resolution. In this crystal form, the HSBP1 fragment of residues 6-53 forms a continuous, 11-turn long helix. The helix self-associates to form a parallel, symmetrical, triple coiled-coil helix bundle, which further assembles into a dimer of trimers in a head-to-head fashion. Solution study confirmed that the wild-type HSBP1 shares similar biophysical properties with the crystallized variant. Furthermore, we identified Ser31, which buried its polar side chain in the hydrophobic interior of the helix bundle, as a stability weak-spot. Substitution of this residue with Ile increases the melting temperature by 24 degrees C, implicating that this conserved serine residue is maintained at position 31 for functional purposes.

Crystal structure of the hexamer of human heat shock factor binding protein 1.

R&eacute;ponse au choc thermique (HSR) est un m&eacute;canisme cellulaire omnipr&eacute;sent qui fait face &agrave; une vari&eacute;t&eacute; de stress. Cette r&eacute;ponse est m&eacute;di&eacute;e par une famille de transcriptionnelles activateurs, facteurs de choc thermique (HSFs), qui rel&egrave;vent du r&egrave;glement serr&eacute;. HSF binding protein 1 (HSBP1) est un r&eacute;gulateur n&eacute;gatif de HSR et est signal&eacute; &agrave; lier sp&eacute;cifiquement avec la forme trim&egrave;re active de HSF1, inhibant ainsi son activit&eacute;. HSBP1 contient l&#39;Heptade-r&eacute;p&eacute;titions dans la s&eacute;quence primaire et &eacute;tait cens&eacute; rester sous une forme trim&egrave;re en solution. Nous rapportons la structure cristalline du domaine trim&eacute;risation du mutant M30I/L55P de la HSBP1 humaine &agrave; une r&eacute;solution de 1,8. Sous cette forme cristalline, la HSBP1 des fragments des r&eacute;sidus 6-53 formes une h&eacute;lice longue continue, 11-tour. L&#39;h&eacute;lice self-associates pour former un faisceau parall&egrave;le, sym&eacute;trique, triple h&eacute;lice de coiled-coil, qui assemble les autres en un dim&egrave;re de trim&egrave;res dans un mode t&ecirc;te-&agrave;-t&ecirc;te. Solution &eacute;tude a confirm&eacute; que le HSBP1 sauvage partage les propri&eacute;t&eacute;s biophysiques similaires avec la variante cristallis&eacute;e. En outre, nous avons identifi&eacute; des Ser31, qui a enterr&eacute; sa cha&icirc;ne lat&eacute;rale polaire &agrave; l&#39;int&eacute;rieur hydrophobe de la botte de l&#39;h&eacute;lice, comme une point faible de stabilit&eacute;. La substitution de ce r&eacute;sidu avec Ile augmente la temp&eacute;rature de fusion de 24 degr&eacute;s C, impliquant que ce r&eacute;sidu s&eacute;rine conserv&eacute;e est maintenu &agrave; la position 31 &agrave; des fins fonctionnelles.

Structure cristalline de l&#39;hexam&egrave;re de prot&eacute;ine obligatoire de chaleur humaine choc facteur 1.

Hitze-Schock-Reaktion (HSR) ist eine allgegenw&auml;rtige zellul&auml;ren Mechanismus, der mit einer Vielzahl von Belastungen meistert. Diese Reaktion wird durch eine Familie von transcriptional Aktivatoren, Hitze-Schock-Faktoren (HSFs), vermittelt die enge Verordnung unterliegen. HSF verbindliches Protein 1 (HSBP1) ist ein negativer Regulator der HSR und wird berichtet, dass speziell mit aktiven Trimere Form HSF1, somit Hemmung seiner T&auml;tigkeit zu binden. HSBP1 enth&auml;lt Heptad-Wiederholungen in der prim&auml;ren Sequenz und glaubte, in Trimer Form in L&ouml;sung bleiben. Wir berichten die Kristallstruktur der Dom&auml;ne Trimerisierung von der M30I/L55P-Mutante des menschlichen HSBP1 bei 1,8 A Aufl&ouml;sung. In dieser Kristall-Form die HSBP1 fragment von R&uuml;ckst&auml;nden 6-53 Formen eine kontinuierliche, 11-Zuges lange Helix. Die Helix self-associates um ein parallel, symmetrisch, Dreibettzimmer aufgerollte Spule-Helix-B&uuml;ndel zu bilden, die weiter in ein Dimer der Trimere in direkter Weise zusammenfasst. L&ouml;sung-Studie best&auml;tigt, dass die Wildtyp-HSBP1 mit der kristallisierte Variante &auml;hnliche biophysikalische Eigenschaften teilt. Dar&uuml;ber hinaus haben wir festgestellt, Ser31, die seine polare Seitenkette im hydrophoben Inneren der Helix-Bundle, als eine Stabilit&auml;t schwach-Ort vergraben. Substitution von diesem R&uuml;ckstand mit Ile steigt die Schmelztemperatur von 24 Grad C, zielbewu&szlig;t, die diese konservierten Serin-R&uuml;ckst&auml;nde an Position 31 funktionalen Zwecken verwaltet wird.

Kristallstruktur von Hexamer des menschlichen W&auml;rme Schock Faktor verbindliches Protein 1.

Risposta di scossa di calore (HSR) &egrave; un meccanismo cellulare onnipresente che affronta con una variet&agrave; di sollecitazioni. Questa risposta &egrave; mediata da una famiglia di Attivatori trascrizionali, fattori di scossa di calore (HSFs), che sono sotto stretto regolamento. HSF binding protein 1 (HSBP1) &egrave; un regolatore negativo di HSR ed &egrave; segnalato per legarsi specificamente con la forma attiva trimeric di HSF1, inibendo cos&igrave; la sua attivit&agrave;. HSBP1 contiene heptad-ripetizioni della sequenza primaria e credeva di stare in una forma di trimero in soluzione. Riportiamo la struttura cristallina del dominio trimerization di mutante M30I/L55P di HSBP1 umano a 1,8 risoluzione. In questa forma di cristallo, il HSBP1 frammento dei residui 6-53 forme un&#39;elica continua, 11-giro lunga. L&#39;elica self-associates per formare un fascio parallelo, simmetrici, tripla elica coiled-coil, che assembla ulteriormente in un dimero di trimeri in un testa a testa di moda. Soluzione studio ha confermato che il selvaggio-tipo HSBP1 azioni simili propriet&agrave; biofisiche con la variante cristallizzata. Inoltre, abbiamo identificato Ser31, che sepolto sua catena laterale polare all&#39;interno idrofobico del bundle elica, come una punto debole di stabilit&agrave;. Sostituzione di questo residuo con Ile aumenta la temperatura di fusione di 24 gradi C, implicando che questo residuo di serina conservata &egrave; mantenuto in posizione 31 per scopi funzionali.

Struttura di cristallo del hexamer di calore umano scosse fattore proteina obbligatoria 1.

&#x71B1;&#x30B7;&#x30E7;&#x30C3;&#x30AF;&#x5FDC;&#x7B54; (HSR) &#x306F;&#x3001;&#x3055;&#x307E;&#x3056;&#x307E;&#x306A;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x306B;&#x5BFE;&#x51E6;&#x3059;&#x308B;&#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30BF;&#x30B9;&#x7D30;&#x80DE;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306F;&#x8EE2;&#x5199;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x56E0;&#x5B50;&#x3001;&#x30BF;&#x30A4;&#x30C8;&#x306A;&#x898F;&#x5247;&#x306E;&#x4E0B;&#x3067;&#x306F;&#x71B1;&#x30B7;&#x30E7;&#x30C3;&#x30AF;&#x56E0;&#x5B50; (HSFs) &#x306E;&#x5BB6;&#x65CF;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5A92;&#x4ECB;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;HSF &#x7D50;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA; 1 &#xFF08;HSBP1&#xFF09; &#x306F;&#x3001;HSR &#x306E;&#x8CA0;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30BF;&#x3067;&#x3001;HSF1&#x3001;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x305D;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306A; 3&#x91CF;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x306B;&#x5177;&#x4F53;&#x7684;&#x306B;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3059;&#x308B;&#x5831;&#x544A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;HSBP1 &#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30DE;&#x30EA; &#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x306E; 7 &#x9023;&#x5B50;&#x30EA;&#x30D4;&#x30FC;&#x30C8;&#x3092;&#x542B;&#x307F;&#x3001;&#x4E09;&#x91CF;&#x4F53;&#x306E;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0; &#x30BD;&#x30EA;&#x30E5;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3067;&#x306E;&#x6EDE;&#x5728;&#x3068;&#x4FE1;&#x3058;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;M30I/L55P &#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306E; 1.8 &Aring; &#x5206;&#x89E3;&#x80FD;&#x306E;&#x4EBA;&#x9593; HSBP1 trimerization &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x7D50;&#x6676;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x7D50;&#x6676;&#x306E;&#x5F62;&#x3067;&#x3001;HSBP1 &#x30D5;&#x30E9;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x6B8B;&#x7559; 6 53 &#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x9023;&#x7D9A;&#x306F; 11 &#x756A;&#x306E;&#x9577;&#x3044;&#x30D8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x3002;&#x3089;&#x305B;&#x3093;&#x306F;&#x3001;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x63A5;&#x6226;&#x30D5;&#x30A1;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x30B9;&#x30C1;&#x30EC;&#x30F3;&#x30C0;&#x30A4;&#x30DE;&#x30FC;&#x306E;&#x30C0;&#x30A4;&#x30DE;&#x30FC;&#x306B;&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EB;&#x4E26;&#x5217;&#x3001;&#x5BFE;&#x79F0;&#x3001;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30EB; &#x30B3;&#x30A4;&#x30EB;&#x30C9; &#x30B3;&#x30A4;&#x30EB; &#x30D8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x306E;&#x30D0;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EB;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3059;&#x308B; self-associates &#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30BD;&#x30EA;&#x30E5;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x7814;&#x7A76;&#x306F;&#x91CE;&#x751F;&#x578B; HSBP1 &#x985E;&#x4F3C;&#x5E74;&#x4F1A;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D1;&#x30C6;&#x30A3;&#x7D50;&#x6676;&#x306E;&#x30D0;&#x30EA;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x5171;&#x6709;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x6975;&#x6027;&#x5074;&#x9396;&#x306E;&#x5185;&#x90E8;&#x3001;&#x30D8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x30D0;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EB;&#x306E;&#x758E;&#x6C34;&#x6027;&#x306F;&#x5B89;&#x5B9A;&#x30A6;&#x30A3;&#x30FC;&#x30AF; &#x30B9;&#x30DD;&#x30C3;&#x30C8;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x57CB;&#x846C; Ser31 &#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30A4;&#x30EB;&#x3068;&#x6B8B;&#x57FA;&#x306E;&#x7F6E;&#x63DB;&#x6EB6;&#x878D;&#x6E29;&#x5EA6; 24 &#x5EA6; C&#x3001;implicating &#x3053;&#x306E;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30BB;&#x30EA;&#x30F3;&#x6B8B;&#x57FA;&#x4F4D;&#x7F6E; 31 &#x3067;&#x6A5F;&#x80FD;&#x6027;&#x306E;&#x76EE;&#x7684;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x7DAD;&#x6301;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x304C;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x4EBA;&#x4F53;&#x71B1;&#x30B7;&#x30E7;&#x30C3;&#x30AF;&#x56E0;&#x5B50;&#x7D50;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA; 1 &#x306E; 6 &#x91CF;&#x4F53;&#x306E;&#x7D50;&#x6676;&#x69CB;&#x9020;&#x3002;

&#xC5F4; &#xCDA9;&#xACA9; &#xC751;&#xB2F5; (HSR)&#xB294; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xB300;&#xCC98; &#xD558;&#xB294; &#xC720;&#xBE44; &#xCFFC;&#xD130; &#xC2A4; &#xC140;&#xB8F0;&#xB7EC; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC751;&#xB2F5; transcriptional &#xD65C;&#xC131; &#xC81C;, &#xAF49; &#xADDC;&#xC815;&#xC740; &#xC5F4; &#xCDA9;&#xACA9; &#xC694;&#xC778; (HSFs)&#xC758; &#xAC00;&#xC871;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC911;&#xC7AC;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. HSF &#xC758;&#xBB34;&#xC801;&#xC778; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; 1 (HSBP1) HSR&#xC758; &#xBD80;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xD130; &#xC774;&#xBA70; &#xD2B9;&#xD788; HSF1, &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xADF8;&#xAC83;&#xC758; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD65C;&#xC131; trimeric &#xD615;&#xD0DC;&#xC758; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD560; &#xBCF4;&#xACE0; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. HSBP1 &#xAE30;&#xBCF8; &#xC21C;&#xC11C;&#xB85C; heptad-&#xBC18;&#xBCF5;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xACE0; &#xC194;&#xB8E8;&#xC158;&#xC758; &#xC0BC;&#xD569;&#xCCB4; &#xD3FC;&#xC5D0; &#xBA38;&#xBB3C; &#xAC83;&#xC73C;&#xB85C; &#xC54C;&#xB824;&#xC84C;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; HSBP1 1.8 A &#xD574;&#xC0C1;&#xB3C4; M30I/L55P &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC758; trimerization &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC758; &#xACB0;&#xC815; &#xAD6C;&#xC870;&#xB97C; &#xBCF4;&#xACE0;. &#xC774; &#xD06C;&#xB9AC;&#xC2A4;&#xD0C8; &#xD615;&#xD0DC;&#xB85C; HSBP1 &#xC870;&#xAC01; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC758; 6-53 &#xD615;&#xD0DC;, 11 &#xCC28;&#xB840; &#xC5F0;&#xC18D; &#xAE34; &#xB098;&#xC120;. &#xB098;&#xC120; &#xB354; &#xBA38;&#xB9AC; &#xD328;&#xC158;&#xC5D0; trimers&#xC758; &#xC774;&#xD569;&#xCCB4;&#xB85C; &#xC870;&#xB9BD; &#xD3C9;&#xD589;, &#xB300;&#xCE6D;, &#xD2B8;&#xB9AC;&#xD50C; &#xCF54;&#xC77C; &#xCF54;&#xC77C; &#xB098;&#xC120; &#xBC88;&#xB4E4;&#xC744; &#xD615;&#xC131; &#xD558;&#xB294; self-associates. &#xC194;&#xB8E8;&#xC158; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; HSBP1 &#xACB0;&#xC815; &#xBCC0;&#xC885; &#xC720;&#xC0AC; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xB9AC; &#xC18D;&#xC131;&#xC744; &#xACF5;&#xC720; &#xD655;&#xC778; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC57D;&#xD55C; &#xC790;&#xB9AC; &#xC548;&#xC815;&#xC131;&#xC73C;&#xB85C; &#xB098;&#xC120; &#xBC88;&#xB4E4;&#xC758; &#xC18C;&#xC218; &#xC131; &#xB0B4;&#xBD80;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xADF9; &#xC9C0; &#xC0AC;&#xC774;&#xB4DC; &#xCCB4;&#xC778; &#xB9E4;&#xC7A5; Ser31 &#xD655;&#xC778;. Ile&#xC640;&#xC774; &#xCC0C; &#xAEBC;&#xC774; &#xAE30;&#xC758; &#xB300;&#xCCB4; &#xC5F0;&#xB8E8; 24&#xB3C4; C&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC6A9;&#xC735; &#xC628;&#xB3C4; &#xC99D;&#xAC00; &#xBCF4;&#xC874;&#xB41C; &#xB5A0;&#xB4E4;&#xACE0; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC774; &#xC704;&#xCE58; 31&#xC5D0;&#xC11C; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801;&#xC778; &#xBAA9;&#xC801;&#xC744; &#xC704;&#xD574; &#xC720;&#xC9C0; &#xAD00;&#xB9AC; &#xD558;&#xB294;

&#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC5F4; &#xCDA9;&#xACA9; &#xC778;&#xC790; &#xC758;&#xBB34;&#xC801;&#xC778; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; 1&#xC758; hexamer&#xC758; &#xACB0;&#xC815; &#xAD6C;&#xC870;.

Respuesta a shock t&eacute;rmico (HSR) es un mecanismo celular ubicuo que enfrenta con una variedad de tensiones. Esta respuesta es mediada por una familia de activadores transcripcionales, factores de choque de calor (HSFs), que est&aacute;n bajo regulaci&oacute;n apretado. Prote&iacute;na de uni&oacute;n de HSF 1 (HSBP1) es un regulador negativo de HSR y se informa que se unen espec&iacute;ficamente con la forma activa del tr&iacute;mero de HSF1, lo que inhibe su actividad. HSBP1 contiene Heptada-repeticiones en la secuencia primaria y cre&iacute;a en una forma tr&iacute;mero en soluci&oacute;n. Divulgamos la estructura cristalina del dominio trimerization del mutante M30I/L55P de HSBP1 humanos en 1,8 una resoluci&oacute;n. En esta forma de cristal, el HSBP1 fragmento de residuos 6-53 formas una h&eacute;lice continua, 11-vuelta de larga. La h&eacute;lice se self-associates para formar un haz paralelo, sim&eacute;trico, triple h&eacute;lice coiled-coil, que m&aacute;s se monta en un d&iacute;mero de trimers de manera cara a cara. Soluci&oacute;n estudio confirm&oacute; que el salvaje-tipo HSBP1 comparte propiedades biof&iacute;sicas similares con la variante cristalizada. Adem&aacute;s, se identificaron Ser31, que enterr&oacute; su cadena lateral polar en el interior hidrof&oacute;bico del paquete de h&eacute;lice, como una punto d&eacute;bil de estabilidad. Sustituci&oacute;n de este residuo con Ile aumenta la temperatura de fusi&oacute;n por 24 grados C, implicando que este residuo de serina conservado se mantiene en la posici&oacute;n 31 fines funcionales.

Xueqi Liu

Molecular Biophysics and Biochemistry

Yale University

Single Particle Electron Microscopy Reconstruction of the Exosome Complex Using the Random Conical Tilt Method

Xueqi Liu

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Yale University

Single Particle Electron Microscopy Reconstruction of the Exosome Complex Using the Random Conical Tilt Method

Molecular Biophysics and Biochemistry